cultivo celular prática - ufpel
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Cultivo Celular – Prática
Fernanda Nedel
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Cronograma
• Descongelamento
• Manutenção da cultura
Troca de meio
Repique
• Congelamento
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2. Descongelamento
Neuroblastoma - SH-SY5Y
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2. Descongelamento
Colocando diretamente na garrafa de cultura.
Utilizando a centrífuga.
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2. Descongelamento – Garrafa de cultura
Colocando diretamente na garrafa de cultura.
Processo Rápido
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Após ±4 horas
10% SFB
DMEM
Troca do Meio de Cultura
2. Descongelamento – Garrafa de cultura
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Utilizando a centrífuga.
10% SFB/DMEM
2. Descongelamento – Centrífuga
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1200 rpm
5 min
Banco de Células do Rio de Janeiro (BCRJ/UFRJ)
2. Descongelamento – Centrífuga
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10% SFB/DMEM
2. Descongelamento – Centrífuga
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2. Descongelamento
Estufa de Co₂
37 ˚C
5% de Co₂
95% de umidade
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Cronograma
Descongelamento
• Manutenção da cultura
Troca de meio
Repique
• Congelamento
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3. Manutenção da Cultura
Carcinoma de Próstata Humano
LNCaP
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Neuroblastoma - SH-SY5Y
Manutenção da Cultura
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I. Visualização das Garrafas de Cultivo
3. Manutenção da Cultura
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pH 7,6 pH 7,4 pH 7,0 pH 6,5
3. Manutenção da Cultura
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Fibroblasto de Pulmão Humano – IMR-90
II. Visualização da morfologia e viabilidade celular
3. Manutenção da Cultura
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Células não confluentes
Células em confluência
Repique
Troca do meio
3. Manutenção da Cultura
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III. Trocas do Meio
1. Remoção do Meio
2. Lavagem com PBS
3. Remoção do PBS
4. Colocação de Meio Novo
5. Estufa
37 ˚C
5% de Co₂
95% de umidade
3. Manutenção da Cultura
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IV. Repique
1. Remoção do Meio
2. Lavagem com PBS
3. Remoção do PBS
4. 0,25% Tripsina/EDTA
3. Manutenção da Cultura
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Sem Tripsina
Tripsina
5. Colocação de Meio Novo
6. Pipetagem
7. Transferência para duas garrafas de cultivo
3. Manutenção da Cultura
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Cronograma
Descongelamento
Manutenção da cultura
Troca de meio
Repique
• Congelamento
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4. Congelamento
Fibroblasto Normal de Pulmão
IMR-90
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4. Congelamento
Meio de Congelamento
95% SFB
5% DMSO
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“Repique”
1. Remoção do Meio
2. Lavagem com PBS
3. Remoção do PBS
4. 0,25% Tripsina/EDTA
4. Congelamento
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Sem Tripsina
Tripsina
5. Colocação de Meio Novo
6. Pipetagem
7. Transferência para duas garrafas de cultivo
4. Congelamento
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10% SFB/DMEM
1. Contagem Celular
2. Congelamento
4. Congelamento
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4. Congelamento
1. Contagem Celular
20 µL
1˚
20 µL
2˚
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4. Congelamento
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4. Congelamento
Q1+Q2+Q3+Q4 x 10⁴
4
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2. Congelamento
1 200 rpm
10 min
Banco de Células do Rio de Janeiro (BCRJ/UFRJ)
4. Congelamento
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Meio de Congelamento
95% SFB
5% DMSO
4. Congelamento
Correta Identificação
- Tipo de Cél.
- Data de Conge.
- Responsável
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4. Congelamento
Freezer -70
Cooler "Mr. Frosty”
1 ˚C/min
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4. Congelamento
Processo LENTO