DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE DIROFILARIOSIS
Elena Carretón, José Alberto Montoya-AlonsoMedicina interna, Facultad de Veterinaria, Universidad de las Palmas de Gran Canaria
DIROFILARIOSIS
� Dirofilaria immitis
� Perros, gatos y hurones
DIROFILARIOSIS CANINA
� Arterias pulmonares
� Ventrículo derecho
� Wolbachia pipientis� Wolbachia pipientis
DIROFILARIOSIS CANINA
� Enfermedad cosmopolita
� Distribución mundial
� ↑Temperatura y humedad
DIROFILARIOSIS CANINA
� Transmisión anual
� Transmisión estacional
DIROFILARIOSIS CANINA
� España: condiciones óptimas
� Prevalencia que presente cada zona
� condiciones medioambientales
� hábitos de la población canina Montoya et al, 2007
� hábitos de la población canina
DIROFILARIOSIS CANINA
� Prevalencias más elevadas: Islas Canarias
� Gran Canaria: 67% - 19%
0
20
40
60
80
1994 1995 1996 2000 2002 2007 2010
Prevalencia
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Técnicas de ELISA o inmunocromatografía
� Proteínas parásitos adultos hembras
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Elevada ESPECIFICIDAD
� Falsos Positivos
� Elevada SENSIBILIDAD
� Falsos Negativos� Falsos Negativos
Snap 3Dx®, Snap Filaria® (Idexx)
� idexx Sensibilidad 98.7 %
Especificidad 100 %
Speed Diro® (Virbac)
Sensibilidad 95.2 %
Especificidad 99 %
Anigen HW Ag 2.0 ® (Bionote)
� anigen Sensibilidad 94.4 %
Especificidad 100 %
CHW Ag ® (Quicking Biotech)
� quicking Sensibilidad 91.3 %
Especificidad 100 %
Uranotest Dirofilaria® (Uranovet)
Sensibilidad 94.4 %
Especificidad 100 %
Witness ® (Synbiotics - Pfizer)
Sensibilidad 97.5 %
Especificidad 100 %
FasTest HW Antigen® (Megacor)
Sensibilidad 98.6 %
Especificidad 99.1 %
DFV test dirofilaria® (Divasa)
Sensibilidad 94.4 %
Especificidad 100 %
SensPERT CHW ® (SensPert)
Sensibilidad ?? %
Especificidad ?? %
Tests de Antígenos de pocillos
Petchek Filaria PF (Idexx) Filarchek (Ingenasa)
Dirochek (Pfizer)
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Una sola hembra adulta
� Factores pueden afectar la sensibilidad
� edad del parásito
� tamaño del perro � tamaño del perro
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� No carga antigénica suficiente < 6 meses
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Cantidad de antígenos: nº hembras adultas??
� ↑muerte reciente
� ↓hembras jóvenes
� ↓filarias machos � ↓filarias machos
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Falsos positivos:
� errores técnicos
� retrasar la lectura del resultado
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Falsos negativos:
� Fallos técnicos
� Baja sensibilidad
� Carga parasitaria muy ligera� Carga parasitaria muy ligera
� Sólo por filarias macho
� Dirofilarias <6 meses
1. TESTS DE ANTÍGENOS
� Si se duda (positivo muy débil)
� repetir la prueba
� repetir en otra marca
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� OBSERVACIÓN DIRECTA
� objetivo de x10 aumentos
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� El nº no guarda relación con el nº adultos ni gravedad
� No identifica tipo de microfilarias
Dirofilaria immitis ● Arterias pulmonares● Ventrículo derecho
Dirofilaria repens● Tejido subcutáneo
Acanthocheilonema(Dipetalonema) reconditum
● Peritoneo y cavidad abdominal
Acanthocheilonema(Dipetalonema) dracunculoides
● Cavidad peritoneal
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� Dirofilaria immitis
� más móviles
� movimiento ondulante y no progresivo
� Dipetalonema
reconditum
� movimiento rectilíneo y progresivo
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� TEST DE WOO
� Tubo de hematocrito: capa flogística
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� MÉTODO DE FILTRACIÓN:
� 1 ml de sangre + 9 ml de carbonato sódico 0.1%
� Filtro (3 µm diámetro)
� Azul de metileno 0.1% � Azul de metileno 0.1%
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� TEST DE KNOTT:
� 1 ml sangre + 9 ml formalina 2%
� 5’ a 1100 rpm
� Sedimento + azul de metileno� Sedimento + azul de metileno
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� MÉTODO HISTOQUÍMICO:
� Extensiones de sangre
� Se cubren con la fosfatasa ácida 2 horas a TA
� Contrateñir verde metilo al 1% � Contrateñir verde metilo al 1%
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
D.immitis
● Poro anal
● Poro excretor
D.repens
● Poro anal
D.reconditum
● Todo el parásito
D.dracunculoides:
● Poro anal
● Poro excretor
● Cuerpo interno
● Espacio cefálicoCanine and feline heartworm disease; diagnosis and therapy. Schrey & Trautvetter. 1998
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� 20-30% amicrofilarémicos
� Localización ectópica de adultos
� Parásitos de un solo sexo
� Periodo de prepatencia (7 meses)� Periodo de prepatencia (7 meses)
� Respuesta inmune frente MF
2. DETECCIÓN DE MICROFILARIAS
� Porcentaje se eleva: tratamiento preventivo intermitente
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� Falso Negativo
� Fallo técnico
� Bajo nº hembras
� Anticuerpos que enmascare antígenos� Anticuerpos que enmascare antígenos
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� Microfilarias no son D.immitis:
� D.reconditum
� D.repens
� D.dracunculoides� D.dracunculoides
� Estudio histoquímico
� Estudio morfológico
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� D.immitis y D.repens mayor anchura y longitud
� D.reconditum y D.dracunculoides más estrechas y cortas
D.immitis D.repens D.reconditum D.dracunculoides
Longitud µm 260-340 274-362 241-287 190-211Longitud µm 260-340 274-362 241-287 190-211
Anchura µm 4-6.5 5.8-7.3 3.8-5 4.8-5.8
Dirofilaria immitis ● Extremo cefálico afilado● Cola recta y afilada
Dirofilaria repens ● Extremo cefálico romo● Cola afilada y filiforme (mango de paragüas)
Acanthocheilonema(Dipetalonema) reconditum
● Extremo cefálico romo con gancho prominente● Cola chata y en gancho
Acanthocheilonema(Dipetalonema) dracunculoides
● Extremo cefálico romo● Cola larga y afilada
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� Muerte de adultos:
� circunstancias naturales
� tratamiento adulticida
� MF sobreviven 2 años� MF sobreviven 2 años
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� Transfusión: de un perro microfilarémico
MF POSITIVO y TEST AG NEGATIVO
� Vía transplacentaria: madre con microfilaremia
� Microfilarias no se desarrollarán en adultos
HEMATOLOGÍA
� Anemia: 10-60%
� Normocítica normocrómica
� Hemólisis (síndrome vena cava)
� Leucocitosis: 20%� Leucocitosis: 20%
� Neutrofilia, monocitosis
� Eosinofilia: 85-95%
� Basofilia: 35-40%
HEMATOLOGÍA
� Perfil de coagulación� Trombocitopenia
� Hipofibrinogenemia
� Tiempo de protrombinoplastina parcial y tiempo de � Tiempo de protrombinoplastina parcial y tiempo de
coagulación activada prolongados
� Altas concentraciones de PDFs
●Tromboembolismo●CID
BIOQUíMICA
� Alteración hepática:
� FA, ALT, AST: 5-10%
� Alteración renal:
� Azotemia: <5%
Hipoalbúminemia� Hipoalbúminemia
URIANÁLISIS
� Glomerulonefropatía
� Depósito de complejos autoinmunes
� MF circulantes
� Ag deWolbachiaAg deWolbachia
URIANÁLISIS
� Proteinuria (U P/C >0.5): 10-45%
Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP POSITIVE)
0.72+0.81 0.27+0.33
Group A (WSP POSITIVE) Group B (WSP NEGATIVE)
81.5+78.8 mg/dl 28.1+24.4 mg/dl
MARCADORES CARDIOPULMONARES
� Veterinaria:� Enf CP tempranas o asintomáticas
� Casos dudosos
� Pronóstico
� Hipertensión pulmonar:
� Adultos
� Pérdida de elasticidad
� ICC derecha
MARCADORES CARDIOPULMONARES
� ICC derecha
� Tromboembolización:
� Endoarteritis: oclusión de arteriolas
� Desprendimiento íntima lesionada
� Muerte de parásitos
MARCADORES CARDIOPULMONARES
� Muerte de parásitos
� Valorar las lesiones producidas
� Grado de severidad
� Pronóstico
MARCADORES CARDIOPULMONARES
Integridad Miocárdica
� Troponinas T e I:� Proteínas musculares estructurales
� Isoformas cardiacas específicas
Necrosis: pérdida de integridad de la membrana� Necrosis: pérdida de integridad de la membrana
Troponinas T e I en dirofilariosis
� Troponina T: valores normales
� Troponina I: valores ligeramente aumentados
� Troponina I es un marcador más sensible que la
troponina Ttroponina T
Integridad Miocárdica
� Mioglobina:� Proteína de bajo peso molecular
� Función: fijar el oxígeno en las células musculares
Músculo cardíaco y esquelético� Músculo cardíaco y esquelético
Mioglobina en dirofilariosis
� Traumatismo torácico
� Dilatación vólvulo-torsión
� Dirofilariosis canina:
� 18.8% de perros amicrofilarémicos� 18.8% de perros amicrofilarémicos
� 23.9% de perros microfilarémicos
Marcadores de tromboembolismo pulmonar
� Dímero-D:� Evalúa presencia de procesos tromboembólicos
� Producto final de la degradación de un trombo
Dímero-D
� Elevadas concentraciones:
� Mayor formación y degradación de fibrina
FIBRINóGENO
TROMBINA
FACTOR XIII
FIBRINA
PLASMINA
DÍMERO-D
Dímero-D en dirofilariosis
� 47% presentan valores patológicos
� Especialmente perros microfilarémicos
� incrementa la tendencia al desarrollo de trombos y
CID CID
*
DIROFILARIOSIS FELINA
� Los gatos también pueden verse infectados
� gatos de exterior y de interior
� Prevalencia: 5-10% de perros ??
� SUB-DIAGNOSTICADA!!� SUB-DIAGNOSTICADA!!
� Gran Canaria: 34%
DIAGNÓSTICO
� Más complicado
� Fácil pasarla por alto
� Bajo número de parásitos
� Combinar varias técnicas� Combinar varias técnicas
� Serología
� Radiología torácica
� Ecocardiografía
Tests comerciales
� Antígenos de hembras adultas
� Resultado negativo:
� Parásitos machos
� Parásitos inmaduros o juveniles� Parásitos inmaduros o juveniles
� Antigenemia: > 6-8 meses
Detección de anticuerpos
� Ac filarias desde los 2 meses post-infección
� Falsos positivos: contacto con el parásito
� Falsos negativos: 14-20% en gatos infectados
Detección de anticuerpos
Ray Dillon and Byron Blagburn, 2007
� Anticuerpos anti-WSP
� Proteína de superficie de Wolbachia (WSP)
Detección de anticuerpos
Microfilaremia
� Muy poco probable
� < 20%
Radiología torácica
� Principales hallazgos radiológicos: � Arterias lobares y pulmonares: aumento y mayor
tortuosidad
� Proyección DV y LL
Radiología torácica
� Silueta cardíaca no suele modificarse� Patrón pulmonar broncointersticial focal o multifocal
� Suele desaparecer espontáneamente en unos meses
La mitad de los gatos presentan alguna alteración radiográfica
Ecocardiografía
� Test antígenos negativo, pero sospechamos
� DÓNDE BUSCAR:� Arterias pulmonares � Arterias pulmonares
principal y lobar derecha� Observar todas las
localizaciones posibles
� Detecta parásitos en un 40-78%
Consultations in Feline Internal Medicine (Fifth Edition)
Cuadro diagnóstico
ANTICUERPOS
NEGATIVO: Bajo índice sospecha
POSITIVO: Alto índice sospecha
ANTÍGENOS
NEGATIVO: Bajo índice sospecha
ANTÍGENOSPOSITIVO: DIAGNÓSTICO
RADIOGRAFÍATÓRAX
NORMAL: Bajo índice sospecha
ALTERACIONES: Alto índice sospecha
ECOCARDIOGRAFÍA
NO PARÁSITOS: No influye índice sospecha
SÍ PARÁSITOS: DIAGNÓSTICO