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O Que é o ViveST™ ?�Dispositivo para armazenamento e transporte desuspensão líquida de espécimes biológicoscontendo analitos de interesse em ESTADOSECO !!!SECO !!!
�Fornece métodos para a recuperação dos espécimes biológicos contendo analitos de interesse para subsequente análise laboratorial de pesquisa e testes de estudo clínico
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O ViveST™
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ViveST™
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Entendendo o ViveST™
MATRIZ
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O Que é a Matriz?� A matriz é feita de um material absorvente e feita de:
� Fibras de acetato de celulose derivada de madeira ou algodão
� Nitrocelulose� Nitrocelulose
� Carboximetilcelulose
� Polímeros de carboidratos
� Politetrafluoretileno
� Fibra de vidro
� Nylon
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Qual a vantagem ?�A amostra é totalmente seca
�A amostra não é infecciosa�A amostra não é infecciosa
�A amostra pode ser conservada a temperatura ambiente
�Qualquer tipo de fluido biológico pode ser utilizado
![Page 8: O Queé o Vive ST - algoritmo.aids.gov.bralgoritmo.aids.gov.br/jornadas/2012/genotipagem/2011/VIVEST... · O Queé o Vive ST ™? ... Quala vantagem? A amostra é totalmente seca](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022051305/5a8ebe1c7f8b9a78648d46f2/html5/thumbnails/8.jpg)
Controle de Qualidade do ViveST™
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Controle de Qualidade do ViveST™
O que controla a qualidade da amostra seca?
Um dessecante que absorve umidade e mantém asuspensão líquida seca.
O dessecante contém :
Argila montmorilonita, cloreto de lítio, aluminioativado, aluminosilicato alcalino,briquetes DQ11,gel de sílica, peneira molecular, sulfato de cálcioou óxido de cálcio.
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As amostras no ViveST™
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O equipamento de secagem driDOC™
12 horas de secagem
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Envio das amostras secas para o
Laboratório
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Transporte Oficial BrasileiroInclui:
�Caixa de Isopor�Caixa de Papelão�Caixa de Papelão�Canister�Gelo Seco�Envio aéreo com caixahomologada
Importante: Muito caro!
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Embarque de amostra congelada
Recipiente Primário à Prova D’águaVidro, Metal ou Plástico*
Substância Infecciosa
Material de Embalagem Absorvente(para líquidos)
ViveST
Vs.
Recipiente SecundárioÀ Prova D’água
Relação de Conteúdo
Embalagem ExternaRígida
Tampa
Identificação do Embarcador ou Consignatário
Marca de Certificação de Embalagem UN
Lista de Conteúdo por
itens:
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Carga Viral HIVCarga Viral HIV--11
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EnsaioEnsaio::
20 amostras de plasma variando entre 3.100e 258.000 cópias/mL foram aplicadas emViveST™ e genotipadas com 1 e 7 dias dearmazenamento à T.A.
ResultadosResultados::
AcuráciaAcurácia médiamédia dede 9999..99%% para as mutaçõesassociadas à resistência aos antirretrovirais,independentemente do período dearmazenamento, comparando-se às amostras
GenotipagemGenotipagem HIVHIV--11
armazenamento, comparando-se às amostraspareadas de plasma congeladas
ConclusõesConclusões::
Amostras de plasma armazenadas emViveST™ apresentam perfis de mutaçõesassociadas à resistência comparáveis aosobtidos pelas duplicatas de amostrascongeladas apresentados na bula doTruGene, aprovados pelo FDA.
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3 amostras de plasma coinfectadas HIV-1 e HCV em ViveST™ demonstraram perfis de mutações de resistência, polimorfismos e genótipos extremamente
comparáveis às amostras congeladas.
Carga Viral HIVCarga Viral HIV--1, 1, GenotipagemGenotipagem HIVHIV--1 e HCV1 e HCV
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ShortShort--termterm stabilitystability for HIVfor HIV--1 viral 1 viral loadload
• reduções de 0.38 a 0.45 e 0.23 a 0.53 log10 cópias/ml para painel de
amostras altas e baixas no dia 2 dependendo da temperatura de
armazenamento;
• dia 2 ST comparado ao dia 56 ST, não houve diferença significativa
em HIV log10 quando armazenados a 23°C ou -80°C e até 24 dias a 37°C;
• porém houve declínio da carga viral significante nas amostras
armazenadas a 37°C por 56 dias (P 0.05).
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ObjectiveObjective� In this study, we evaluated SampleTanker®as a potential blood collection device
for HIV DR genotyping.
MethodsMethods� 58 Matched blood and plasma specimens collected from ART patients in
CROI CROI --20102010
� 58 Matched blood and plasma specimens collected from ART patients in Honduras were used to prepare SampleTankers (STs) and DPS/DBS.
� Samples except frozen plasma (gold standard, stored at -70oC after collection) were stored at RT stored at RT for 2 and 4 weeks 2 and 4 weeks and then frozen at - 70oC before testing.
�� PCR, PCR, sequencingsequencing andand genotypinggenotyping::
•The partial pol gene encompassing protease and RT regions was amplified using a broadly sensitive insensitive in--house genotyping assayhouse genotyping assay.
•Sequences were edited and DR mutations were analyzed by Stanford Drug Resistance Database. Phylogenetic analyses were performed using BioEdit and MEGA 4 software.
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ResultsResults andand ConclusionsConclusions
CROI CROI --20102010
•• HighHigh concordantconcordant drugdrug resistanceresistance mutationsmutations werewere revealedrevealed amongamong frozenfrozen plasmaplasma ((goldgold standard),standard),SampleTankerSampleTanker,, DBSDBS andand DPSDPS specimensspecimens..•• OurOur datadata indicatesindicates SampleTanker®canSampleTanker®can preservepreserve thethe integrityintegrity ofof drieddried samplessamples atat RTRT atat leastleast asaseffectiveeffective asas whatmanwhatman 903903 cardscards forfor HIVHIV DRDR genotypinggenotyping..•• SinceSince SampleTankerSampleTanker cancan holdhold largerlarger volumevolume ofof plasma/bloodplasma/blood andand hashas simplersimpler packagingpackaging andand shippingshippingprocess,process, itit maymay bebe anotheranother promisingpromising drieddried samplesample collectioncollection devicedevice forfor HIVHIV DRDR genotypinggenotyping..
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Journal of Clinical Virology, August 2010, 245–248
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MétodosNúmero de amostras carga viral
100 1,7 – 3,99 log
100 4 – 5,99 log
99 < 50 cópias/mL
• 1 mL do plasma foi descongelado e absorvido em matriz ViveST;
• secagem por pelo menos 12 horas em DriDOC;
• reconstituição em 1,175 mL de tampão de eluição em até 4 dias após preparo;
• quantificação em VERSANT ® HIV-1 RNA 3.0 Assay (bDNA) SIEMENS;
• análises estatísticas: GraphPad Prism 5.0.
Journal of Clinical Virology, August 2010, 245–248
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Média das diferenças: 0,2066 P<0.0001 Média das diferenças: 0,2066 P<0.0001
Journal of Clinical Virology, August 2010, 245–248
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ViveST™Sensibilidade e Especificidade
Positivo Negativo TOTAL
> 50 188 12 200
<50 12 87 99
TOTAL 200 99 299
SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE
TOTAL 200 99 299
S = 0,94
E = 0,88
Acurácia = 0,96
Das 12 amostras < 50 em ST, 7 foram
repetidas e 2 confirmaram-se < 50.
Journal of Clinical Virology, August 2010, 245–248
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Repetibilidade
Journal of Clinical Virology, August 2010, 245–248
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CARGA VIRAL DE HEPATITE DELTA EM PCR TEMPO REALCARGA VIRAL DE HEPATITE DELTA EM PCR TEMPO REALPESQUISA DESENVOLVIMENTO & INOVAÇÃO CENTRO DE GENOMASPESQUISA DESENVOLVIMENTO & INOVAÇÃO CENTRO DE GENOMAS®®
Comparação da carga viral plasmática de HDV de amostras pareadas frescas com amostras secas em Comparação da carga viral plasmática de HDV de amostras pareadas frescas com amostras secas em matriz matriz CdGCdG//ViveSTViveST™ utilizando kit de desenvolvimento próprio de PCR em TEMPO™ utilizando kit de desenvolvimento próprio de PCR em TEMPO
REAL HDV RNAREAL HDV RNA
y = 0,8715x + 0,2042r² = 0,9164
5
6
log
HD
V R
NA
UI/m
L no
CD
G/V
iveS
T™
Plasma x CDG/ViveST™
0
1
2
3
4
0 1 2 3 4 5 6 7
log
HD
V R
NA
UI/m
L no
CD
G/V
iveS
T™
log HDV RNA UI/mL em plasma congelado
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ComparativeComparative EffectivenessEffectiveness ofof DriedDried PlasmaPlasma HBVHBV ViralViral LoadLoad TestingTesting inin ThreeThree DifferentDifferent ViralViralLoadLoad CommercialCommercial PlatformsPlatforms UsingUsing ViveSTViveST forfor SampleSample CollectionCollection
Michelle Zanoni,1 Leila Giron,1 Cintia Vilhena,1,2 Maria Cecilia Sucupira,1 Robert M Lloyd Jr3, Ricardo Sobhie Diaz1,2
1Retrovirology Laboratory, Federal University of Sao Paulo, Brazil2Laboratorio Centro de Genomas, SP, Brazil3Research Think Tank, Inc.
Resultados confidenciais, submetidos para publicação, Maio 2011
N = 96 amostras de plasma HBV positivasarmazenadas por 10 dias à T.A. e testadas nas 3 plataformas
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Roche Abbott Siemens
I.D. Frozen ViveST I.D. Frozen ViveST I.D. Frozen ViveST
4 9 <6 10 29 <15 17 478 <357
24 <6 8 15 <15 74 55 <357 957
37 invalid invalid
39 invalid 2,101 30 invalid 60 70 375 <357
50 invalid >110000000 67 <15 18 76 442 <357
73 7 <6 70 <15 26 84 539 <357
74 30 <6 78 39 <15 88 438 <357
Amostras discordantes Congeladas vs. ViveST™
82 invalid >110000000 90 370 <357
92 3,762 <357
93 1,602 <357
95 494 <357
96 <357 457
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Ten samples analyzed in triplicate demonstrated a mean intra-assay varianceamong replicates of 0.07 and 0.09 log10 IU/mL (p=03880) for frozen and ViveST™dried plasma respectively using Roche; 0.21 and 0.11 log10 IU/mL (p=0,3535) forfresh and ViveST™ using Abbott; and 0.10 and 0.12 log10 IU/mL (p=0,7128) forfresh and ViveST™ using Siemens (p=NS).
IntraIntra--assay varianceassay variance
ConclusionConclusion
We have demonstrated in three different HBV viral load platforms that resultsfrom plasma eluted from ViveST™ are very well comparable to that from frozenplasma.
ConclusionConclusion
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AvaliaçãoAvaliação dodo desempenhodesempenho dede plasmaplasma secoseco emem ViveSTViveST™™ nono diagnósticodiagnóstico dede resistênciaresistênciatransmitidatransmitida aosaos antirretroviraisantirretrovirais dede pacientespacientes HIVHIV--11 positivospositivos emem ManausManaus
Noaldo Lucena1, Michelle Zanoni1, Michelle Camargo1, Juliana Galinkas1, Fernanda Ferreira1, Leila Giron1, Ítalo KarmannAventurato1, Maria Cecília Sucupira1, Ricardo Sobhie Diaz1,2
1Laboratório de Retrovirologia, UNIFESP, São Paulo, Brasil2Laboratorio Centro de Genomas, SP, Brazil
RESULTADOS E DISCUSSÃORESULTADOS E DISCUSSÃO
87% amostras de plasma em ViveST™ foram genotipadas com sucesso, as quais demonstraram uma frequênciade 12% de resistência transmitida. Esses resultados indicam que amostras de plasma armazenadas em ViveST™por 1 mês à temperatura ambiente coletadas em cidades com elevadas taxas de umidade e altas temperaturaspode representar uma alternativa eficiente para testes de genotipagem para resistência à antirretrovirais.
Os resultados deste estudo são confidenciais e serão transf ormados em manuscrito parapublicação.
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DBS (Masciotra S, AIDS2007)
Plasma ViveST™ (Lucena N. et al, Manaus)
• 60 samples
• -20oC was 21 weeks • RT for 4 weeks
DBS vs. Plasma DBS vs. Plasma ViveSTViveST™™
• -20 C was 21 weeks
• successufulysuccessufuly genotypedgenotyped :
50 of the 60 (83.3%) DBS specimens
• RT for 4 weeks
• successufulysuccessufuly genotyped genotyped :
(87 %) Plasma ViveST™ specimens
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Outras Validações Outras Validações no no ViveSTViveST™: ™: Comparação entre amostras testadas à fresco e no Comparação entre amostras testadas à fresco e no ViveSTViveST™ ™ já já
realizadas realizadas na na RetrovirologiaRetrovirologia, Centro , Centro de Genomas e parcerias com Salomão & de Genomas e parcerias com Salomão & ZoppiZoppi e e SenneSenne LiquorLiquor::
•15 amostras de soro para validação de anticorpos anti-HIV-I no DETUNED (8 recém-infectados e 5 long –term)com soro armazenado em ViveST por 8 dias à temperatura ambiente.
•40 amostras de soro para validação de anticorpos anti-HIV-I e anti-HIV-II em ensaio comercial de ELISA daBIOMÉRIEUX, Vironostika HIV Uni-Form II plus O após 11 dias de armazenamento à temperatura ambiente emViveST™.
•40 amostras de soro para validação anticorpos anti-treponêmicos com ensaio comercial dequimioluminescência LIAISON® da DiaSorin após 11 dias de armazenamento à temperatura ambiente emViveST™.
•40 amostras de soro para o teste qualitativo de reagina plasmática rápida (RPR) BRÁS, relevante para a triagem•40 amostras de soro para o teste qualitativo de reagina plasmática rápida (RPR) BRÁS, relevante para a triagemsorológica da sífilis, também foi utilizado para testar os anticorpos não treponêmicos (reaginas) após 11 dias dearmazenamento à temperatura ambiente em ViveST™.
•30 amostras de plasma para validação da carga viral do HBV em ensaio de desenvolvimento próprio doLaboratório Centro de Genomas após 15 dias de armazenamento à temperatura ambiente em ViveST™.
•30 amostras de plasma para validação da carga viral do HDV em ensaio de desenvolvimento próprio doLaboratório Centro de Genomas após 15 dias de armazenamento à temperatura ambiente em ViveST™.
•50 amostras de plasma para validação da carga viral do HCV em ensaio de desenvolvimento próprio doLaboratório Centro de Genomas após 15 dias de armazenamento à temperatura ambiente em ViveST™.
•24 amostras de liquor para validação de proteínas totais após 7, 14 e 21 dias de armazenamento à temperaturaambiente em ViveST™.