métodos de diagnóstico inmunológico in vivo e in vitro de ... · h. u. virgen de la arrixaca...

Dr. Rubén Félix ToledoH. U. Virgen de la Arrixaca

Murcia (España)Mayo de 2004

Métodos de diagnóstico Métodos de diagnóstico inmunológico inmunológico in vivoin vivo e e in in vitrovitro de de

enfermedades alérgicasenfermedades alérgicas

Dr. R. Félix ToledoDr. R. Félix ToledoMayo 2004Mayo 2004

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Métodos de diagnóstico inmunológico Métodos de diagnóstico inmunológico in in vivovivo e e in in vitrovitro de enfermedades alérgicasde enfermedades alérgicasØ Introducción§ Alergia§ Mecanismos de hipersensibilidad tipo I y IV

Ø Métodos in vivo§ PRUEBAS CUTÁNEAS:

• Hipersensibilidad inmediata y tardía

§ PROVOCACIONESØ Métodos in vitro§ CUANTIFICACIÓN DE IgE ( Técnicas

ISOTÓPICAS, ELISA, FLUORESCENCIA, QUIMIOLUMINISCENCIA,...)§ TEST DE LIBERACIÓN DE HISTAMINA§ DEGRANULACIÓN ÓPTICA DE BASÓFILOS

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IntroducciónIntroducción

¿Qué es la alergia?

Es la expresión clínica de la enfermedad atópica.

Incluye el asma, rinitis, eccema, alergia

alimentaria...







Alergenos

Submucosa

BB

Sensibilización

CPA

MHC-II

TCR

Vía aérea

Th2Th2IL-4IL-13

MM



Alergenos

Submucosa

Re- exposición

Vía aérea

BB

CPA

MHC-IITCR

Th2Th2IL-4IL-13

Efectosclínicos

inmediatos

Mediadores

HistaminaPGs, LTs,PAF, etc

EfectosclínicostardíosIL-3,5GM-CSF

E

MM







Hipersensibilidad Tipo IVHipersensibilidad Tipo IV

Epidermis Área paracortical de Ganglios linfáticos

Th1Th1

IFN?IL-2,3MIF

Activación y reclutamiento deMacrófagos: fagocitosis, lib.enzimas

MFG

Expresión de MHC-II y de moléculasDe adhesión ICAM-I en superficie deQueratinocitos y céls endoteliales

Liberación IL-1,6, GM-CSF

Activación y proliferación Linf T.Infiltrado LT, MFG, cels epitelioides,..

Edema, microvesículasEpidérmicasEccema de contacto



Etiología de enfermedades Etiología de enfermedades alérgicasalérgicas







IntroducciónIntroducción

Ø Importancia de la Historia Clínica

Ø Pilar básico para el diagnóstico alergológico.

Ø Antecedentes familiares y personales

Ø Clínica

Ø Repecusión de la enfermedad

Ø Factores desencadenantes














Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Ø HIPERSENSIBILIDAD INMEDIATA:§ PUNCIÓN. PRICK- TEST

§ CUTIRREACCIÓN

§ INTRADERMORREACCIÓN

Ø HIPERSENSIBILIDAD TARDÍA:§ PATCH- TEST

Ø PRUEBAS DE PROVOCACIÓN



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. Pruebas cutáneas.

Hipersensibilidad inmediataHipersensibilidad inmediata







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. PrickPruebas cutáneas. Prick

Ø PREVIA LIMPIEZA DE LA PIEL CON UN ANTISÉPTICO INCOLORO, MARCAR LOS PUNTOS DE LA PRUEBA CON ROTULADOR O CINTA ADHESIVA




Ø COLOCAR UNA GOTA DE CADA EXTRATO ALERGÉNICO GLICERINADO, Y DE LOS CONTROLES POSITIVO (HISTAMINA BASE 1/100) Y NEGATIVO (SALINO 0,9%) SOBRE LA PIEL.








Ø PASAR UNA LANCETA VERTICALMENTE EN RELACIÓN A LA SUPERFICIE CUTÁNEA A TRAVÉS DE LA GOTA DEL EXTRACTO HASTA EL INTERIOR DE LAS CAPAS DE LA PIEL, SIN SANGRAR, RETIRÁNDOLA AL CABO DE UN SEGUNDO (NORMAS DE LA EAACI).

Ø PARA EVITAR SANGRADO, SE UTILIZAN LANCETAS DE 1 mm.











Ø EN LA PUNCIÓN MODIFICADA LA LANZETA SE PASA TAMBIÉN A TRAVÉS DE LA GOTA DEL EXTRACTO Y SE INSERTA EN ÁNGULO DE 45º DENTRO DE LA PIEL. SEGÚN SE RETIRA, SE LEVANTA LIGERAMENTE LA PIEL, CON LO QUE SE PRODUCE UNA LIGERA LESIÓN CUTÁNEA, QUE DEBERÁSER LO SUFI- CIENTEMENTE SUPERFICIAL COMO PARA NO PRODUCIR HEMORRAGIA.











Ø TRAS ESPERAR 15 MINUTOS, MARCAR EL CONTORNO DE LA PÁPULA CON UN ROTULADOR DE PUNTA FINA.




Ø APLICAR CINTA ADHESIVA CON EL FIN DE QUE EL DIBUJO SE ADHIERA A ÉSTA Y RETIRARLA.

Ø PEGARLA EN LA HOJA DE PRUEBAS CUTÁNEAS, COMO DOCUMENTO PARA ARCHIVAR EN LA HISTORIA CLÍNICA DEL PACIENTE







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. CutirreacciónPruebas cutáneas. CutirreacciónØ LIMPIAR LA PIEL CON UN ANTISÉPTICO

INCOLORO.Ø DEJAR SECAR.Ø MARCAR LA ZONA CON UN ROTULADOR DE

PUNTA FINA.Ø REALIZAR UNA ESCARIFICACIÓN DE 2- 4 mm

DE LONGITUD EN LAS CAPAS SUPERFICIALES DE LA PIEL CON UNA LANCETA O AGUJA FINA, SIN PRODUCIR HEMORRAGIA.



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. CutirreacciónPruebas cutáneas. CutirreacciónØ COLOCAR UNA GOTA DE CADA EXTRACTO

A TESTIFICAR (SIN CONTAMINAR EL DOSIFICADOR DEL VIAL), O EL ALIMENTO FRESCO, Y UNA GOTA DE LOS CONTROLES POSITIVO (HISTAMINA BASE 1/100 Y NEGATIVO (SALINO 0,9%).







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. CutirreacciónPruebas cutáneas. CutirreacciónØ LEER A LOS 15 MINUTOS.

Ø DIBUJAR LA PÁPULA Y EL ERITEMA.

Ø TRANSFERIR A CINTA ADHESIVA.

Ø PEGAR LA CINTA ADHESIVA A LA HOJA DE PRUEBAS CUTÁNEAS.



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. Pruebas cutáneas. IntradermoIntradermo

Ø ESTIRAR LA PIEL DEL ANTEBRAZO CON UNA MANO Y CON LA OTRA SE COLOCA LA JERINGA EN ÁNGULO DE 45 GRADOS EN RELACIÓN CON LA SUPERFICIE DE LA PIEL, EL BISEL DE LA AGUJA DEBERÁ ESTAR DIRIGIDO HACIA LA PIEL.








Ø INSERTAR CUIDADOSAMENTE LA AGUJA, MOVIENDOLA HACIA DELANTE Y HACIA ARRIBA COMO SI SE QUISIERA LEVANTAR LA PIEL CON LA PUNTA DE LA AGUJA.

Ø DESCENDER EL CUERPO DE LA JERINGA, PARA ELIMINAR EL ÁNGULO FORMADO PREVIAMENTE CON LA SUPERFICIE CUTÁNEA.

Ø INTRODUCIR EL ANTÍGENO OBSERVANDO LA FORMACIÓN DE UNA PÁPULA QUE DEBERÁ ALCANZAR UNOS 3 mm DE DIÁMETRO, AL INYECTAR 0.02 ML DEL ALERGENO.

Ø COMO CONTROL POSITIVO SE UTILIZA HISTAMINA BASE AL 1/10.000).




VENTAJAS DE LA INTRADERMO CON RESPECTO AL PRICK- TEST

§ MAYOR SENSIBILIDAD.

§ POSIBILIDAD DE CUANTIFICAR LA REACTIVIDAD UMBRAL.

§ CONCENTRACIONES DE AG 100 VECES MENORES.







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. PrickPruebas cutáneas. Prick--IDID

VENTAJAS DEL PRICK CON RESPECTO A LA INTRADERMORREACCIÓN

§ MEJOR DEFINICIÓN POSITIVO- NEGATIVO.§ SEGURIDAD.§ RAPIDEZ.§ SIMPLICIDAD.§ MENORES MOLESTIAS PARA EL PACIENTE.§ MAYOR Nº DE TESTIFICACIONES SIMULTÁNEAS.§ MEJOR CORRELACIÓN RESULTADOS - Hª Clínica.§ EXTRACTOS MÁS ESTABLES.



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. Pruebas cutáneas.

Hipersensibilidad tardíaHipersensibilidad tardíaPatchPatch--testtest







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Pruebas cutáneas. Pruebas cutáneas. PatchPatch test.test.

Ø ABRIR EL SOBRE Y SACAR EL PAR-CHE.

Ø RETIRAR LA LÁMINA PROTECTORA DEL PARCHE. EVITAR TODO CONTAC-TO CON LOS ALERGENOS.




Ø COLOCAR EL PARCHE EN LA PARTE SUPERIOR DE LA ESPALDA DEL PACIENTE (APROXIMADAMENTE A 5 cm DEL CENTRO) DE FORMA QUE EL ALERGENO Nº 1 ESTÉSITUADO EN LA PARTE SUPERIOR IZQUIERDA DEL PANEL.

Ø ALISAR EL PARCHE DESDE EL CENTRO HACIA FUERA ASEGURANDO QUE CADA UNO DE LOS ALERGENOS ESTÉ EN CONTACTO CON LA PIEL.











Ø LOS PARCHES DEBEN SER RETIRADOS AL CABO DE 48 HORAS.

Ø LA REACCIÓN DEBE DE SER LEÍDA ENTRE 72 Y 96 HORAS DESPUÉS DE LA APLICACIÓN DEL TEST.

Ø SI SE HACE UNA LECTURA A LAS 48 HORAS, ÉSTA DEBE SER COMPLETADA CON UNA LECTURA A LAS 72-96 HORAS.








Ø INTERPRETACIÓN

? REACCIÓN DUDOSA, LIGERO ERITEMA.

- NEGATIVA.

+ POSITIVO DÉBIL (ERITEMA, INFILTRA-CIÓN, POSIBLES PÁPULAS).

++ POSITIVA (ERITEMA, INFILTRACIÓN,

POSIBLES PÁPULAS, VESÍCULAS).

+++ MUY POSITIVA (REACCIÓN BULBOSA).




SUSTANCIA EN g/cm²

1. SULFATO DE NÍQUEL 2002. ALCOHOLES DE LANA 10003. SULFATO DE NEOMICINA 2304. DICROMATO POTÁSICO 235. MEZCLA DE CAÍNAS 6306. MEZCLA PERFUMES 4307. COLOFONIA 8508. RESINA EPOXI 509. MEZCLA QUINOLEÍNAS 19010. BÁLSAMO DEL PERÚ 80011. DICLORHIDRATO DE ETILENDIAMINA 5012. CLORURO DE COBALTO 20








13. RESINA DE P-TERT-BUTILFENOL FORMALDEHÍDO 4014. MEZCLA PARABENOS 100015. MEZCLA CARBAS 25016. MEZCLA GOMAS NEGRAS 7517. KATHON CG 418. QUATERNIUM-15 10019. MERCAPTOBENZOTIAZOL 7520. PARA-FENILENDIAMINA 9021. FORMALDEHÍDO 18022. MEZCLA MERCAPTO 7523. TIOMERSAL 824 MEZCLA TIURAM 25



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocaciones Provocaciones







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.ProvocacionesProvocaciones

Ø NASALES

Ø BRONQUIALES

Ø CONJUNTIVALES

Ø ORALES



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocación nasalProvocación nasal

Ø Consiste en pulverización de 0,1- 0,2 mlde un extracto alergénico en la mucosa nasal del paciente. Esto puede hacerse mediante una jeringa o atomizador.

Ø Cuando la respuesta es positiva, el paciente experimenta estornudos (en los primeros 2 minutos), hidrorrea(generalmente siguiendo a los estornudos) y bloqueo nasal.








Ø Estos síntomas pueden

cuantificarse, contando el

número de estornudos

producidos, pesando las

secreciones producidas y

midiendo el grado de bloqueo nasal inducido.

Ø Esta respuesta debe ser comparada a la producida por una solución control (suero fisiológico), para comprobar su especificidad.




Ø INDICACIONES§ Para confirmar que una reacción cutánea positiva

es clínicamente relevante y que no se trata de una sensibilización subclínica.

§ Para descubrir alergia localizada en órgano de shock (en caso de que existan).

§ Cuando es imposible llevar a cabo una provocación bronquial, en pacientes asmáticos.

§ Como control en la inmunoterapia, investigación.







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocación bronquialProvocación bronquial

Ø Pueden realizarse nebulizando un extracto acuoso del agente incriminado en el árbol bronquial del paciente y comparando sus efectos con los producidos por una apropiada solución control.

Ø Debe descartarse que la obstrucción bronquial inducida, es producida por un efecto no específico o irritante.




Ø INDICACIONES§ En casos de asma ocupacional, para demostrar

de forma fehaciente, que el agente incriminado (alergeno o no alergeno) es la causa del asma.§ En caso de asmas inducidos por un agente poco

común, para poder confirmar la etiología. § En caso de asma por un alergeno común, pero

donde la historia y exploraciones complementarias no son concluyentes. Especialmente con vistas a realizar inmunoterapia. § En investigación.







Material necesarioMaterial necesario










Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocación conjuntivalProvocación conjuntival

Ø Es un test preciso, sencillo, rápido y con un bajo riesgo de reacciones sistémicas.

Ø Se comienza mediante la administración de una gota de suero fisiológico (como control) en el saco conjuntival.

Ø Si no se produce ninguna reacción se continúa con la administración de igual forma, una vez en cada ojo, de concentraciones crecientes de un extracto acuoso del antígeno problema.

Ø Las provocaciones se realizan a intervalos de 20 minutos, finalizándose en caso de positividad(hiperemia y prurito ocular)



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocación conjuntivalProvocación conjuntival

Ø INDICACIONES§ Diagnóstico de rinoconjuntivitis alérgicas.

Cuando existen dudas, a pesar de la historia y pruebas cutáneas, sobre la relevancia clínica de un determinado alergeno.

§ Valorar objetivamente respuesta a la inmunoterapia (investigación).







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in vivo.in vivo.Provocación oralProvocación oral

Ø ALIMENTOS§ Confirmar la responsabilidad del alimento

implicado. § Provocación Doble Ciego Controlada con

Placebo: se realiza con alimentos desecados (leche, huevo, harina de trigo) Si es necesario, los alimentos húmedos pueden liofilizarse y pulverizarse. Ni el médico ni el paciente conocen la composición.




Ø ALIMENTOS (II)§ A Simple Ciego: el observador (pero no el

paciente) sí conoce el producto que está administrando.

§ Abierta: en este caso tanto el observador como el paciente conocen el alimento con el que se está realizando la provocación.








Ø MEDICAMENTOS (I)§ Salvo excepciones, las pruebas cutáneas

tienen reducido valor en el diagnóstico de este problema.

§ El único medio de llegar a un diagnóstico o de descartar una alergia medicamentosa es la provocación por vía oral y/o parenteral, con dosis crecientes hasta llegar a dosis terapéuticas.




Ø MEDICAMENTOS (II)§ Para confirmar casos (aunque la historia

sea probable) de reacciones no severas por drogas (exantema fijo medicamentoso, fiebre medicamentosa no complicada, etc.) § Cuando el diagnóstico de sensibilidad es

improbable y el fármaco sospechoso es necesario (anestésicos locales) § Cuando el diagnóstico es probable y la

reacción fue amenazante de la vida, raramente está justificada la provocación.














Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..

Ø CUANTIFICACIÓN DE IgE:§ ISOTÓPICAS

§ ELISA

§ FLUORESCENCIA

§ QUIMIOLUMINISCENCIA

Ø TEST DE LIBERACIÓN DE HISTAMINA

Ø DEGRANULACIÓN ÓPTICA DE BASÓFILOS



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Cuantificación de IgECuantificación de IgE

Ø RIA (Radioinmunoanálisis)§ Marcador es isótopo radiactivo (RAST)

Ø EIA (Enzimoinmunoanálisis)§ Marcador es enzima unida covalentemente al Ag o

al Ac. Se mide la Actividad enzimática• Colorimétricos: se mide intensidad color

• Fluorométricos (FEIA): fluorescencia al ser expuesta a lux UV

• Luminiscentes: de reacción química o BQ

Ø Fase líquida o sólida (ELISA)







Desarrollo de la técnica CAPDesarrollo de la técnica CAP



Desarrollo de la técnica CAPDesarrollo de la técnica CAP

50 µl suero

Incubar 30Incubar 30±5±5min a 18min a 18--32ºC32ºC

LavadoLavado


LavadoLavado


LecturaLectura

50 µl Conjugado(Enzima+Anti-IgE)

50 µl soluciónde desarrollo 400 µl solución

de Stop







Medir la fluorescencia.Medir la fluorescencia.

Comparar con la curvaComparar con la curvaestándar de controles.estándar de controles.

Calcular la IgE específicaCalcular la IgE específicaen en kUkU/l./l.

50 50 µµl suerol suero

Incubar 30Incubar 30±5±5min a 18min a 18--32ºC32ºC LavadoLavado

Incubar 150Incubar 150±10±10min a 18min a 18--32ºC32ºC LavadoLavado

Incubar 10Incubar 10±1±1min a 18min a 18--32ºC32ºC LecturaLectura

50 50 µµl soluciónl soluciónde desarrollode desarrollo

400 400 µµl soluciónl soluciónde Stopde Stop

50 50 µµl Conjugadol Conjugado((Enzima+AntiEnzima+Anti--IgE)IgE)



Evaluación como clases de IgE Específica Evaluación como clases de IgE Específica

Muy alto= 1006Muy alto50 = x < 1005Muy alto17,5 = x < 504

Alto3,5 = x < 17,53Moderado0,7 = x < 3,52

Bajo0,35 = x < 0,71

Ausente o no detectable

< 0,350Nivel de AckU/lClase IgE







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Cuantificación de IgECuantificación de IgE

Ø En piel normal existen de 5.000 a 12.000 mastocitos/mm3 distribuidos sobre todo alrededor de los vasos

Ø Existen de 5.000 a 500.000 moléculas de IgE pegadas a cada mastocito, y pueden persistir entre 6 y 12 semanas

Ø La vida media de la IgE específica en sangre es de 2,5 días.

Ø PC >>> Sensibilidad que IgE específica



Inconvenientes CAPInconvenientes CAP--ELISAELISA

Ø Al ser la IgE extraordinariamente citofílica, sus resultados serán inferiores a los de las PC à Es un error conceptual pedir CAP- ELISA porque la PC haya sido negativa.

Ø PC negativa o dudosa, difícilmente de encontrará IgE específica en suero

Ø Bastante caras (sólo se deben realizar para un número limitado de alergenos)







Indicaciones de CAPIndicaciones de CAP-- ELISA (I)ELISA (I)

Ø Dermatitis severa (ej D.atópica) y generalizada, sin zonas cutáneas accesibles a PC

Ø Control negativo: positivo por dermografismo (>5mm) Excepcional con la generalización del prick

Ø Imposibilidad de suspender anti- H1 u otros fármacos que inhiban las PC: útil el control + (existen otras alternativas: esteroides, CGDS..)

Ø Confirmación de significación clínica de unas PC positivas



Indicaciones de CAPIndicaciones de CAP-- ELISA (II)ELISA (II)Ø Niveles de sensibilización extremadamente

altos, en que puedan ser peligrosas las PC (gran anafilaxia por betalactámicos, alimentos, venenos)

Ø PC – o dudosas para hongos, con Historia Clínica sospechosa de alérgica, y resto de PC repetidamente negativas para otros alergenos

Ø Alergenos tóxicos, insolubles en agua o sustancias altamente sensibilizantes

Ø Seguimiento de Inmunoterapia

Ø Investigación







Comparación de pruebas diagnósticasComparación de pruebas diagnósticas

Depende HRI nasal

Depende de exposición

Ojo anti-H1Ojo anti-H1Otros

EscasaExcelenteMenos buenaBuenaReproducibil.

EscasaExcelenteBast. buenaBuenaObjetividad

DifícilFácilAlgo difícilFácilEvaluación

Menos buenaMuy buenaModeradaBuenaEspecificidad

BajaModeradaAltaModeradaSensibilidad

PresenteNingunoPresenteMínimoRiesgo

Muy laboriosaCaraExige más

tiempoRápida y

no dolorosaEjecución

Provoc.

nasalCAPIntradermoPrick test



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Test de liberación de histaminaTest de liberación de histaminaØ Mediadores como la histamina son sustancias

biológicamente activas que se liberan del mastocito de los tejidos o de los basófilos sanguíneos cuando se produce la reacción antígeno- anticuerpo.

Ø Este test nos permite estudiar de una forma directa in vitro la respuesta alérgica y conocer la reactividad frente a diferentes alergenos.

Ø Mide por métodos fluorométricos o por radioinmunoensayo (RIA) la cantidad de histamina que se libera después de incubar leucocitos del paciente con un alergeno.







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Test de liberación de histaminaTest de liberación de histaminaØ Se incuban 750 microl de sangre periférica de

cada paciente (extraída en tubos con heparina) durante 30 minutos, a 37º C, en agitación, con 20 microl de los alergenos (excepto en los tubos control: total, basal y los incubados con anti- IgE)

Ø Tras añadir 1,6 ml de EDTA 1,5 mM a cada tubo se centrifuga a 1.600 rpm durante 30 minutos

Ø Se cuantifica la histamina presente en el sobrenadante, mediante una técnica fluorimétrica basada en la reacción de la histamina con el ortoftal- dialdehído (OPT) en un medio fuertemente alcalino.



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Test de liberación de histaminaTest de liberación de histamina

Ø Ambas sustancias forman un complejo fluorescente que se cuantifica empleando un sistema automático Technicon AutoanalyzerAAII® monocanal de flujo continuo.

Ø Con este método se cuantifica la histamina a una velocidad de 40 muestras por minuto.

Ø Se consideraron positivas aquellas liberaciones superiores al 20%.







Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Test de liberación de histaminaTest de liberación de histamina



Diagnóstico inmunológico Diagnóstico inmunológico in in vitrovitro..Test Test degranulacióndegranulación de basófilosde basófilos

Ø Existen determinados alergenos (alimentos y medicamentos), cuyos resultados en las pruebas in vitro no son en general tan concluyentes, en especial con los medicamentos.

Ø Consiste en un ensayo de estimulación de basófilos in vitro con los alergenos problema, para su estudio posterior mediante citometría de flujo








Ø La citometría de flujo es una técnica analítica adecuada para detectar basófilos activados (marcados con anticuerpos monoclonales) cuantificando la fluorescencia emitida por estos.




Ø Valora el porcentaje de basófilos que degranulan después de ponerlos en contacto con un alergeno, comparando con valores basales.

Ø Ha demostrado ser útil para el DX de alergia a neumoalergenos, alimentos y sobre todo de medicamentos (Beta-lactámicos)








Ø Es imprescindible establecer el punto de corte de positividad para cada tipo de alergeno

Ø Técnica todavía no generalizada.



ConclusionesConclusiones








Ø Principales mecanismos implicados tipos I y IV de Gell y Coombs

Ø Principales entidades clínicas: rinitis, asma, urticaria- angioedema, dermatitis

Ø Gran importancia de la Historia ClínicaØ Tests in vivo: PC, Patch- test y

provocaciones§ La más utilizada Prick- test: rápido, sencillo.

Barato y mayor sensibilidad que CAP




Ø CAP- ELISA sólo indicaciones precisas. Más cara que prick

Ø Test de liberación de histamina: poco uso

Ø Test de degranulación de basófilos:§ Todavía no extendido.

§ Mayor importancia en medicamentos





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