aula 1 coleta, transporte
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IFMT – Bela VistaCurso: EA
Análise Microbiológica de Alimentos
Profª. Dra. Nágela Magave Siqueira
Coleta, Transporte, Recepção ePreparo de Amostras para Análise
Microbiológica
Para que se faz análise microbiológica de um alimento?
Profa. Dra. Nágela Magave
Existe, por acaso, alguma atividade ou
produto, por exemplo, um investimento
financeiro, um medicamento ou um novo financeiro, um medicamento ou um novo
tipo de alimento, sobre o qual podemos
afirmar de antemão ser 100% seguro?
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Problema de segurança dos alimentos
• Situação em que uma ameaça à saúde
pública (real ou ainda não comprovada),
envolvendo um ou vários patógenos e umenvolvendo um ou vários patógenos e um
ou diversos produtos, exige atividades de
gerenciamento para o manejo do risco
associado.
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A identificação de um problema
• atividades de inspeção,• Vigilância sanitária• monitoramento ambiental• Investigação de um surto
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• Investigação de um surto• pesquisas científicas• ou através de alertas dos próprios
consumidores
Introdução• A coleta de amostras para avaliação de lotes de
alimentos deve obedecer a planos de amostragem
Determinação do número deamostras a serem analisadase os critérios de decisão.
Finalidade de avaliar as condições microbiológicas de lotes e
permitir um julgamento sobre a sua aceitação ou rejeição
e os critérios de decisão.
Planos de amostragem - Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas para Alimentos (ICMSF – International Commission on
Microbiological Specifications for Foods) - 1974
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ICMSF -Planos de amostragem - quinze categorias
• Grau de risco - tipo de microrganismo presente,
quantidade no alimento e probabilidade de seu
número aumentar, diminuir ou se manter estável
no alimento até o momento de ser consumido.
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Classificação por categoria
• Deteriorantes - categorias 1, 2 e 3
• Indicadores - presença de microrganismos
patogênicos - 4, 5 e 6
• Patogênicos - causam doenças brandas e de• Patogênicos - causam doenças brandas e de
difusão restrita - 7, 8 e 9
• Patogênicos - doenças brandas mas difusão
extensa - 10, 11 e 12
• Patogênicos e causam doenças graves - 13, 14
e 15.
Profa. Dra. Nágela Magave
Profa. Dra. Nágela Magave
Conceitos importantes: lote, n, c, m e M
• Lote: unidades de um produto produzido,manuseado ou armazenado em condiçõesidênticas, dentro de um determinado período.
• n: número de unidades retiradas de um lote queserão analisadas independentemente (unidadesserão analisadas independentemente (unidadesamostrais)
• c: é o número máximo aceitável de unidades dolote em que as contagens microbianas estãoacima do limite mínimo (m) e abaixo do limitemáximo tolerado (M) para o microrganismoinvestigado (unidades defeituosas).
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Planos de amostragem
• Duas classes - classificado como aceitávelou inaceitável - o resultado está abaixo ouacima de um critério pré-estabelecido,respectivamente.
duas ou de três classes
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Planos de amostragem
• Três classes - pode pertencer a umaterceira categoria, denominada marginal,definida por resultado que se encontraentre os limites m e M
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Coleta
• A coleta de amostras para avaliação de lotes dealimentos processados deve obedecer a planos deamostragem
• A obtenção correta das amostras, seu transporte parao lab e sua preparação são etapas fundamentais para
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o lab e sua preparação são etapas fundamentais parao sucesso da análise.
• O número de unidades a serem coletadas paraanálise e os critérios adotados para aprovação oureprovação de um produto definem um plano deamostragem
I- Coleta de alimentos em embalagens individuais
• Sempre que possível na embalagem original,fechada e intacta;
• Se a embalagem unitária tiver uma
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quantidade de alimentos 2 x menor do que aunidade analítica = coletar váriasembalagens
• Juntar o conteúdo de diversas embalagensem único frasco, misturar e retirar a unid.Analítica.
II- Coleta de alimentos em embalagens nãoindividuais
• Transferir porções representativas damassa total para frascos ou sacosestéreis, sob condições assépticas
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Critérios para seleção e preparação dos frascos de coleta
• Com tampas à prova de vazamentos
• De material aprovado para contato comalimento e de preferência pré-esterilizados
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alimento e de preferência pré-esterilizados(sacos plástico/frascos estéreis)
• Tamanho adequado para quant. deamostra
Coleta – Importante Lembrar
• 1 unidade de amostra deve conter no mínimo2x a unidade analítica (3 a 4 x paraseparação da contra-amostra)
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• 200 g ou 300-500 mL são suficiente para amaioria dos alimentos
• Um frasco de coleta não deve sercompletamente preenchido
Coleta – Importante Lembrar
• Os frascos e utensílios devem seresterilizados (autoclave, estufa, vaporfluente, flambagem em chama, imersãoem etanol 70%)
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em etanol 70%)
Procedimentos para Coleta
Cuidados Assépticos – Evitar Contaminação da Amostra!!!!
• Massa - misturar toda a massa• Líquido – agitar• Moído – revolver• Bloco (congelado) – sacos plásticos e quebrados
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• Bloco (congelado) – sacos plásticos e quebrados• Pó, grãos (sacos ou silos) – amostras tubos
centro
• Quando não for possível = porções de diferentepartes do conteúdo
Ex: água de torneira
Procedimentos para Coleta
• Grandes peças sólidas – facas,pinças...pedaços
• Grandes peças congeladas – furadeira
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III - Coleta de alimentos envolvidosem surtos de ETA:
Procedimentos para Coleta
• Tentar coletar e analisar o mais cedopossível
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possível
• Não adianta coleta amostras de alimentosque tenham sofrido abuso de T°C oudeteriorados
Procedimentos para Coleta - ETA
• Se não houver sobras, coletar osvasilhames, amostras dos ingredientes,amostras de refeições similares
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• Coletar amostras de lotes deIngredientes e matéria-primaUtilizado no preparo do alimento
IV- Coleta de amostras de água
Procedimentos para coleta• Água clorada: neutralizar o cloro residual:
0,1 mL solução 10% tiossulfato de sódiopara cada 100 mL de amostra.
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• Limpeza da torneira – etanol 70%
• Flambar – material resistente a fogo
Informações que devem acompanhar asamostras
• Tipo de amostra e processo usado na
fabricação – Ex. lingüiça defumada, leite
pasteurizado.
• Fabricante, data fabricação, código do lote
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• Fabricante, data fabricação, código do lote
• Solicitante da análise
• Data e local da coleta
• Razão da análise
Transporte e Estoque de Amostras Para Análise
• Regra geral: transportar e estocaramostras de alimentos da mesma forma(comercialização).
a) alimentos comercialmente estéreis em
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a) alimentos comercialmente estéreis emembalagens herméticas = t°C ambiente,proteger t°C maiores que 45°C
b) alimentos com baixa atividade de água:t°C ambiente e proteger umidade
Transporte e Estoque de Amostras Para Análise
c) alimentos perecíveis refrigerados:refrigeração até o momento da análise.- Não ser congelado; tempo máximo entrecoleta e análise= 36 h
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coleta e análise= 36 h
d) alimentos perecíveis congelados:congelados; temperatura de estocagemnão > -10°C
Transporte e Estoque de Amostras Para Análise
e) transporte refrigerado de amostrasperecíveis resfriadas ou congeladas - cxisopor com gelo (por até 24-30h)- Se for prolongado = gelo seco
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- Se for prolongado = gelo seco
Recepção e Preparação de Amostras Para Análise
• Observar as condiçõesda embalagem e dotransporte
• Amostra com embalagem
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• Amostra com embalagemjá aberta (surtos):identificar o fato no laudofinal de análise
Estocagem das amostras até a análise
• Refrigeradas perecíveis: mantidas sobrefrigeração. (máximo até o dia seguinte)
• Congeladas: mantidas no máximo a -18
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• Congeladas: mantidas no máximo a -18°C (máximo 7 dias)
• Não perecíveis: estocadas em lugarfresco, protegidas da umidade e da luz
Recepção e Preparação de Amostras Para Análise
Envolve duas etapas:• Retirada de unidade analítica
(representativa)
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(representativa)
• Preparação das diluições decimaisseriadas
Preparação de Amostras Para Análise
1 - Preparação de alimentos sólidos oulíquidos concentrados
a) abertura da embalagemb) retirada da unidade analítica: 25 g –
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homogeneização com diluente
Preparação de Amostras Para Análise
Retirada da unidade analítica - Cuidados• Assépticos: câmara de fluxo laminar,
instrumentos estéreis
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• Alimentos congelados- sempre quepossível não descongelar
• Análise de Salmonella (enriquecimentoprévio)= unidade analítica adicional
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Preparação de Amostras Para Análise
Preparação de alimentos sólidos ou líquidosconcentrados
c) homogeneização e preparo da 1° diluição da
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c) homogeneização e preparo da 1° diluição daunidade analítica:
- A homogeneização é precedida por umadiluição inicial (10-1)= 25g + 225 mL
- Diluente: água peptonada 0,1%; água salinapeptonada ou tampão fosfato pH 7,2
Preparação de Amostras Para AnáliseHomogeneização pode ser feita:
• Agitação manual – 25 x
• Alimentos sólidos em peça: trituração liquidificador(8000 a 15000 rpm/1-2 mim) ou “stomacher”
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• Alimentos gordurosos: toucinho defumado = diluentesuplementado com Tween 80 ou Triton X-100(emulsificação) – liquidificador bx rotação
• OBS: Salmonella: diluição inicial é feita no caldo deenriquecimento
Intervalo entre a homogeneização da
unidade analítica e a preparação das
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diluições posteriores não deve
ultrapassar 3 minutos!!!
Preparação de Amostras Para Análise
d) diluições seriadas da amostrahomogeneizada
• Preparação da 2ª. Diluição
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• Usar o mesmo diluente (alimentosgordurosos não adicionar Tweennovamente)
• Seleção do número das diluições
Preparação de Amostras Para Análise
Transferência de volumes entre as diluições:
• Pipetas diferentes para cada diluição
• Pipetas com capacidade no máximo 10 x superior
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• Agitar o tubo 25 x
• Liberação do volume com a ponta da pipeta naparede do tubo
• Não flambar a pipeta
Preparação de Amostras Para Análise
2 - Preparação de amostras para análisepela técnica da lavagem superficial oupela técnica do esfregaço de superfície
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Alimentos cuja contaminação é predominantemente superficial
Preparação de Amostras Para Análise
2ª) Técnica da lavagem superficialAplicação: carcaça aves, cortes de aves, cascas de
ovos, condimentos grãos, sementes ou folhas,peq. peixes.
• Procedimento: amostra (maioria dos alimentos
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• Procedimento: amostra (maioria dos alimentos50g, condimentos 11g) para o fraco + diluente(1:1), agitar vigorosamente 50 x
• Salmonella: o diluente é a solução deenriquecimento e este é usado para realizaçãodas outras análises
Preparação de Amostras Para Análise
• Cálculo dos resultados: expressos emUFC/g ou NMP/g
• Inicialmente calcular UFC/mL de água de
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lavagem. Depois converter em UFC/g. Sea diluição for 1:1 o resultado será omesmo.
Preparação de Amostras Para Análise
2 b- Técnica do esfregaço de superfície• Aplicação: carcaças bov, suínos, aves,
superfície equipamentos, embalagens
• Procedimento: molde estéril delimitar área a
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• Procedimento: molde estéril delimitar área aser amostrada. Aplicar o “swab” compressão.
• No exame de superfícies secas: umedecer o“swab”
Profa. Dra. Nágela Magave
SWAB
Técnica do esfregaço de superfície
Profa. Dra. Nágela Magave
Técnica do esfregaço de superfície
Ex. Esfregaço de ½ carcaça de bovino e suínos:- Selecionar 5 pontos demarcados com moldesestéreis de 10 cm² e aplicar o “swab”.- Colocar os 5 “swabs” – mesmo frasco com 25mL diluente, vortex 2 min ou manual –análises
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mL diluente, vortex 2 min ou manual –análises- Cada mL (diluente) – 2 cm² de superfície –expresso cm² de amostra
• Carcaça aves: 5 pontos de 10 cm² (dorso, asas,antecoxas e pescoço). Idem
• Cortes comerciais - 5 pontos
Métodos de Análise Microbiológica De Alimentos
A avaliação de qualidade microbiológica de
um produto fornece informações que
permitem avaliá-lo quanto às condições
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permitem avaliá-lo quanto às condições
de processamento, armazenamento e
distribuição para o consumo, sua vida útil
e quanto ao risco à saúde coletiva
Métodos de Análise Microbiológica De Alimentos
1- Contagem por plaqueamento
2- Determinação do Número Mais Provável3- Métodos alternativos
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