FAURA MARIZA CANGY AMADE (MSC.)

PROF. PAXIE CHIRWA

Fundo Nacional de Investigação - MCTFaculdade de Agronomia e Engenharia Florestal- UEM, Universidade de Pretória

5 º Seminário Nacional de Divulgação dos Projectos Financiados20 a 21 de Novembro de 2014

Centro Internacional de Conferências Joaquim ChissanoMaputo, Moçambique

Diversidade genética de duas espécies de mangal, Avicennia marina e Ceriops tagal em Moçambique:

estudo baseado em SSRs – instrumento para o apoio à gestão sustentável dos

mangais em Moçambique

SECÇÃO 1: Objectivos do Projecto

O papel da instituição que aloja o projecto;

Gestão financeira e admnistrativa do projecto;

Auxílio na aquisição de materiais;

Fornecimento de bens e equipamentos;

SECÇÃO 1: Object. Cont.

Os objectivos do projecto

Quantificar a variação genética dentro das populações da Ilha, e entre estas e as populações da zona continental;

Avaliar a estrutura genética/diferenciação das populações e o fluxo de genes;

Descrever a relação filogenética entre as populações.

Produzir um relatório que sirva de instrumento para o apoio à gestão e conservação dos mangais em Moçambique;

SECÇÃO 1: Object. Cont.

O local de implementação do projecto:

Província de Maputo, Zambezia e Cabo Delgado.

BeneficiáriosPor identificar um

estudante, para a realização do seu trabalho de tese.

Zambézia

Cabo delgado

Maputo

SECÇÃO 1: Object. Cont.

O projecto é parte da tese do PhD que está a decorrer na Universidade de Pretória, portanto, as vezes a supervisão não acompanha o tempo proposto para a execusão das actividades do projecto;

Testados 15 marcadores microssatelite, encontrados na literatura, e apenas dois pares de marcadores da espécie Avicennia marina foram aprovados para o estudo da sua estrutura genética;

A quantidade de DNA obtida atravéz do método CTAB e os kits de extração Zymo research e Nucleospin plant II, para a espécie Ceriops tagal, foi baixa ( > 60 ng/ml).

Desafios e constrangimentos encontrados

SECÇÃO 1: Object. Cont.

Continuar a tentar outros método de extraccao para plantas com altos níveis de polissacarídeos e fenóis e testar outros Kits de extração de DNA para a espécie Ceriops tagal;

Criar novos marcadores microssatelite, para as espécies Avicennia marina e Ceriops tagal.

A proposta de solução dos mesmos

SECÇÃO 2: Os resultados do projecto

Local de amostragem: Costa do Sol – Província de Maputo.

Laboratório do Inqaba Biotech - Pretória.

DNA isolado (61.3 ng/µl) em 1 amostra da folha, kit Zymo Research Plant/Seed DNA

Isoladas as sequências com SSR de Avicennia marina, método FIASCO (Fast solation by AFLP of Sequences Containing Repeats)(Zane et al., 2002 ).

Os resultados principais alcançados;

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

1. Digestão DNA: 10μL de DNA genômico, 1 μL of MseI, 2 μL 10x Buffer R, volume total de 20 μL. Incubação a 65ºC por 2 h.

Método FIASCO consiste numa reacção eficiente de digestão e ligação, seguindo o procedimento do AFLP.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

2. Ligação: 2 μL adaptor, 2 μL digested DNA, 1 μL T4 buffer, 2 μL of H2O, 1 μL PEG 4000. Incubado 22º C 1 h.

Amplificado PCR: 1 μL DNA digerido-ligado, 2 μL AFLP Adaptor – specific MseI-N primer, 12.5 μL Dream Taq, V.total 25 μL, a 95ºC 2 min, 95ºC 30 sec, 53ºC 1 mim, 72ºC 2 mim and 72ºC at 7 mim, 25 ciclos.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

3. Hibridização do DNA com sondas3 grupos de combinações de di, tri e tetranucleotidos: Grupo 1 (GATA)6, (GTG)9 e (AGGG)6, G2 (ATA)7, (AAAT)6 e (AC)10, e G3 (TGC)8 e (CT)10.

Portanto, 23 µL de DNA amplificado foi misturado com 1μL de oligonucleotidos biotinados, e of SSC 4.2 X SDS 0.07% para o volume t. de 100 µL.

As moleculas de DNA hibridizadas foram selectiv.capturadas por esferas magnéticas de streptavidina. As esferas previamente preparadas foram adicionadas ao DNA + moléculas hibridizadas c sondas e incubadas 30min c constante agitação.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

O complexo esferas-sondas-DNA foi separado do tampão de hibridização por um campo magnético, e descartado.

A duas últimas etapas foram 3 lavagens não específicas e 3 lavagens específicas.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

Sustentabilidade do projecto

Os fundos e o tempo previsto para a implementacao do projecto não serão suficientes, devido a etapa da criação dos marcadores microssatélite para as duas espécies.

SECÇÃO 2: Os resul. Cont.

A utilidade destes para a área de pesquisa

A biblioteca dos microssatelites será util para estudos sobre as população das espécies de Avicennia marina e Ceriops tagal, e para outras espécies que tiverem compatibilidade com as mesmas.

Saber sobre a estrutura genética, o fluxo de genes;

Recomendar em casos de reflorestamento.

OBRIGADA