diagnóstico parasitológico · •uso de antidiarreicos, antibióticos, antiácidos, vaselina e...

Diagnóstico Parasitológico

Taís Rondello Bonatti

1

• Protozoários intestinais

CDC, 2016

Introdução

Giardia duodenalis

- Prevalência: 8 a 30% em países emdesenvolvimento; 0,4 a 7,5% em paísesdesenvolvidos

Cryptosporidium spp.

- 30 a 50% das mortes por diarreia emcrianças abaixo de 5 anos

Entamoeba histolytica

- 50 milhões de casos e 100 mil mortes porano

2

Introdução

• Helmintos transmitidos pelo solo

CDC, 2016

Ascaris lumbricoides

• 807 milhões – 1,1 bilhão

Trichuris trichiura

• 609 – 795 milhões

Ancilostomatídeos (Necator americanus eAncylostoma duodenale)

• 576 – 740 milhões

3

Introdução

• Parasitos do sangue e tecidos

CDC, 2016

Leishmania spp.

• Cutânea: 700 mil a 1,2 milhões novos casos por ano

• Visceral: 200 mil a 400 mil novos casos por ano

Plasmodium spp.

• 2015: 214 milhões de novos casos de malária e 438.00mortes

4

Introdução

• Brasil: decréscimo da prevalência (?) - muitas doenças não são denotificação obrigatória

• Aumento da consciência sobre a importância das doenças parasitárias

• Médicos: não vão realizar os exames mas precisam entender ascapacidades e limitações de cada método

Garcia, 2007; CDC, 2016 5

Abordagem ao paciente:

• Necessidade do histórico completo: particularmente viagens

• Sintomas podem ser sutis e mudar ao longo do tempo

• Histórico geral também é importante: ocupação, hobbies, atividades de lazer, dieta, medicamentos

• Dificuldade no diagnóstico clínico

• Não permite diferenciação específica do agente infeccioso

Introdução

6

Introdução

• Necessidade do diagnóstico laboratorial

• Diagnóstico incorreto: procedimento e interpretação

• Tratamento do paciente: demonstração definitiva do agenteetiológico

Garcia, 2007. 7

PARASITOS INTESTINAIS

8

Exame parasitológico de fezes

EPF ou exame coproparasitológico:Análise laboratorial a partir de amostra(s) de fezes

Não faz parte dos exames complementaressolicitados

Parasitoses intestinais não consideradas nahipótese diagnóstica

- Médico desconhece o EPF

Exames baratos, não invasivos, de fácil execução

- Evita a realização de exames mais invasivos, onerosos e complexos9

Exame parasitológico de fezes

Reforçar as instruções de

seguir as recomendações da coleta do material

MédicoParticipação ativa: quem vai realizar a

coleta

Paciente

10

Colheita e preservação das amostras

• Maioria parasitos intestinais: detecção por exame de fezes• Outras amostras: urina, escarro, secreções urogenitais, aspirados, tecidos,

conteúdo duodenal, amostras obtidas por biópsia

• Fezes eliminadas no vaso sanitário ou no solo: inadequadas

Urina: destruição de trofozoítos

Presença de organismos de vida livre

11


• Estágios usuais de diagnóstico:

• Ovos e larvas de helmintos

• Cistos, oocistos e trofozoítos de protozoários

12


• Identificação segura e correta:

• Critérios morfológicos

• Colheita adequada

• Boa preservação da amostra

Fragmentos de alimentos, células vegetais, grãos de pólen, outros artefatos. 13

Colheita das amostras: Cuidados

• Fezes emitidas espontaneamente

• Detecção e identificação qualidade da amostra entregue nolaboratório

• Quantidade mínima: 20 a 30g de fezes

• Fezes pastosas ou mucosas: esfregaços corados

• Fezes formadas: técnicas de concentração

• Nunca devem ser incubadas a 37oC ou congeladas

14

Colheita das amostras: Cuidados

• Fezes emitidas espontaneamente

• Uso de antidiarreicos, antibióticos, antiácidos, vaselina e óleosminerais: amostra insatisfatória para análise• Antibióticos: afetam flora intestinal - diminuição ou ausência temporária dos

organismos nas fezes

• Exames com aplicação de contraste:• Bário e bismuto: excesso de substâncias cristalinas – podem destruir

trofozoítos devido à ação abrasiva

• Colheita deve ser adiada por período de 7 a 10 dias ou feita antes do exame

15

Colheita das amostras

• Frasco: boca larga, capacidade de 50mL, limpos, vedados, acondicionadosem plástico transparente

• Identificação do frasco:• Nome, número de identificação, nome do médico, data e horário da

colheita

16


17


• Amostras múltiplas

• Intermitência da passagem de certos parasitos a partir doshospedeiros• Cistos de Giardia duodenalis: 2 a 3 até 7 a 8 dias

• Distribuição não uniforme dos ovos de helmintos• Enterobius vermicularis: liberação esporádica

• Estágios dos protozoários• E. histolytica (colite amebiana): trofozoítos mais numerosos na superfície do

que no centro do bolo fecal

• Limitações das técnicas de diagnóstico

18


• Amostras múltiplas

• Esquemas mais utilizados (antes de iniciar o tratamento):

• Após o tratamento:

• Protozoários: três a quatro semanas

• Helmintos: uma a duas semanas; tênia – cinco a seis semanas

Três amostras em dias alternadosNão ultrapassar 10 dias

Seis amostras em dias alternadosNão ultrapassar 14 dias

19


• Fezes emitidas com o uso de laxantes

• Apenas com solicitação médica: amebíase, giardiose, estrongiloidíase

• Indicação: série de exames negativa

• Laxantes salinos: menos danos morfológicos aos parasitos• Fosfato de sódio, sulfato de sódio tamponado

• Fezes induzidas por purgativos devem ser totalmente colhidas elevadas imediatamente ao laboratório

• Indicada para clínicas e hospitais

20


• Estabilidade das amostras

Amostras líquidas

• Análise em 30 minutos

Amostras pastosas

• 1 hora após a evacuação

Amostras sólidas

• 24 horas após excreção

Quando não for possível: material deverá ser

preservado

21

Preservação da amostra fecal

• Amostras que não são entregues imediatamente ao laboratório

• Refrigeração: 3oC a 5oC (temporariamente)• Recipientes hermeticamente fechados

• Ovos e larvas de helmintos e cistos: viáveis por vários dias

• Larvas de Strongyloides stercoralis e ancilostomatídeos: podem sofreralterações

22


• Uso de conservantes

• Três partes de conservante para uma parte de fezes

Não precisam ser enviadas imediatamente ao laboratório

Não necessitam de manutenção em baixas temperaturas

Análise não precisa ser feita imediatamente

23


• Conservantes mais usados

• Solução de formaldeído

• Concentrações:• 5%: cistos de protozoários

• 10%: oocistos de coccídios, esporos de microsporídios, ovos e larvas dehelmintos

• Neutra: mais eficaz na manutenção das características morfológicas: soluçãode formaldeído tamponada com fosfato de sódio

• Manutenção da amostra: até 1 mês

24


• Formaldeído a 5% e 10% (tamponada e não tamponada)

- Excelente preservador deamostras fecais (cistos, oocistos,esporos, ovos e larvas de helmintos)

- Fácil preparação e longo períodode validade

- Organismos são fixados entre 2 e 4horas (Exceção: A. lumbricoides)

- Não preserva os trofozoítos deprotozoários

- Morfologia dos parasitos não épreservada adequadamente para ascolorações permanentes

Van

tage

ns

Desvan

tagens

25



• Fixador de Schaudinn

• Fezes frescas ou amostras da superfície da mucosa intestinal

• Preparações de esfregaços permanentes: protozoários intestinais

• Contém cloreto de mercúrio II na sua fórmula: extremamente tóxicoao homem e ao meio ambiente

26


• Fixador de Schaudinn

- Preservação de fezes frescas ouamostras da superfície da mucosaintestinal

- Excelente preservação detrofozoítos e cistos de protozoários

- Ótimos resultados de coloração:hematoxilina férrica ou tricrômico

- Não recomendado para técnicas deconcentração

- Cloreto de mercúrio II

- Fraca capacidade de adesão àlâmina quando usado para amostraslíquidas ou mucóides

Van

tage

ns

Desvan

tagens

27



• Álcool Polivinílico (APV)

• Resina solúvel em água incorporada ao fixador de Schaudinn

• Pó que serve como um adesivo para o material fecal na lâmina demicroscopia

28


• Fixador APV

- Excelente preservador detrofozoítos e cistos para coloraçãode esfregaços permanentes

- Adesão das amostras fecais àslâminas

- Longo período de validade (6meses a 1 ano)

- Organismos fixados em uma ouduas horas

- Contém o cloreto de mercúrio II

- Difícil preparação no laboratório

- Não indicado para técnicas deconcentração

- Ovos de T. trichiura e cistos deGiardia não são facilmenteconcentrados

- Material não pode ser usado emtestes imunológicos

Van

tage

ns

Desvan

tagens

29



• MIF = Mertiolato (mercuriocromo), Iodo e Formol

• Ovos ou larvas de helmintos, cistos e oocistos de protozoários

• Exame direto a fresco: imediato ou após várias semanas

30


• Fixador MIF

- Exame direto a fresco: reagentespreservam e coramsimultaneamente

- Fácil preparação

- Longo período de validade

- Estudos epidemiológicos emcampo

- Organismos fixados entre uma deduas horas

- Morfologia dos parasitos é alteradanos esfregaços permanentementecoradosV

anta

gen

sD

esvantagen

s

31


• Conservantes mais usados• SAF = Acetato de Sódio-Ácido Acético-Formaldeído

• Acetato de sódio: tampão

• Bom rendimento: cistos, oocistos e trofozoítos• Trofozoítos de Giardia e amebas (não se conservam em MIF ou formol 10%)

• Fezes formadas e diarreicas

• Substitui fixador de Schaudinn (bicloreto de mercúrio): extremamentetóxico

32


• Fixador SAF

- Concentração e preparação deesfregaços permanentementecorados

- Fácil preparação

- Longo período de validade

- Excelentes resultados de coloração(Hematoxilina férrica)

- Organismos fixados entre 1 e 2horas

- Requer uso de albumina fixadorapara a adesão da amostras à lâmina

- Resultados regulares de coloraçãoquando corados pelo tricrômico

Van

tage

ns

Desvan

tagens

33


• Coletores com preservantes

34



TF-Test (Three Fecal Test)

35



36



37

Fase Analítica

Exame macroscópico

Exame microscópico

38

Exame Macroscópico

• Aspectos:• Consistência

• Odor

• Cor

• Presença ou ausência de:• Sangue, muco, pus, proglotes, vermes adultos, fragmentos de vermes ou

outras condições anormais

• Deve anteceder o exame microscópico

39

Formadas

Semi-formadas

Pastosas

Líquidas

Cistos

Trofozoítos

Ovos e larvas de helmintos: em todos os tipos de amostras fecais

mas dificilmente encontrados em amostras

líquidas

Exame Macroscópico

40

• Tamisação

• Vermes adultos: Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis,proglotes das tênias

• Vantagens: demonstração e colheita de pequenos helmintos,proglotes e escóleces.

• Identificação: ácido acético glacial ou Tinta da China (nanquim)

Exame Macroscópico

41

• Tamisação

Exame Macroscópico

PROGLOTE MADURA

- Órgãos reprodutores ♂

e ♀ bem desenvolvidos

PROGLOTE GRÁVIDA-Sem distinção dos órgãos

- Útero ramificado

Vermes Adultos(Ascaris lumbricoides,

Enterobius vermicularis)42

Exames Microscópicos

• Visualização:

• Ovos ou larvas de helmintos

• Cistos, oocistos ou trofozoítos de protozoários

• Processos de enriquecimento e coloração

• Métodos gerais: sedimentação espontânea e centrifugação

43

Exames Microscópicos

• Qualitativos: mais utilizados (presença de formas parasitárias)

• Quantitativos: contagem de ovos nas fezes – intensidade doparasitismo• Pouco utilizados: medicamentos antiparasitários levam em conta o peso

corporal e não a carga parasitária (Stoll-Hausheer e Kato-Katz*)

44

Exames Qualitativos

• Exame Direto a Fresco

• Simples e eficiente: trofozoítos vivos dos protozoários

• Solução salina a 0,85% (cloreto de sódio) e iodo

• Se uso da formalina: não precisa a solução salina

• Amostras não refrigeradas

Princípio: avaliar carga parasitária; diagnóstico rápido

• Movimentação de trofozoítos – com uso de solução salina

45

Exames Qualitativos


Revisão de lâminas previamente negativas

46

Quantidade grande de

amostra fecal


• Uso de colorações temporárias:• Núcleos dos trofozoítos de amebas, cistos

• Soluções indicadas: Iodo• Lugol (iodeto de potássio): diferentes concentrações

• Quensel: diferencia os núcleos de três gêneros de amebas• Entamoeba, Iodameba e Endolimax

• Sudan III, álcool etílico, azul de metileno e cloreto de cádmio

Exames Qualitativos

47

• Técnicas de concentração

• Objetivos:

Exames Qualitativos

Aumentar o número de cistos, oocistos e ovos oularvas na preparação

Eliminar a maioria dos detritos fecais

Apresentar os organismos em um estado inalterado:facilitar a identificação

48

• Técnicas de flutuação• Diferença de densidade específica: ovos de helmintos e cistos e

oocistos de protozoários e o material fecal

• Reagentes de alta densidade

• Ovos considerados pesados: Ascaris, Taenia, Schistosoma e Fasciola

Formas Densidade

Ovos e cistos 1,05 a 1,15 g/mL

Exames Qualitativos

49

• Técnicas de flutuação

- Formação na superfície dotubo de uma membrana claracom poucos detritos fecais

- Remoção seletiva de cistose ovos mesmo quandopresentes em pequenosnúmeros

- Alta densidade dosreagentes: colapso daparede dos ovos e cistos –observação deve ser feitaentre 10 e 20 minutos

Van

tage

ns:

D

esvantagen

s:

Exames Qualitativos

50

•Técnicas de flutuação• Flutuação em solução saturada de cloreto de sódio (d=1,20g/mL) =

Técnica de Willis

• Ovos com densidade específica baixa: ancilostomatídeos

• Não recomendado para ovos de trematódeos, E. vermicularis e A.

lumbricoides

• Cistos de protozoários: retração

Exames Qualitativos

51

•Técnicas de flutuação

Exames Qualitativos

• Coar / filtrar as fezes (fezes frescas)

• Homogeneização (Frasco de boca larga)

• Adição de Solução NaCl

• Homogeneização

• Adição de NaCl (Menisco positivo)

• Lamínula / 10 a 15 min

52

• Técnicas de flutuação• Outras soluções com o mesmo princípio da Técnica de Willis:

• Flutuação em solução saturada de sulfato de zinco (1,18 g/mL)

• Flutuação em sulfato de magnésio e Cloreto de sódio

Exames Qualitativos

53

• Centrífugo – flutuação em solução saturada de sulfato dezinco (d=1,18 g/mL) = Técnica de Faust

• Cistos de protozoários, ovos e larvas de helmintos

• Não é adequada para ovos de trematódeos, cestódeos e A.lumbricoides (inférteis)

• Pode ser usada para fezes preservadas em formaldeído (5% ou 10%),SAF e APV (densidade deve ser ajustada para 1,20 g/mL)

Exames Qualitativos

54

Exames QualitativosRemover o

sobrenadanteSolução de

sulfato de zinco

Recolher a película superficial com alça

650 x g

2 a 3 min650 x g

55

• Técnicas de sedimentação• Objetivos:

• Aumento do número de ovos, larvas, cistos• Separação das gorduras e óleos

• Gravidade (espontânea) ou centrifugação (MIFC)• Formas retidas no fundo do tubo• Detritos suspensos na superfície

• Desvantagem: grande quantidade de detritos fecais

Exames Qualitativos

56

• Técnicas de sedimentação

• Sedimentação espontânea = Método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ)

• Fundamento: sedimentação espontânea em água• Ovos, larvas e cistos

• Vantagens: necessidade mínima de vidraria, dispensável o uso dereagentes e da centrifugação

• Desvantagem: grande quantidade de detritos, dificulta a leitura daslâminas

Exames Qualitativos

57

• Técnicas de sedimentação

• Sedimentação espontânea = Método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ)

Exames Qualitativos

58

• Técnicas de sedimentação• Centrífugo-sedimentação pela formalina-éter ou Centrífugo-Sedimentação

pela formalina-acetato de etila• Cistos de protozoários*

• ovos e larvas de helmintos

• pH da formalina pode afetar a recuperação:

• pH neutro é mais eficaz

Exames Qualitativos

pH Parasito

10 Ovos de Ascaris lumbricoides e S. japonicum

Entre 4,0 e 7,0 Ancislostomatídeos

59

Exames Qualitativos

1 a 2g de fezes em água / filtrar

Completar o tubo com água

Centrifugar650 x g / 1 min

Centrifugar500 x g / 1 min

Ressuspender com formalina (10%/pH neutro)

Repouso por 5 minAdicionar 3 mL de éter (ou acetato de

etila)

Fechar o tuboAgitar vigorosamente (30s)

Analisar o sedimento

60

• Centrífugo-sedimentação pela formalina-éter ou Centrífugo-Sedimentação pela formalina-acetato de etila

Exames Qualitativos

Restos fecais e gordura

Éter

Formalina

Sedimento

61

• Métodos específicos para coccídios

• Centrífugo-flutuação em solução saturada de sacarose = técnica deSheather• Oocistos de Cryptosporidium spp.

• Centrífugo-sedimentação pelo Formaldeído-Éter modificado

• Oocistos de Cryptosporidium spp. e Cyclospora cayetanensis

Exames Qualitativos

63

• Métodos específicos para coccídios

• Coloração de Ziehl-Neelsen• Coloração rosa ou vermelho / Fundo da preparação: azul

Exames Qualitativos

64

Exames Quantitativos

• Produção de ovos X carga parasitária

Ascaris lumbricoides

Trichuris trichiura

Ancilostomatídeos

• Necator americanus

• Ancylostoma duodenale

Schistosoma mansoni

65


• Estimativa da contagem dos ovos varia em relação direta com a acuidadedo procedimento

• Intensidade da infecção: número de ovos encontrados

• OPG = ovos por grama: índice de densidade dos ovos nas fezes

• OPD = ovos por dia: multiplicação do OPG pelo peso total (g) do materialfecal de 24 horas

OPD = OPG x g

• OPDPF = ovos por dia por fêmeaOPDPF = OPD ÷ número de vermes

66


• Método de Kato-Katz

• Ovos de helmintos• Não é indicado para protozoários e larvas de helmintos

• Vantagem: quantidade significativa de fezes – 50 a 60 mg

• Lamínulas de celofane: glicerina e solução de verde malaquita• Melhora a visualização da lâmina

• Torna os ovos mais visíveis

• Necessidade de amostras frescas ou refrigeradas

67



68



Ovo de Schistosoma mansoni visto em exame de fezes pelo Kato-Katz 69

• Não existe método capaz de diagnosticar ao mesmo tempo todas asformas parasitárias

• Mais gerais: sedimentação espontânea e centrifugação

• Rotina do EPF:• Diagnóstico de vários parasitos intestinais

• Fácil execução e baixo custo

• Importante interação entre médico e laboratório: execução dométodo mais adequado a cada situação

Escolha do Método

70

• Garantia de qualidade no EPF:

• Algumas espécies são evidenciadas apenas por técnicas especiais

• Apenas um exame isolado com resultado negativo não deve serconclusivo

• Produção de cistos, ovos e larvas não é uniforme ao longo do dia

Escolha do Método

71

PARASITOS DO SANGUE E TECIDOS

72

Principais parasitos

Trypanosoma cruzi

Fora das hemácias

Plasmodiumsp.

P. vivax

P. falciparum

P. Malariae

Hemácias

Leishmania sp.

Fora das hemácias

Filárias

Wuchereriabancrofti

Mansonellaozzardi

Fora das hemácias

73

• Estirados e Gota espessa

• Sangue total colhido com anticoagulante

• Sedimento de métodos de concentração: Trypanosoma sp. emicrofilárias

• Apenas uma amostra de sangue não é suficiente para o diagnóstico:• Colher entre 6 e 12 horas (3 a 5 dias) para que não haja suspeita de infecção

Esfregaços sanguíneos

74

• Estudo das hemácias, contagem de leucócitos

• Diagnóstico e estudo diferencial de Plasmodium sp. (alta densidade)

Esfregaço Estirado

75

Esfregaço Estirado

Lâmina corada de boa qualidade76

Esfregaço Estirado

77

• Quantidades relativamente grandes de sangue em pequena área

• Coleta:

Esfregaço Espesso (Gota Espessa)

78

Permite detectar a infecção mesmo com parasitemias leves

Esfregaço Espesso (Gota Espessa)

79

Indicada para inquéritos epidemiológicos

Combinação de esfregaços

80

Coloração de esfregaços sanguíneos

Giemsa

- Diferenciação nuclear e/ou citoplasmática (plaquetas,eritrócitos, leucócitos e parasitos)

- Esfregaços estirados (fixados com álcool metílico)

- Gota espessa

Coloração de Leishman

- Esfregaços estirados

- Eosina-azul-de-metileno

81

• Centrifugação do sangue (Creme Leucocitário)

• Leishmania donovani, Trypanosoma sp. e microfilárias• Sangue colhido com EDTA, heparina e/ou citrato de sódio (anticoagulantes)

Concentração do sangue

Esfregaço estirado – pode ser corado

82

• Centrifugação do Micro-Hematócrito

• Utilização de tubos capilares

• Diagnóstico rápido da malária e Doença de Chagas (baixa parasitemia)

Concentração do sangue

83

IMUNODIAGNÓSTICO

84

• Toxoplasmose

• Doença de Chagas (fase crônica)

• Abscesso amebiano

• Leishmaniose visceral

• Esquistossomose (fase crônica)

• Cisticercose

• Hidatidose

• Larva migrans visceral (toxocaríase)

Considerações Gerais

Grande importância da detecção

de anticorpos

85

• Colheita da amostra - depende do sítio de infecção do parasito:• Soro, líquor, urina, fezes, tecidos

• Importância de verificação dos antígenos:

• Imunodiagnóstico

• Interpretação da imunopatologia

• Quantificação de diferentes respostas imunológicas do hospedeiro

• Avaliação do potencial de vacinas


86

• Técnicas que não usam marcadores:

• Detectam / quantificam as consequências da ligação Ag - Ac• Reações de Precipitação• Reações de Aglutinação• Reação de Fixação do Complemento

• Técnicas que usam marcadores:

• Detectam / quantificam diretamente a ligação Ag - Ac• ELISA (Enzyme-liked Immunosorbent Assay)• Imunofluorescência (Direta e Indireta)


87

• Quantificação de precipitados formados pela reação Ag-Ac

• Proporções adequadas de Ag-Ac

• Proporção ideal: zona de

Equivalência

• Atualmente:

Emprego de espectrofotômetros

Reações de Precipitação

Antígenos(solúveis)

Anticorpos

Zona de equivalência: ppt visível

88

• Exemplos:

• Imunodifusão radial dupla

• Imunodifusão radial simples

• Imunoeletroforese

• Imunofixação

Reações de Precipitação

89

• Componente conhecido (Ag ou Ac): ligado à superfície decélulas/partículas – facilita a visualização

• Exemplos:

• Reação de Aglutinação Direta

• Reação de Aglutinação Indireta ou Passiva

• Reação de Hemaglutinação

Reações de Aglutinação

90

• Detecção de anticorpos específicos

• Reconhecimento de anticorpos na superfície dos eritrócitos –aglutinação

• Direta: determinantes antigênicos fazem parte da própria hemácia

• Indireta: hemácias são suporte para antígenos que são adsorvidos àsuperfície

Reações de Hemaglutinação

91


Hemaglutinação Direta

92

Hemaglutinação Indireta

• Doença de Chagas: Hemaglutinação Indireta


93

• Detectar Ac fixadores do complemento

• Ac só fixam complemento após a interação com Ag específico

• Etapas:

• 1ª: Soro + extrato antigênico solúvel e complemento

• 2ª: Sistema hemolítico para detectar se complemento está livre ounão

Reação de Fixação do Complemento

94

Reação de Fixação do Complemento

95

Soro + extrato antigênico solúvel e

complemento

Adição do complemento

Adição de células indicadoras

• Enzyme-liked Immunosorbent Assay

• Elevada sensibilidade, especificidade, rapidez e baixo custo

• Marcador é uma enzima que na presença de um substrato altera suacor: diferenciação entre positivo e negativo

ELISA

96

ELISA

97

• Marcação do antígeno ou do anticorpo com fluorocromos

• Direta: usa anticorpo antígeno-específico marcado com substânciafluorescente

• Indireta: detecção de anticorpos dirigidos contra alvo antigênicoespecífico fixado em uma lâmina• Referência na sorologia de muitas parasitoses: toxoplasmose, Doença de

Chagas e malária

Imunofluorescência

98

Direta

Imunofluorescência

Formas amastigotas de Leishmania em esfregaço de aspirado de linfonodo poplíteo

de cão naturalmente acometido por leishmaniose visceral, marcadas pelo anticorpo policlonal anti-Leishmania

conjugado com fluoresceína (Laurenti, 2009)

99

Imunofluorescência

IndiretaOocistos de

Cryptosporidium sp. oocistos (setas

amarelas)

Cistos de Giardiaspp. (setas vermelhas)

Kit para imunofluorescência 100

BIOLOGIA MOLECULAR

101

• Adoção de tecnologias de análise de ácidos nucléicos

• Vantagens: alta sensibilidade e especificidade

• PCR = Polymerase Chain Reaction• Amplificação exponencial in vitro de pequenas quantidades de DNA

• Qualquer sequência alvo de DNA pode ser amplificada

• A localização é feita pelos primers


102

• Extração de DNA e RNA• Sangue, pele, músculos

• Kits comerciais ou fenol / clorofórmio (tóxico)

Reação em Cadeia da Polimerase

103

• Preparo da PCR


104

• PCR consiste de três etapas principais:


105

• Visualização dos resultados:


106

Resultado da PCR após ser realizada uma eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida.

IDENTIFICAÇÃO HISTOLÓGICA

107

Protocolo Geral

108

Fixação Processamento Corte

Coloração (Histoquímica e

Imuno-histoquímica)

Montagem

Lâminas histologia

109

Granuloma hepático devido a Schistosoma mansoni Amastigotas de T. cruzi em tecido cardíaco

diagnóstico parasitológico · •uso de antidiarreicos, antibióticos, antiácidos, vaselina e...

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