![Page 1: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/1.jpg)
Universidade Federal Rural de PernambucoPrograma de Pós-Graduação em Ciência do Solo
Disciplina: Seminário IIProfessor: Mario de Andrade Lira Junior
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo
Mestranda: Rayssa Pereira VicentinOrientador: Mario de Andrade Lira JuniorCo-orientador: José Carlos Batista Dubeux Junior Co-orientador: Márcia do Vale Barreto Figueiredo
Recife, 04 de dezembro de 2009.
para qualidade do solo
![Page 2: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/2.jpg)
Introdução
Qualidade do solo é a capacidade do solo
funcionar nos limites do ecossistema,
sustentando a produtividade biológica, mantendo
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
a qualidade ambiental e promovendo a saúde
vegetal e animal.
![Page 3: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/3.jpg)
Biológicas
•Composição vegetal.•Fauna: Macro.
Meso.Micro.
•Microbiota.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Parâmetros da Qualidade do Solo
Químicas Físicas
•Condutividade Hidráulica.•Resistência a Penetração.•Agregação.
•Teores totais do elementos.•Conteúdo e composição da Matéria Orgânica.•Xenobióticos.
![Page 4: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/4.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Desenvolvimento
Quando têm sido utilizados os indicadores microbiológicos?
Parâmetro sensível.
Quando a microbiologia é foco do trabalho.
No estudo do Fluxo e Ciclagem dos Elementos.
![Page 5: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/5.jpg)
Indicadores Microbiológicos
Densidade.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade.
Atividade.
![Page 6: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/6.jpg)
Densidade
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
• Contagem de nódulos.
Métodos:
http://www.cnpab.embrapa.br/images/fbnl.jpg
![Page 7: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/7.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
• Infecção micorrízica.
Densidade - Métodos
Clareamento com KOH e
Coloração com azul de tripano.
Observação com microscópio
H2O2.azul de tripano. microscópio
estereoscópico.
![Page 8: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/8.jpg)
• Número de esporos de fungos.
Densidade - Métodos
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Amostras tratadas com corantes.
Observação em microscópios
![Page 9: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/9.jpg)
• NMP (Número mais Provável.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Densidade - Métodos
Diluições seriadas de amostras
Inoculação em meio líquido ou semi-
sólido.
Tabela estatística
NMP
http://bervieira.sites.uol.com.br/dilui.htm
![Page 10: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/10.jpg)
• NMP (Número
mais Provável.
Tabela Estatística de Cochran
Moreira & Siqueira, 2006.
P1 > P2 > P3
![Page 11: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/11.jpg)
• Carbono da biomassa microbiana.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Densidade - Métodos
Amostras frescas
Fumigada.Extração com K2SO4, seguida de filtragem.Não-Fumigada.
Digestão com Dicromato, ácido sulfúrico e ácido
ortofosfórico.
Titulação com sulfato ferroso amoniacal,
utilizando fenolftaleína como indicador.
Silva et al., 2007.
Carbono total – Carbono solo = Carbono da biomassa.KC
![Page 12: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/12.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade
Variedade de indivíduos.
Bactérias: Apenas 1% é passível de cultivo.
Métodos Moleculares
Moreira & Siqueira, 2006.
![Page 13: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/13.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) –Polimorfismo do comprimento de fragmentos de restrição.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.Diversidade
Proximidade genética de isolados.
Extração de DNA do isolado.
Digestão com enzima de restrição.
Separação de fragmentos em
Métodos:
DNA do isolado.
http://static.hsw.com.br/gif/how-to-prepare-soil-for-planting-4.jpghttp://www.mundovestibular.com.br/articles/219/1/O-DNA/Paacutegina1.htmlhttp://1.bp.blogspot.com/_YnaVC3EBaBU/Ssn1Ob2gUBI/AAAAAAAAANw/W9y2BjSioxA/s320/replicação+semiconservativa.JPG
enzima de restrição. fragmentos em eletroforese horizontal.
![Page 14: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/14.jpg)
RFLP
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
http://www.scielo.cl/fbpe/img/amv/v40n2/art11-figura01.jpg
![Page 15: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/15.jpg)
• AFLP (Amplified fragment length polymorphism) –
polimorfismos de comprimento de fragmentos
amplificados.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
Extração do DNA genômico
Digestão com enzimas de restrição Amplificação.DNA genômico
do isolado.enzimas de restrição com corte adesivo.
Amplificação.
Eletroforese em gel de agarose.Dendrograma de
similaridade.
![Page 16: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/16.jpg)
PCR
Reagentes:
• Tampão.
• dNTP.
• Primer
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
94°C
50-60°C
• Amostra de DNA.
• Taq Polimerase.
• MgCl.
50-60°C
72°C
http://www.bio.miami.edu/~cmallery/150/gene/Taq.htm
![Page 17: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/17.jpg)
• ARDRA.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
Extração do DNA
genômico do isolado.
Amplificação de genes
universais.
Digestão com enzimas de restrição.
do isolado.
Eletroforese em gel de agarose.
Dendrograma de similaridade.
http://pgrc3.agr.gc.ca/facilities-installations_e.html
![Page 18: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/18.jpg)
•DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis) –Eletroforese em Gel com Gradiente de Desnaturação.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
Extração do DNA Total de
Microrganismos do Solo.
Amplificação (genes
universais ou de grupos).
Eletroforese em gel de
agarose.Solo. grupos).
agarose.
Eletroforese em gel com gradiente de
desnaturação
DendrogramaSequênciamento.
![Page 19: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/19.jpg)
DGGE
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
Menos [ ]
A=TC=G
Desnaturante – Formamida.
http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/RESEARCH/Protocols/DGGE/DGGE.pdf
Mais [ ]http://biomicrolab.web.ua.pt/images/DGGEgela.jpg
![Page 20: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/20.jpg)
• Biblioteca Metagenômica/Sequenciamento.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
DNA de amostra
ambiental
Amplificação
http://www.libertaria.pro.br/d_ressurgentes_arquivo/cadeia.jpg
ambiental
Sequenciamento
![Page 21: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/21.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Sequenciamento
Desnaturação do DNA
Anelamento de 1 primer
Polimerização com nucletídeos marcados.
![Page 22: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/22.jpg)
• Microarranjos.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade – Métodos
Poços com DNA fita
simples.
Hibridização com DNA da
http://www.fiocruz.br/ccs/media/grafico_microarranjo.JPG
Hibridização com DNA da
amostra.
Identificação através da
fluorescência.
![Page 23: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/23.jpg)
• Box-PCR.
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Diversidade
Os Primers utilizados são sequências grandes
de nucleotídeos que se repetem no DNA.
Gerando uma variedade diferente tamanho de
http://www.bspp.org.uk/publications/new-disease-reports/012/2005-84-1.gif
Gerando uma variedade diferente tamanho de
fragmento.
![Page 24: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/24.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Atividade microbiana
Respiração Basal
Amostras Frescas
Incubar amostra + frascos contendo
NaOH em ambiente hermético.
Frascos NaOH são acrescidos
BaCl2 para precipitar o CO2.
Titulação com ácido Titulação com ácido clorídrico na presença
de fenolftaleína.
RBS (mg de C-CO2 kg-1 solo hora-1)
Coeficiente Metabólico qCO (mgC-CO2 .g-1 BMS C.h-1 )
Silva et al., 2007.
![Page 25: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/25.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Atividade microbiana
Atividade Enzimática
Princípio: Incubação com substrato, por determinado tempo e temperatura, e leitura do produto da reação.
Enzimas: • Arilsulfatase (mineralização de Enxofre).• Arilsulfatase (mineralização de Enxofre).
• Fosfatase (mineralização do Fóforo).
• Celulase (degradação da Celulase).Celulose Celobiose
• β-glucosidase (degradação da Celobiose).Celobiose Glicose
![Page 26: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/26.jpg)
Indicadores microbiológicos para qualidade do solo.
Atividade microbiana
Determinação de ATP
Extração:• Ácido Tricloroacético.• Solução de Fosfato.• Ácido Sulfúrico.• Ácido Fosfórico.• Ácido Fosfórico.
Leitura: HPLC (High performance liquid chromatography) Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
![Page 27: Indicadores microbiológicos para qualidade do sololira.pro.br/wordpress/wp-content/uploads/2009/12/seminario-rayssa.pdf · Qualidade do solo é a capacidade do solo funcionar nos](https://reader031.vdocuments.com.br/reader031/viewer/2022021722/5c3bcf5593f3c37a6d73228f/html5/thumbnails/27.jpg)
Considerações finais
•É de suma importância a determinação de mais
de um parâmetro de qualidade do solo.
• Os Indicadores Microbiológicos são
parâmetros sensíveis pra determinar as
alterações da qualidade do solo.
•Devido a dificuldade de cultivar as bactérias,
métodos moleculares viabilizam o estudo da sua
diversidade.