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Hémoglobinopathies du phénotype à la génétique

F.Kaddari (Laboratoire de Biochimie et d’Immunologie CH de Saint Denis)

K. Moradkhani (Service de Génétique médicale CHU de Nantes)

1

ACNBH

ODPC N°1495

DECLARATION D’INTERETDANS LE CADRE DE MISSIONS DE FORMATION

REALISEES POUR L’ACNBH

44ème Colloque National des Biologistes des HôpitauxNantes, 23‐25 septembre 2015

Dr F. KADDARI et Dr K. MORADKANI Exerçant au CH de Saint‐Denis et au CHU de Nantes déclarent sur l’honneur

ne pas avoir d'intérêt, direct ou indirect (financier) avec les entreprises pharmaceutiques, du diagnostic ou d’édition de logiciels susceptible de modifier mon jugement ou mes propos, concernant le DMDIV et/ou le sujet présenté.

3

Structure de l’hémoglobine et organisation des gènes de globine

HbA α2β2 (97 %) HbA2 α2δ2 (2–3 %) HbF α2γ2 (<1 %)

H.WACJMAN Hémoglobines et Hémoglobinopathies

Chromosome 11 (famille β)

ε Gγ Aγ δ β5’ 3’

ξ α1 α2 θ1

Chromosome 16 (famille α)

5’ 3’

F.Kaddari CNBH Nantes 25/09/2015

Les Hémoglobinopathies

Production d’une Hb de structure anormale Mutants α, β, δ ou γ Variants de l’Hémoglobine

Défaut de production d’une chaîne de globine α, β ou δ Thalassémies

Association Variant de l’Hb + ThalassémieVariants de l’HbThalassémies

Syndromes drépanocytaires majeurs en Afrique

Syndromes thalassémiques en Asie et dans le Bassin Méditerranéen

Affections génétiques, autosomales récessives

Hémoglobinopathies sévères = problème de santé public


Circonstances de recherches d’une hémoglobinopathie

Diagnostic étiologique d’anomalies hématologiques biologiques et/ou cliniques :anémie, microcytose, polyglobulie, anomalies morphologiques des GR, signes d’hémolyse, asthénie, cyanose…

Dépistage en prévention des hémoglobinopathies sévères : diagnostic prénuptial ou prénatal, enquêtes familiales

Identification d’un variant de découverte fortuite : tracé chromatographique anormal lors du dosage de l’HbA1c


Démarche diagnostique

Diagnostic d’une hémoglobinopathie

Données anamnestiquesL’origine ethno-géographique, l’âge,

la grossesse, transfusion, les données pathologiques et thérapeutiques

Examens biologiques de basesL’hémogramme (Hb, VGM, CMH, aux de réticulocytes,

morphologie des GR), le bilan martial et les paramètres d’hémolyse

Analyse biologique de l’hémoglobine

Techniques de première intentionTechniques spécialisées de seconde intention

6F.Kaddari CNBH Nantes 25/09/2015

Les techniques de première intention (1)

Les techniques séparatives qualitatives



Les techniques séparatives quantitatives

Electophorése capillaire (EC) Chromatographie liquide haute performance (HPLC)

Techniques automatisées Quantification des fractions de l’Hb (diagnostic des thalassémies mineures) Séparation d’une majorité de variants en particulier les plus fréquents 14 zones de migrations pour EC Plusieurs fenêtres d’élution hautement reproductibles pour HPLC Identification présomptive des variants les plus fréquents Migration (EC) ou élution (HPLC) de variants différents au niveau d’une même zone (EC)

ou d’une même fenêtre (HPLC)8


1 2 31 Patient S/S 2 Patient A/S 3 témoin normal


Indispensable en présence d’une hémoglobine anormale

Spécifique de l’HbS : précipitation de l’HbS désoxygénée en solution saline

Réalisation simple

Faux positifs (HbC Harlem….) et faux négatif si taux d’HbS <20%

Le test d’Itano ou test de solubilité


Variants d’Hb ITANO positifs

HbS-CamerounHbS+Hb Agenogi

HbC-Zinquinchor

HbS+Hb Dhofar

HbC-Harlem

HbS+Hb D Korle Bu

HbC-Ndjamena

HbS+Hb Howick

HbS-South End

(HbS+Hb Yamagata)

HbS-Providence

(HbS+Hb Providence)Hb S-San MartinHbS+Hb non décrite

HbS-ClichyHbS+Hb Rio Grande

HbS-Jamaica PlainHbS+Hb Loves Park

HbS-TravisHbS+Hb non décrite

L’association en cis d’une mutation avec celle de l’HbS peut modifier les propriétés éléctrophorétique ou chromatographique. Mais l’insolubilité (ITANO positive) est un caractère constant.

Test de solubilité ITANO

Stratégie de diagnostic des hémoglobinoptahiesRecommandations groupe de travail CNBH, Poster 37ème Colloque (Clermont Ferrand)

CLHP + Electro capillaire ou pH 8,6 ou IEF + NFS + bilan martial

Profil normal Profil anormal

Interprétation en fonction du contexte clinique et biologique

Anomalies quantitatives

Anomalies qualitatives

Rendu du résultat

Interprétation en fonction des données hématologiques

Test d’Itano

Laboratoire spécialisé pour confirmer le diagnostic ou éventuellement réaliser le diagnostic génotypique


Drépanocytose

α-thalassémie

β-thalassémie

Techniques et Stratégies de caractérisation moléculaire des hémoglobinopathie

IEF polyacrylamide

CAE & RP-HPLC

Electrophorèse d’Hb, étude fonctionnelle, …

Comparaison avec les bases de données (>500 variants)

Hb presumptively identifiedMatch with several Hbs or unknown

HémolysâtIEF agarose CE-HPLC

-présence d’Hb anormale

Test de solubilitéElectrophorèse à pH acideOrigine ethnique

• presence of an abnormal Hb•quantification of the Hb fractions

Variant d’Hb fréquents:HbS, HbC, HbE, Hb O-Arab, … Variants rares

IEF comigration with this Hb,mass spectrometry,…

Hb IDENTIFIED

Mass spectrometryStructural study, DNA sequecing

Hb IDENTIFIED

IEF polyacrylamide

CAE & RP-HPLC










Hb IDENTIFIED


Hb IDENTIFIED

Capillaryelectrophoresis ?

IEF polyacrylamide

CAE & RP-HPLC










Hb IDENTIFIED


Hb IDENTIFIED

Capillaryelectrophoresis ?

ESI-MS ?

Temps d’élution de qq variants de globinesDr Henri Wajcman

10 20 30

Link

öpin

g

Tsuk

umi

M S

aska

aton

Tend

e, V

illep

aris

is,

Bre

nt

Taco

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I-To

ulou

se, B

eth

Isra

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K-W

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, G-C

oush

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ri M

ondo

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P G

alve

ston

, D P

unja

b,C

amde

n, C

rete

il, D

Iran

J Chi

cago

Bar

celo

ne

G A

10 20 28 35

Hème

Weatherall DJ. (2001) Nat Rev Genet.

Origine ethno-géographique et β-thalassémies

Weatherall DJ. (2001) Nat Rev Genet.

Origine ethno-géographique et α-thalassémies

‐101 C>T, ‐87 C>G‐30 T>A, c5 –CTHB C, Hb Sc6 ‐A, c8 –AAc8/9 +G, c15 G>AC27 G>T, IVS1‐1G>AIVS1‐5G>C, IVS 1‐6 T>CIVS 1‐110 G>A, IVSI‐116 T>G, IVSI‐130 G>C, C39 C>T, c 44 –C, IVS 2‐1 G>A, IVS 2‐745 C>G, IVS 2‐848 C>A

Kit IME, kit FRA

‐31 A>G, ‐29 A>G,‐28 A>G cap +1A>CInit T>C, c8/9 +G,c15 G>A, c17A>Tc18 A>G c26 G>A (Hb E)c27_28 +C IVS1‐1G>T, IVS1‐5G>C, c41_42 ‐TTCTc43 G>T c71_72 +Ac89_90 ‐GT c90G>Tc95 +A IVS 2‐1 G>A, IVS 2‐654 C>T c121 G>T

c5 – CT -90 Tc8/9 + G -88 A/Tc30 C/A -87A/T/G1.1 A -86 A1.2 A/G -31 C1.5 C/T/A -30 A/C1.110 A c6 -A1.116 G c8 -AA1.130 C c27 Tc39 T 1.6 A/C

β-thal >50 mutants

c37 A 2.850 G/Cc44 –C AACAAAc54 –T AATGAAc59 –A AATAAGc7 –C -101 T2.1 A -92 T2.705 C UTR +10 -T2.745 G +33 G2.843 G 2.844 A/GDel (db)° siciDel (db)° Span

MED SEA

α-thal >50 mutants

c41-42 –TTCTc17 Tc19 G (Hb Malay)1.1 Tc26 A (Hb E)

-29 G-88 Tc15 Ac24 A2.849 GDel PHHF I Ghanaian

+ ceux du SEA… + allèles africains

Technique d’hybridation inverse (RDB) :Principe de l’hybridation spécifique surbandelettes d’amplicons obtenus par unePCR Multiplex

Kits commerciaux Viennalab : hybridation inverse (RDB)

β-globine MED α-globine mut ponctuelle et délétion

α- et anti α-thal : « GAP-PCR »

x zzx yy

12

x zzx yy

2 1

‐3.7«2‐1»

jusqu’à 70 % HEZen Afri. de l’Ouest

RC‐ «Z» box

Recherche thal par PCR

Tripli anti ‐3.7#1% chez les caucasiens

asympto chez HEZ??

2 1«1‐2»

nal nalnalnal‐3.7

hoz‐3.7

hez

‐3.7

+

( )

( )

B

A

2,1 Kb

A

1,9 KbC

C.Dodé, Br J Haematol. 1993 Jan;83(1):105‐11

C2 1A A

BAC : 2,1KbAB : 1,9 Kb

Dr Serge Pissard, CHU Henri Mondor

Cas rares : délétions atypiques et autres anomalies

0

0,5

1

1,5

0 10 20 30 40 50

délétion

0

0,5

1

1,5

0 10 20 30 40 50

Témoin normal

MLPA locus alpha : délétion rare et atypique du locus alpha (kit commercial : MRC Holland)

ADNADN

5’ probe 3’ probe

1 : hyb de 2 « demi sondes »sur l’ADN

ADN

5’ probe 3’ probe

2 : ligation SI hyb parfaite 3 : PCR « 1/2 quantitative » avec amorcesuniverselles fluorescentes des sondes ligées4 : Analyse de fragments sur un séquenceur

0 1 0 0 2 0 0 3 0 0 4 0 0 5 0 0 6 0 0 7 0 0 (kb )

1 2 3 4 5 6 7 -1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 2 8 2 9 3 0 3 1 3 2 3 3 3 4 3 5

d e n o vo - - M K (1 )

9

9

( ) L (1 )D u tch I I (4 )

- - G Z (1 )d e n o vo - - A B (1 )

( )Z W (2 )

- - O H (3 )

1 6 p 1 3 .3

L 1 L 0 2 in te r-H V R 1 2 1 2 1 3 ’H V R

7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8

U n kn o w n G - B (1 ) - - S A ? (2 )

D u tch I ? (2 )

U n kn o w n A .W . (1 )

1 0 k b

-g lo b in g e n e c lu s te r

36 sondes sur le locus


Drépanocytose

Alpha thalassémie

Bêta thalassémie

Techniques et Stratégies de caractérisation des hémoglobinopathie

HbS

CE-HPLC (BioRad Variant II)

HbA

HbA HbS

HbA2

Elément du diagnostic de l’HbS

IEF

HbAHbF

HbS

HbA2

électrophorèse Capillaire (Sébia) Électrophorèse à pH acide

Test de solubilité ITANO

Principaux Syndromes drépanocytaires majeurs

1- Homozygotes HbS/HbS2- Hétérozygote composites l’HbS / -thalassémie3- HbS + Hb favorisant la polymérisation de l’HbS:

- HbS / HbC ++++- Hb S / Hb D Punjab (rare)- Hb S / Hb O-Arab (rare)

HbS dominante:4- HbS-Antilles (S dominante) β6Glu>Val+β23Val>Ile5- HbS-Oman (S dominante) β6Glu>Val+β121Glu>Lys

A/S Syptomatique 6- Hétérozygotie A/S associée à une triplication α7- Hétérozygotie A/S associée à un déficit en PK

Chez un homme de 45 ans d’origine africaine présentant un SDM :- Anémie hémolytique [10.4 g/dl Hb, VGM 81,TCMH 26, Rétic (3.6%), IDH 18%, Haptoglobine effondrée, LDH - Présence d’hématies en Faux et de cellules denses-Crises douloureusesProfil d’Hb (IEF) montre paradoxalement une hétérozygotie A/S.

HbS

HbAHbF

HbFAc

HbF

Présence des cellules denses

HbA

HbS

HbA2

IEF : Profil A/S!!!

Homozygotie S associée à des variants d’alpha globine, Faux diagnostic A/S.

Étude de la densité érythrocytaire

A/S

HbS

HbAHbF

HbFAc

HbF

βS

βS

βSβS / αα

-α

βSβS / αα βSβS / αJαJ

-αJ

βSβS / αJαJ

Étude moléculaire:-3.7 homozygote

Étude de l’hémoglobine a mis en évidence une Homozygotie S associée à une hétérozygotie J-Broussais [α90 Lys>Met] sur un des allèles α+-thal

A/S

Interprétation des résultats en fonction d’ensemble d’éléments clinico-biologiques; test ITANO et la densité érythrocytaire, indices du globule rouge, bilan d’hémolyse et …, Signes & symptômes

Drépanocytose

Alpha thalassémie

Bêta thalassémie


Les Chaînes de Globines et Hémoglobines Normales

α2 β2 : Hb A = 96%α2 δ2 : Hb A2 < 3% (prom défectif + affinité moins élevé pour α que β)α2γ2 : Hb F < 1% après 1 ans (répression des gènes fœtaux)

association alpha /beta

4 gènes alpha adultes (2 > 1) 2 gènes beta adultes ( + delta, +/- gamma)


Chr. 16

Chr. 11

β

Hb 11 - 13 g/dL, Hb A2 2-2.5 %, TCMH 20 - 23 pg, VGM 65 - 70 fL

α2 α1

βα2 α1

β

Hb 12.5 - 15 g/dL, Hb A2 2-2.8 %, TCMH 25 - 28 pg, VGM 78 - 88 fL

α2 α1

βα2 α1

ββ

β

α2 α1

ββ

α ββ α

Hb 10 g/dL, A2 0.5-1.8% HbH 15-20 %, TCMH 20 - 22 pg, VGM 60 - 65 fL, α / β = 0.4Nécessité d’un suivi médical régulier

Hb Bart’sHb H

βα ββ α

Hb 12 - 16 g/dL, Hb A2 2-3 %TCMH 27-32 pg, VGM 80-100 fL

α2 α1

Normal +-thal hétérozygote ou -thal-2 ou -thal silencieuse

Hémoglobinose H ββ

ββα-thal-1, thal mineur +-thal

homozygote ou 0-thal hétérozygot

Hydrops Fœtalis

Effet d’une thalassémie > excès croissant de chaines et/ou γ

Thalassémie : une question d’équilibre

moins 1 : - / Hypochromie compétition δ/β

moins 2 : - / -: - - /

Anémie Hypochrome,A2 basse, Hb Barts’ (γ4) à la naissance

moins 3 : - / - - Anémie sévère + A2 basse, + Hb Barts’ (γ4) ++ à la naissance + Hb H (β4) période adulte

moins 4 : - - / - - Hydrops foetalis

Chr. 16

Chr. 11


Thalassémie : une question d’équilibre

Effet d’une thalassémie > Excès de chaines α-globine

moins 1 → anémie hypochrome avec A2 > 3,5 % jamais > à 10 % ( variant), +/- augmentation d’HbF

moins 2 → anémie «sévère» hypochrome avec A2 normale et le reste de l’Hb F

Chr. 16

Chr. 11


Différents Taux de l’HbA2

Traitement viralCarence vitaminique

hyperthyroïdieβ-thal mineur

NormalAlpa thalassémie

Anomalie δ-globine Hémoglobinose H

HbA2 2.2

HbA1C 5.2

HbF 0.8

GR 6.2

Hb 13.6

VGM 66

TCMH 20

BioMol : β0 thalassémie (β39Glu>Stop)

Exploration à visée étiologique d’un microcytose non ferriprive.Absence d'anomalie apparente de l'hémoglobine dans les systèmes explorés. Ce résultat n’exclut pas une thalassémie.Étude moléculaire en cours.

Tableau de microcytose HbA2 à 4.8%

HbA2 1.5

HbA1C 5.8

HbF 0.8

Paramètres du GR Nx

Homme de 22 ans originaire de Sardaigne

Anomalie de δ globine

γ δ β

δ β

ζ α2 α1

ζ α2 α1

Bêta thalassémie

masquée

BioMol : β0 thalassémie (β39Glu>Stop)

γ

Aggravation de tableau clinique liée aux triplication α-globine

IVS 1‐5 G>C

IVS 1‐5 G>Chez tripli

Etude « MLPA »

I 1

1,5 X 1,5 X

I 2

Hb A2 = 5.3Hb F = 2.3Hb : 9 g/dl VGM : 66 fLTransfusion en cours de gross

β‐thal Intermédiaire

Hb : 8.6 /dl VGM : 76 fLSous HydroxyuréeTransfuso – dépendant

β‐thal Majeure

Hb A2 = 3.1Hb F = 0.4NFS : Nal

I 1 I 2

II 1

: 2,1Kb: 1,9 Kb

Tripli anti ‐3.72 1«1‐2»

B

A

2,1 KbB

Exemple de la Famille S. d’origine Pakistanaise

1 2 AA

CRecherche de triplication alpha

I 1 I 2II 1hez tripli hez tripli

II 1

2X

HOZ tripli : 6 gènes alpha


GR 5.3

Hb 15.3

VGM 86.8

TCMH 28.9

Taux d’HbA2 très élevé chez un sujet asiatiqueNFS normal, suivi pour un diabète

Suspicion d’une Anti-Lepore

Amplification par les amorces en 5’-UTR du gène globine et en 3’-UTR du gène globine donne un amplifiat de 1945 bp. Et séquençage:

Hb Lepore et Anti-Lepore : Hémoglobines recombinées

Hb Lepore est formée lors d’un crossing-over inégal entre les gènes et. La synthèse de la protéine recombinée est sous le contrôle dupromoteur du . La plus fréquente est l’Hb Lepore Boston.

βδ- fusion βAnti-Lepore

β+ thal

Hb Lepore

δβ-fusion

Compte tenu de l’étude familiale et de la transmission verticale du trait,profil de l’Hb plutôt compatible avec une δβ0-thal hétérozygote

HbA2 2.5

HbF 0.2

NFS Normale

Famille Italienne

BioMol : Délétion emportant δ et β globine δ β

δ β

GR 5.67

Hb 12.4

VGM 66

A2 2.5

F 6.2

GR 5.35

Hb 11.7

VGM 63

A2 2.3

F 5.8

GR 5.43

Hb 11.5

VGM 62

A2 2.6

F 6.414 ans

12 ans

γγ

HbA2 2

HbF 16.8

GR 3.82

Hb 7.1

VGM 59.2

TCMH 18.6

BioMol : Alpha bêta gamma normale

Exploration à visée étiologique d’une anémie microcytaire non ferriprive. Une gamma-delta-bêta thalassémie est possible. Etude moléculaire en cours.

Profil d’Hb normalNFS normale

Profil d’Hb NormalNFS Normale

2 mois

Gγ Aγ δ β

Gγ Aγ δ β

BioMol : Alpha bêta gamma normale

BioMol : une délétion emportant du LCR jusqu’à 3’UTR du gène βglobine

Profil d’Hb: A/S et NFS normaleGR 5.67

Hb 11.5

VGM 82

Ferritin 58

A2 1.8

F 30%

33 ans

Enceinte de 7 mois

Persistance héréditaire de l’hémoglobine fœtale. Étude moléculaire en cours.

BioMol : délétion de type PHHF (type II) Ghanéenne avec normalité du statut des gènes α-globine

PAS d’indication de DPN

Absence d’HbA et HbA2 sans anémie mais un tableau microcytaire. En l’absence de carence martiale, ce tableau correspondre à une PHHF

délétionnelle homozygote associée à une alpha thalassémie.

HbA2 1,7

HbF 29

Famille magrebine

BioMol : PHHF-3 emportant ᴪβ, δ et β globine hétérozygote chez les parents et homozygote chez leur fille, α+-thal hétérozygote (mère et fille)

δ β

δ β

A2 1,7

F 32

GR 5.78

Hb 14,3

VGM 69

A2 0%

F 83+14%

A 0%

γγ

26ans

58ans

56ans microcytosenormocytose

PHHF délétionnelle : Normochromie et NormocytoseTaux d’HbF supérieure à 20% et taux d’HbA2 diminué

β0-thalassémie : Hypochromie et microcytoseTaux d’HbF inférieur à 20% et taux d’HbA2 normal ou diminué

HbA2 et HbF augmentées. Très vraisemblablement une β-thal associée à une α-thal.

Simple Hétérozygote A/S

BioMol : β+-thal (HBB :c.-138C>T) associée à une α+-thal (α-3.7)

GR 5.8

Hb 11.9

VGM 88

A2 6.2

F 4.8%

21 ans

Enceinte de 6 mois

Les causes de taux d’Hb A2 abaissé:

Carence martiale chez un patiente caucasienne 39 ans

GR 4.3 Fer 6.3

Hb 7.5 Ferritine 16

VGM 62 TRF 3.51

TCMH 17Récepteur solubleTRF

28.5 (9.5‐21)

CCMH 28 Coeff Saturation 7.2%

IDH 19.2% Bili Totale 4

Plqt 197 Bili C 1

HbA2 1.9

HbA1C 5.6

HbF 1.2

Taux d’hémoglobine A2 abaissé très probablement lié à une carence martiale. Étude à refaire après la correction complète

de celle-ci pour rechercher une alpha thalassémie.

GR 5.6 IDH 13%

Hb 16.3 Ferritine 78

VGM 86 TRF 2.25

Taux d’HbA2 abaissé, sans microcytose et ni hypochromie. Probable δ-thal sans traduction clinique.

HbA2 1.5

HbF 0.1

δ β

δ β

γγ

GR 5.1 TCMH 29

Hb 14.9 Rétic 1%

VGM 89 IDH 14%

Présence d’un variant de δ-globine sans traduction clinique.

HbA2 1.1

Variant HbA2 1.6

HbF 0.6

HbA2Variant A2

Drépanocytose

Alpha thalassémie

Bêta thalassémie


HbA2 1.5

HbF 0.2

GR 4.35

Hb 13.1

VGM 76

TCMH 25

Exploration à visée étiologique d’un tableau microcytaire.Taux d’HbA2 abaissé sans carence martiale. Une δ-thalassémie hétérozygote peut expliquer le taux d’HbA2. Alpha thalassémie probable.

HbA2 1.6

HbF 0.9

Famille Asiatique

HbA2 3.1

HbF 0.2

Anomalie de δ globine

δ β

δ β

ζ α2 α1

ζ α2 α1BioMol : α-3.7 hétérozygote

9 ans

γγ

ζ α-3.7

microcytose

HbA2 0

HbF 0.1

GR 4.8

Hb 13.1

VGM 75

TCMH 25

Exploration à visée étiologique d’un tableau microcytaire.Absence d’HbA2.Ce résultat n’exclut pas une alpha thalassémie.Étude moléculaire en cours.

HbA2 1.4

HbF 0.9

Fille Tunisienne de 16 ans

HbA2 1.6

HbF 0.1

Anomalie de δ globineAnomalie de δ globine

δ β

δ β

γγ

ζ α2 α1

ζ α2 α1ζ α-3.7BioMol : α-3.7 hétérozygote

Un sujet magrebin de 48 Ans

GR 5.6 TCMH 22

Hb 12 Ferritine 72

VGM 69 TRF 2.23

HbA2 2.6

HbF 0.7

BioMol : -α3.7 homozygote

Homme de 25 Ans (non asiatique, non Africain )Hb 16 VGM 78, pas de inflammation, pas de carence martiale, Recherche alpha thalassémie demandée

HbA2 2.2

HbF 0.1

Exploration à visée étiologique d’un microcytose non ferriprive. Absence d'anomalie apparente de l'hémoglobine dans les systèmes explorés. Étude moléculaire en cours.

α2 α1

α2 α1

Α-3.7

Α-3.7

Absence d'anomalie apparente de l'hémoglobine dans les systèmes explorés.Ce résultat n’exclut pas une thalassémie. Étude moléculaire en cours.

BioMol : α-3.7 hétérozygote

Famille Chinoise

BioMol : α0 (SEA) hétérozygote

A2 2.1

F 0.7

Hydrops fœtalis, mort après la naissance

BioMol : délétion α0 (SEA) homozygote

GR 6.94

Hb 15.3

VGM 69.4

TCMH 22

BioMol : α0 (SEA) hétérozygote

A2 2.3

F 0.8

GR 5.43

Hb 11.7

VGM 67.1

TCMH 21.6

ζ α2 α1

ζ α2 α1

ζ

ζ

Femme asiatique de 28 ans

GR 5.12 Hb 8.9

VGM 56.9 IDH 22.2%

TCMH 17.4 Ferritine 383

HbA2 1.6

HbF 1.9

Exploration à visée étiologique d’une anémie chronique de nature hypochrome et microcytaire non ferriprive.Taux d’hémoglobine A2 abaissé et HbF augmenté pour l’âge.Présence de trace d’hémoglobine H en isoélectrofocalisation.Etude moléculaire en cours.

BioMol : hétérozygote composite: α-3.7 /α0 thalassémie de type SEA

ζ

ζ α2

α2 α1

α1

Taux HbA2 très abaissé et microcytose, en l’absence de carence martiale, il faudra

penser à l’HbH

ζ

ζ α-3.7

Fillette de 5 ans asiatique

HbA2 0.8

HbA1C 3.9

HbF 0.1

HbA 65.9

HbH 20%

Présence d’hémoglobine H à 20% avec un Taux abaissé d’hémoglobine A2.On note également la présence d’hémoglobine Constant Spring à 1.5%.Une étude familiale de l’hémoglobine est souhaitable. Cette hémoglobinose nécessite une prise en charge médicale et un suivi régulier dans un centre de référence.

BioMol : αCSα/α0 thalassémie de type SEA

HbA2

HbA

Hb Constant Spring

Hb H à 20%

HbA

HbA2 à 0.8%

Gγ Aγ δ β

Gγ Aγ δ β

ζ α2 α1

ζ α2 α1

Thalassémie : cas N°1

d d d d

Patiente (ddn: 2000, originaire d’asie) adressée au labopour l’exploration d’un trait thal modéré (Hb =12.9,6,5 109 GR/L, VGM = 61, TCMH = 18.9, Hb F: 21.3%, Hb A2 2 %).

Chro 11: del 10 kb Chro 16: del 44.7 kb

Etude sur la «puce» : Associationd’une del ()0 + del 0

Analyse simultanée des deux locus par puce à ADN

L’association des deux anomalies rend compte du caractère bénin du syndrome Thal

Recherche del = 0‐thal« Sici like »

Recherche del «classique» = neg


Anna 10 ans, origine asiatique, naissance Ok, Pas ATCD particulier, pas d’hémolyse , pas d ictère, RAS dans la famille« présentent tous des syndromes thal modérés »

1976

2002 (10 ans)

1966

Gr : 4,43 103/ulHb : 12,6 g /dlvgm : 90,7 fLTCMH : 28,6 pgCCMH : 31,5 RDW : 13,4Hb E : 28 % Hb F : 1,1 %Hb A : 83,4 %

Gr : 7,33 103/ulHb : 11,4 g /dlvgm : 54,1 fLTCMH : 15,1 pgCCMH : 28,7 RDW : 19,6Hb E : 85,6 % Hb F : 2,6 %Hb A : 0 %

Gr : 6,03 103/ulHb : 9 g /dlvgm : 57,4 fLTCMH : 15,4 pgCCMH : 26,8 RDW : 18,9Hb A2 : 3,1 %Hb F : 1,4 %Hb A : 83,4 %Variant CS : 1 %


Variant αCS

1976

2002 (10 ans)

1966Locus beta :

‐ Hb E‐ ivs 1‐1 G>T

Locus Alpha :‐ 0SEA‐ cs

Cas N°2: Génotype de la famille

Mère : HbE hétero + α CS hetero

Père : HbE/ β0thal + αSEA hétéroz

Anna : HbH ( SEA/α CS ) + β0thal Association qui « explique» la tolérance de génotype «sévère »

Conseil génétique pour une famille sans ATCD particulier:

Locus beta : 1 / 4 E/Beta° thal :Locus alpha : 1 / 4 Hb H :

Soit ½ d avoir une Hb pathie sévère


Hb A2 = 3.6 (4%)Hb F = 29.8 (11)Hb : 4.7 g/dl (7‐8)VGM : 79.9 fLTCMH : 24.8 pg/cellFerritin: 450

II 2, 1992

Hb A2 = 3.1Hb F = 0.4NFS : Nal

I 1, 1959, I 2, Italy, trait

II 1, 1988, trait

Duplication de 162 kb

6 alpha2 beta

4 alpha 1 beta

4 alpha 1 beta

6 alpha 1 beta



BioMol : codon stop β39

Puce à ADN : αα/αααα quadruplication d’ α-globine

Conclusion

• Utilisation au minimum de deux techniques d’analyse de l’hémoglobine en pratique quotidienne

• Interprétation souvent aisée mais parfois délicate

• Recours indispensable à un laboratoire spécialisé en cas de discordance phénotypique

Dr Serge Pissard (1), M. Jean Riou (1), Dr Henri Wajcman (2),

Pr Frédéric Galactéros (3), Dr Dora Bachir (3), Dr Anoosha Habibi (3)

(1) Laboratoire spécialisé des Hémoglobinopathies CHU Henri Mondor, Créteil (2) Inserm U955 Créteil(3) UMGGR, Hôpital Henri Mondor, Créteil

• Kamran Moradkhani • Tél: 02 53 48 24 22• [email protected], • [email protected]

Merci pour votre attention

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