Buenos Aires, 27 al 31 de mayo de 2008

Nidia E. Lucero Nidia E. Lucero

Servicio de BrucelosisServicio de BrucelosisINEI-ANLIS Carlos G Malbran

II Curso Avanzado II Curso Avanzado WHO Global WHO Global SalmonellaSalmonella Surveillance (WHOSurveillance (WHO--GSS)GSS)

1er Taller WHO1er Taller WHO--GSS / PulseNetGSS / PulseNet

Brucelosis Humana Diagnstico Serolgico

y Bacteriolgico

GGnero nero BrucellaBrucellaEspecies

terrestresbiovar

Patogenicidad

para el Hombre

Husped

preferido

B. melitensis 1 AltaCabras y

Ovejas

2

3

B. abortus 1 Moderada Bovinos

2

3

4

5

6

9

B. suis 1 Alta Cerdos

2 SD Cerdos

3 Alta Cerdos

4 Moderada Renos

5 Alta Roedores

B. ovis SD Ovinos

B. canis Baja Perros

B. neotomae SD Ratas

Especies marinasEspecies marinasEspecies marinasEspecies marinas

B. pinnipediae

B. cetaceae

1994

Reservoriosalvaje

Reservoriodomstico

Leche y derivados

Contactoindirecto

Contactodirecto

Ingestin

Va inhalatoria

Va digestivaHumano

Cadena Epidemiolgica

Fuente: Medicina laboral: normas preventivas, MS

ClasificaciClasificacin de Cason de Caso

Sospechoso (CL+Epi)

Probable (+ Lab Tamiz)

Confirmado (+ Lab confirma)

Diagnstico de Laboratorio

Ensayos Directos

Probar la presencia del MO

Estudios bacteriolgicos

Aislamiento de cepas de Aislamiento de cepas de BrucellaBrucella

SangreLisis

Hemocultivo

Mdula LCR

AbscesosBiopsias

Lquido articularLquido prosttico

Medio cultivo slido

Medio cultivo lquido

Aislamiento de cepas

MEDIO DE CULTIVO LQUIDO

MONOFSICO BIFSICO SISTEMA AUTOMATIZADO

Hemo Brucella (Britania, Bs.As. Argentina )

bio Mrieux,Marcy ltoile,

France

BactecBactAlert

Probabilidad de AislamientoProbabilidad de Aislamiento

Fiebre alta 86%

Fiebre moderada 75%

Sin fiebre 28%

Es mayor si la muestra se toma al comienzo de los sntomas

Cocobacilos gram negativos Crecimiento lento (48h)Colonias no hemolticasColonias no pigmentadas

Trabajar en Cabina Seguridad Biolgica

Satlite Pos Satlite Neg

Oxidasa-Catalasa Pos

Oxidasa-Catalasa Neg

Considerar Francisella

Considerar Haemophilus

Enviar al Lab de Referencia

UreaNeg

UreaPos

Considerar otro gram Neg

Flujograma gnero Brucella vs otros gram negativos

Gnero Brucella

Bioterrorismo

Grupo B

Grupo de riesgo 3

Manual bioseguridad, OMS, 2005

http://emergency.cdc.gov/firsthours/es/bioterrorism.asp

TipificaciTipificacin del gn del gnero nero BrucellaBrucella

Sensibilidad a los antibiticos

Morfologa de la colonia

Produccin de SH2

Urea (Bauer)

Sueros monoespecficos anti A, M, R

Crecimiento en presencia de bacteriostticos

Crecimiento en medio con alcohol polihidroxilado

Fagotipia

Cepas de Brucella aisladas de Humanos ( 402)Argentina 1994-2007

Lucero et al., 2007

B. melitensis

40%

B. abortus

20%

B. canis

1%

B. suis

39%

Especies y biovars de Brucella aisladas de

humanos (Argentina-1994-2007)

0

20

40

60

80

100

120

140

B.a

bort

us1

B. a

bort

us2

B. a

bort

usC

19

B. m

elite

nsis

1

B. m

elite

nsis

1a

B. m

elite

nsis

3B

. sui

s1

B. s

uis

1aB

. can

is

Diagnstico de Laboratorio

Ensayos Indirectos

Respuesta Inmune

Determinar la presencia de anticuerpos

GGnero Brucellanero BrucellaEspecies patEspecies patgenas para el hombregenas para el hombre

B.abortus

B.melitensis

B.suis

B. pinnipediae

B.cetaceae

B.canis

Morfologa lisa Morfologa rugosa

MMtodos todos SerolSerolgicosgicosTamizTamiz

HUDDLESON (PAT) VC 11% HUDDLESON (PAT) VC 11% pHpH 6.7+/6.7+/--0.30.3

ROSA DE BENGALA (RB) VC 8% pH 3.65+/-0.5

Aglutinacin Antgeno tamponado (BPA)VC 11% pH 3.65+/-0.02

AglutinaciAglutinacin con antn con antgeno geno tamponadotamponado (BPA)(BPA)

n Negativos Positivos

Pacientes con cultivo positivo 57 0 57

Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 307 306 1

Pacientes con evidencia clnica y positivos a RB y FC 142 0 142

506

Sensibilidad: 100%Especificidad: 99.67%

Antgeno: Suspensin de B.abortus 1119-3

Lucero & Bolpe, 1998

MMtodos todos SerolSerolgicosgicosConfirmatorios clConfirmatorios clsicossicos

WRIGHT (TAT) VC 4.5% WRIGHT (TAT) VC 4.5% pHpH 6.7+/6.7+/--0.30.3

2 MERCAPTO2 MERCAPTO--ETANOL (2ME)ETANOL (2ME)

FIJACIFIJACIN DE COMPLEMENTO (CF) N DE COMPLEMENTO (CF) 50% Hem50% Hemlisis, lisis, GlobulosGlobulos Rojos (GR) 2.8% Rojos (GR) 2.8%

Pruebas de uniPruebas de unin primarian primariaELISA de competiciELISA de competicin (CELISA)n (CELISA)

Sensibilidad: 98.3%Especificidad: 99.7%

Antgeno: S-LPS de B.abortus 1119-3MAb: especfico epitope porcin O-PS del S-LPS

n Negativos Positivos

Pacientes positivos (51 con cultivo y 65 serologa clsica) 116 2 114

Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 341 340 1

457CUTOFF >28% I

Lucero et al., 1999

Sensibilidad: 96.1%Especificidad: 97.9%

CUT-OFF >72mP

Antgeno: FITC conjugado con una porcin de la cadena O-PS del S-LPS de B.abortus 1119-3

n Negativos Positivos

Pacientes con cultivo positivo 76 3 73

Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 340 333 7

416

Lucero et al., 2003

Pruebas de uniPruebas de unin primarian primaria

Tcnica de polarizacin de la fluorescencia (FPA)

Prueba TamizPrueba Tamiz

MicroaglutinaciMicroaglutinacinn en portaobjeto (RSAT)en portaobjeto (RSAT)

Brucelosis canina

VC 7% pH 8.6 +/-0.1Carmichael & Joubert, 1987

Prueba confirmatoria Prueba confirmatoria

ELISA INDIRECTA (IELISA)

Lucero et al., 2005

IELISAIELISASensibilidad-Especificidad: 100%Cutoff: %P>27

Antgeno: B.canis M-

n Negativos Positivos

Casos positivos 17 0 17

Casos sospechosos 35 17 18

Casos asintomticos 110 110 0

Casos c/otros diagnsticos 9 9 0

Casos positivos a S-Brucella sp. 8 0 7

179

Lucero et al., 2005

DIAGNOSTICO SEROLOGICODIAGNOSTICO SEROLOGICODE BRUCELOSIS HUMANADE BRUCELOSIS HUMANA

SCREENING CONFIRMATORIAS

CLASICAS PRUEBAS DE UNION

PRIMARIA SCREENING

UNION PRIMARIA

PAT RB BPA TAT 2ME CF CELISA FPA RSAT IELISA

ANTIGENOS DE BRUCELLA EN FASE LISA ANTIGENOS EN FASE RUGOSA

Caso BPA TAT* CF* CELISA Especie/biovar

%I

1 Pos 1600 320 77 B. abortus 1

2 Pos 400 80 67 B. abortus 1

3 Pos 1600 40 65 B. abortus 2

4 Pos 800 40 52 B.melitensis 1

5 Pos 800 320 74 B.melitensis 1

6 Pos 6400 640 69 B. suis 1

7 Pos 400 640 83 B. suis 1

8 Pos 400 160 93 B. suis 1

Pacientes con aislamiento de S-Brucella sp.

Casos clnicos

* Recproca del ttulo

Suero Fecha* PAT BPA RB TAT CF CELISA RSAT** IELISA

Humano 2 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 32 87

3 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 16 73

8 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 2 36

Perro 1 3 Neg Neg 4 53

8 Neg Neg Pos+/- 23

Perro 2 3 Neg Neg Pos+/- 22

8 Neg Neg Neg 15

Cepa aislada Cepa aislada B. B. caniscanis

*Meses despus de la admisin

** Recproca del ttulo

Caso clnico

Nidia E. LuceroNidia E. LuceroSandra M. AyalaSandra M. Ayala

Gabriela I. EscobarGabriela I. EscobarGustavo LGustavo Lpezpez

DeborahDeborah B. B. HasanHasanSERVICIO DE BRUCELOSISSERVICIO DE BRUCELOSIS

INEIINEI--ANLIS DR. C. G. MALBRANANLIS DR. C. G. MALBRAN

nidia@elsitio.netnidia@elsitio.net