seminário mutagênese

Teste do Micronúcleo

Aspectos gerais

• Exposição de organismos vivos a agentes

genotóxicos

– Escala mundial;

– Efeitos nocivos → Saúde pública e ambiental;

• Incidência de câncer;

• Problemas reprodutivos – inviabilidade populacional.

Aspectos gerais

• Biomonitoramento

– Teste dos Micronúcleos (MNs)

• Método alternativo ao das aberrações cromossômicas;

– Mais fácil de serem visualizados e contados

*Morfologia Cromossomal

Aspectos gerais

• Descrito pela primeira vez por Schimidt W. (1975)

– Teste realizado em mamíferos in vivo;

– Detecção de substância mutagênicas que lisam

cromossomos

• Substâncias clastrogênicas.

– Detecção de substâncias que interferem no fuso mitótico

• Alteração da distribuição equitativa dos cromossomos.

Aspectos gerais• Micronúcleos

Formam-se a partir da extrusão de cromossomos inteiros ou seus

fragmentos durante a divisão celular, sendo uma porção de cromatina

resultante de mitoses aberrantes.

Aspectos gerais

• Importância Teste do Micronúcleo

Permite identificar o eventual aumento na frequência de mutação em células que são expostas a uma gama variedade de agentes genotóxicos, por isso é capaz de expressar danos no cromossomo como micronúcleos

Fornece uma medida de confiança da perda do

cromossomo e da ruptura

Aspectos gerais

• Fatores que favorecem a escolha do teste:

– Baixo custo

– Rapidez na análise e triagem;

– Capacidade de avaliação de diversas substâncias;

– Ampla aplicabilidade.

ProcedimentosTeste para substâncias

• Utiliza-se, preferencialmente, camundongos

jovens

– Dieta equilibrada;

– Oriundos de biotério;

– Recebendo água e alimentos em horários controlados

• Evitar outras doenças ou fontes mutagênicas.

ProcedimentosTeste para substâncias

Grupo Controle Negativo

Grupo ControlePositivo

Administra-se uma substância

reconhecidamente como mutagênica. Ex:

Ciclofosfamida 50mg/Kg

GrupoTeste

* Recomenda-se que cada grupo contenha 10 animais, preferencialmente machos (evitar variações hormônais das fêmeas)

Os animais são tratados uma única vez com as respectivas substâncias de cada grupo, as

coletas devem ser feitas no mínimo 12 e no máximo 30 horas após o tratamento.

ProcedimentosTeste para substâncias

Sacrifício dos animais

Retira-se a medula óssea

Centrifuga-se (1000

rpm/min – 5 minutos)

Descarta-se o

sobrenadante e prepara-se as lâminas

Técnica de coloração

de Leishmann

Observação ao

microscópio de

fluorescência

ProcedimentosTeste para substâncias

• Análise

– Conta-se o número de eritroblastos policromados

(EPs) por lâmina;

– Conta-se o número de EPs com micronúcleos em

relaçãos ao total de EPs;

– Considera-se um mínimo de 1000 EPs por lâmina.

ProcedimentosTeste para ambientes contaminados

• Castilhos et al. (2005)

– Análise de dois rios contaminados por Hg;

– Coleta de sangue de peixes;

• Geophagus brasiliensis e Oreochromis niloticus

– 1000 células por lâmina;

– Coloração de Giemsa;

– Altas concentrações de Hg no músculo;

– Ambos apresentaram frequência mutagênica.

Teste do Micronúcleo

• Aplicações:

Ambiental

Biomonitoramento

Teste do Micronúcleo

• Aplicações:

Controle populacional

Saúde Pública