lm, lima© - evqfm · 2018-10-23 · bioisosterismo de anéis n n h o n h o o o ch 3 w...
Post on 06-Apr-2020
0 Views
Preview:
TRANSCRIPT
LM, Lima©
LM, Lima©
D
E
S
C
O
B
E
R
T
A
D
E
F
Á
R
M
A
C
O
S
Etapa de
Pesquisa
Etapa de
Desenvolvi-
mento
Etapa de
Comerciali-
zação
Etapa
Regulatória
Seleção do Alvo Molecular; Desenvolvimento dos ensaios farmacológicos in vitro e in vivo; Desenho de ligantes; Síntese; Descoberta e Otimização do Protótipo.
Inicial: Realização dos ensaios pré-clínicos.
Tardia: Realização dos ensaios clínicos
(Fase I, Fase II e Fase III).
ANVISA; EMEA, FDA, etc
Marketing e vendas 1 ANO
1 ANO
1.5 ANOS +
5.5 ANOS
3 ANOS
D
U
R
A
Ç
Ã
O
M
É
D
I
A
Cadeia de Inovação em Fármacos & Medicamentos
LM, Lima©
Química Medicinal
Química
Abordagem Fisiológica
Chagas & Leishmaniose Câncer, Diabetes, Asma e Artrite
Farmacologia
Bioinformática
Planejamento Dependente
do Biorreceptor
Planejamento Independente
do Biorreceptor
Alvos: TKs, b-tubulinas, PDE-4, MAPK p38 LASSBio-998
LM, Lima©
São serina/treonina proteínas quinases ativadas por mitógenos responsáveis por
sinais intra- e extracelulares que regulam vários eventos dentre eles a divisão e
diferenciação celular, apoptose, produção de enzimas e mediadores envolvidos com a
resposta inflamatória;
Existem em 4 isoformas: MAPK-p38 a, b, g e d, apresentam homologia >60% na
sequência total de aa; e identidade >90% dentro do domínio quinase;
São produzida em vários tecidosSão produzida em vários tecidos
Pulmões, rins, testículos, pâncreas, intestino, coração, CD4+Pulmões, rins, testículos, pâncreas, intestino, coração, CD4+
Músculo esquelético e fisiopatologias do coraçãoMúsculo esquelético e fisiopatologias do coração
p38γ
p38δ
p38β
p38α
Amplamente produzida em várias células sistema imune e ativada em
respostas a estímulos pró-inflamatórios. É a mais bem caracterizada e
talvez a mais relevante quinase envolvida nas respostas inflamatórias. s.
Coulthard, L.R. (2009) Trends in Molecular Medicine 1, 369.
ae b 75%
a e g 62%
a e d 61%
LM, Lima©
Isoforma de
MAPK p38 Distribuição
Inibição por
SB 203580
p38α Todas as células +
p38β Células T +
p38γ Músculo esquelético -
p38δ
Células T, macrófagos /
monócitos e neutrófilos -
Artrite reumatoide / Doença de Crohn / Psoríase
Alzheimer / Parkinson / Esclerose lateral amiotrófica
Câncer
1 Ashwell, J. D. Nature Reviews / Immunology 2006, 6, 532-540. 2 Zhang, J. et al. TRENDS in Pharmacological Sciences 2006, 28, 286-295. 3 Kim, E. K. et. al. Biochimica et Biophysica Acta 2010, 1802, 396-405.
Cascata de ativação da MAPK p38. MK2 (MAPK
ativada por proteína quinase 2)
(Adaptada de www.sabioscience.com)
LM, Lima©
INIBIDORES DE MAPKINIBIDORES DE MAPK--p38p38
1ª GERAÇÃO1ª GERAÇÃO 2ª GERAÇÃO2ª GERAÇÃO
N
NH
N
F
S
O
SB302590
S
NH
NH
O
O
O
GK00687
NN
NH
O
NH
Cl
NN
NH
O
NH
ONO
BIRB796
não entrou em fase clínica
hepatotóxico e carcinogênico
Inibição CYP450
não entraram em fase clínica
Bayer
Boehringer Ingelheim
CI50= 290 nM (GK);
↓ baixa Potência (BI)
Completou Fase II
(AR, DC, PS)
Descontinuado→ hepatoxicidade
Boehringer
Ingelheim
LM, Lima©
INIBIDORES DE MAPKINIBIDORES DE MAPK--p38p38
1ª GERAÇÃO1ª GERAÇÃO
2ª GERAÇÃO2ª GERAÇÃO
3ª GERAÇÃO3ª GERAÇÃO
N
NH
N
F
S
O
SB302590
NN
NH
O
NH
ONO
BIRB796
N
N
N O
O
F
F
NH
OH
OH
pamapimode (Roche)FF
NN
O
NH2
F F
O
NH2VX702 (Vertex)
NCl
O
N
N
F
O
O
N
Scio-469
Descontinuado Fase II (AR)
↓
Falta de eficácia clínica
Descontinuados Fase II (AR) Falta de eficácia clínica
LM, Lima©
J. Simon C. Arthur & Steven C. Ley Nature Reviews Immunology 2013, 13, 679–692
LM, Lima©
Desenho Estrutural e Planejamento MolecularDesenho Estrutural e Planejamento Molecular
Piper hispidinervum
O
O
S
N
O
OCH3
O N
H
H
GK00687 (1)
NN
N
O
N
HH Cl
Cl
2
bioisosterismo
de anéis
fenílogo A
NN
N
O
N
HH Cl
Cl
N NH
O
NH
B
bioisosterismo
não clássico
bioisosterismo
de anéis
N NH
O
NH
O
O
O
O
CH3
W
COMPOSTOS-ALVO bioisosterismo
de anéis
N NH
O
NH
O
O
O
O
CH3
LASSBio-998
INPI (2005)
PCT (2006) Ribeiro, I.G (1998) dados não publicados
N NH2O
O
O
NH
N Ar
H
LM, Lima©
Sobreposição e alinhamento propostos para os derivados da uréia
analisados pelo método CoMFA. Em verde é observado o
derivado quinazolinônico 15b e em laranja é observado o derivado
da uréia LASSBio 998 (14). Código de cor: azul (N), vermelho (O)
e verde (halogênio).
Tabela 2:Valores das atividades calculadas a partir do Modelo 2 de QSAR-
3D/CoMFA.
Derivado Atividade
Experimental (pIC50)
Atividade
Calculada (pIC50)
SB-202190 (4) 7.50 7.98
GK 00687 (9) 4.80 5.20
LASSBio 947 (11) - 7.08
LASSBio 948 (12) - 7.07
LASSBio 949 (13) - 7.08
LASSBio 998 (14) - 7.71
LASSBio 999 (15) - 5.03
a pIC50=-Log IC50, onde o IC50 é a concentração necessária para inibir 50% da atividade enzimática.
15b
da Silva, G. M. S et al. (2005) Tese de Doutorado, ICB-UFRJ da Silva, G. M. S et al. (2005) Tese de Doutorado, ICB-UFRJ
SB 202190
N
N
HN
OH
Cl
S
N
O
OCH3
O N
H
H
GK00687 (1)
F
FHN
N
OCl
Cl
OO
CH3
N NH
O
NH
RO
O CO2Et
LM, Lima©
vermelho regiões de alta densidade eletrônica (cargas
negativas que favorescem a atividade); em azul regiões de
baixa densidade eletrônica (cargas parcialmente positivas que
favorescem a atividade)
regiões em amarelo desfavorescidas por efeito estérico;
regiões em verde favorescidas por efeito estérico.
LM, Lima©
Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).
[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]
Dra Nelilma C Romeiro
(Prof. Adjunto, IQ-UFRJ)
LM, Lima©
O
O
H
O
O
O
isomerização
cisão-oxidativa
Safrol
O
O
H
O
NO2
HNO3 conc
t.a. / 30 min
62%
O
O
CH3
N
KF-Al2O3 /
EtOH
t.a. / 1h
77%
O
O NO2
O CH3
O
CN
O
O
O CH3
O
N NH2
N C OO
O
O CH3
O
N NH
NH
O
LASSBio-998
Patente:
WO/2006/128268 (2006)
Tolueno / p-TsOH
Dean Stark
110° C / 48h
61%
Obtenção dos compostosObtenção dos compostos--alvoalvo
Barreiro, E.J. et al. J. Chem. Research (M) 1985, 2301-2332.
Zhou, L. et al., J. Chem. Research (S), 1998, 398
Zhou,, L. et al., Synthesis, 1998, 851
Dumas, J. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2054
Piper hispidinervum
O
O
O
O
Zn, TiCl4, THF,
/ 3h30min., 84%
LM, Lima©
MAPK p38 fosforilada
Salina Veículo LASSBio-998
LPS
MAPK p38
B
A - LASSBio-998 preveniu a fosforilação de
MAPK p38 em macrófagos peritoneais
estimulados por LPS em uma concentração
dependente – in vitro, com IC50 = 14 ± 9 μM.
A
LASSBio-998 (M)
B - LASSBio-998 preveniu a
fosforilação de MAPK p38 em tecido
pulmonar de camundongo após a
inalação de LPS por Western blotting - in
vivo.
Ensaio sobre o alvo: MAPK Ensaio sobre o alvo: MAPK p38p38
IC50 = 14 ± 9 μM.
LM, Lima©
0
50
100
150
200
250
300
Salina
LPS
* p<0,05 versus veículo
* *
Ve í culo 948 998
Neutr
ó filo
s x
(10
3 /m
L)
(200mg/kg)
0
50
100
150
200
250
300
Salina
*
Ve í culo 948 998
Neutr
ó filo
s x
(10
3 /m
L)
(200mg/kg)
EFEITOS DOS COMPOSTOS INIBIDORES DE p38 SOBRE A MIGRAÇÃO LEUCOCITÁRIA
Modelo de Inflamação Pulmonar aguda induzida por LPS
ED50 =150 mg/kg (via oral)
Os animais foram pré-tratados com LASSBio-
998 i, via oral, 4h antes da inalação de LPS
(0,5 mg/mL) e o número de neutrófilos foi
avaliado 3h depois .
Dra Vera L G Koatz
(Professora IBQM)
In Memoriam
LM, Lima©
Ensaio Ensaio in vivoin vivo: Inibição TNF e IL: Inibição TNF e IL--11bb
de Oliveira Lopes, Raquel, Romeiro, Nelilma Correia, de Lima, Cleverton Kleiton F., Louback da Silva, Leandro, Palhares de Miranda, Ana Luisa,
Nascimento, Paulo Gustavo B.D., Cunha, Fernando Q., Barreiro, Eliezer J., LIMA, Lídia Moreira Docking, synthesis and pharmacological activity of novel
urea-derivatives designed as p38 MAPK inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. , v.54, p.264 - 271, 2012
LM, Lima©
150 mg zimosan na
pata esquerda
72 horas
Tratamento i.p. 10 mg/kg/dia por 4
dias
Ibrahim, T. et al, Intern. Immunol., 2002, 2, 875-883
C57 Black/6
Linfonodo
SalSal Veic.Veic.
ZimosanZimosan
Veic.Veic.
Ensaio Ensaio in vivoin vivo: Inflamação crônica : Inflamação crônica (artrite)(artrite)
LM, Lima©
Lin
fono
do
po
plíte
o (
mg
)
0
2
4
6
8
Salina
VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)
ZIMOSAN (150 µg)
*
Lin
fono
do
po
plíte
o (
mg
)
0
2
4
6
8
Salina
VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)
ZIMOSAN (150 µg)
*
Efeito do tratamento v.o. diário (8 dias)com o LASSBio-998 sobre o peso dos linfonodos Poplíteos (A) e do número
de linfócitos (B)de camundongos Balb/C que receberam uma injeção i.p. de zimosan.
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
Salina
VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)
ZIMOSAN (150 µg)
Lin
fócito
s x
10
6/
mg
lin
fono
do
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
Salina
VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)
ZIMOSAN (150 µg)
Lin
fócito
s x
10
6/
mg
lin
fono
do
LM, Lima©
Estudos de Estabilidade Química e Estudos de Estabilidade Química e SolubilidadeSolubilidade
LASSBio-998
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 min
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
600
650
700
750
800
850
900
950
1000
1050
mAU
254nm4nm (1.00)
1/36
27
2/10
711
3/54
22
4/33
387
5/17
255
6/12
3121
7/19
936
8/50
164
9/40
41
10/3
0288
2
11/1
0709
12/2
0731
650
13/5
717
14/3
104
Solução HCl 10%: 97,2%
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 min
-150
-100
-50
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
600
650
700
750
800
850
900
950
1000
mAU
254nm,4nm (1.00)
1/84
35
2/24
327
3/37
127
4/23
726
5/10
193
6/51
936
7/22
5401
8/10
864
9/19
7528
83
10/5
701
11/3
1215
Tampão fosfato: 97,9% Aparelho: Shimadzu – LC20AD
Coluna: Kromasil 100-5C18 250-4,6 mm
Fase móvel: 80% ACN, 20% água.
Fluxo: 1mL/min
Detector: SPD-M20A (Diode Array)
Comprimento de onda: 254 nm
Solubilidade aquosa =
0,093µM
LM, Lima©
0 30 60 90 120 150 180 210
0
10
20
30
Tempo (min)
LA
SS
Bio
-998 (
mM
)
0 30 60 90 120
0
5
10
15
20
25
Sem CofatoresCom Cofatotes
Tempo (min)
LA
SS
Bio
-99
8 (
mM
)0 30 60 90 120
0
5
10
15
20
25
Sem CofatoresCom Cofatotes
Tempo (min)
LA
SS
Bio
-99
8 (
mM
)
Gráficos de estabilidade plasmática (A) e estabilidade metabólica em microssoma hepático de
ratos (B) concentração de LASSBio-998 vs. tempo de incubação. Análise por CLAE
Estudos de metabolismo plasmática e Estudos de metabolismo plasmática e microssomalmicrossomal
t1/2= 76,8 minutos t1/2= 60,6 minutos
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
LM, Lima©
Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).
[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]
LM, Lima©
Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)
and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D
and (B) 2D ligand interactions diagram
representations. In the 3D representation the
ligands are represented by light blue sticks and
the amino acid residues are represented by grey
sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow
dashes, labeled with their respective lengths. The
protein conformations used were selected from
a previous clusterization study and covered both
DFG-in and DFG-out states, comprising a set
of five representative structures of MAPKp38α
(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and
1WBS)Program: Glide
D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
Isabella Guedes
(PhD student)
LM, Lima©
Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)
and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D
and (B) 2D ligand interactions diagram
representations. In the 3D representation the
ligands are represented by light blue sticks and
the amino acid residues are represented by grey
sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow
dashes, labeled with their respective lengths. The
protein conformations used were selected from
a previous clusterization study and covered both
DFG-in and DFG-out states, comprising a set
of five representative structures of MAPKp38α
(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and
1WBS)Program: Glide
D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
Isabella Guedes
(PhD student)
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Patente: WO/2006/128268 (2006) Dumas, J. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2047-2050
LM, Lima©
Systemic
Circulation
Hepatic
Vein
Portal
Vein
Hepatic
Artery
Oral
Medication
Intestinal
Tract
Liver
efeito de 1ª passagem intestinal
efeito de 1ª passagem hepático
enzimas do metabolismo
Metabolismo → Aumento da Depuração (Clearance) → Compromete Efeito Terapêutico
Metabolismo hidrolítico
LM, Lima©
PRODUTO t1/2 Plasmática
(minutos)
LASSBio-998 76,8
LASSBio-1494 2133,0
LASSBio-1495 1401,7
LASSBio-1496 522,6
LASSBio-1497 45,5
PRODUTO t1/2 SEM COFATOR
(minutos)
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
LASSBio-998 66,0 75,3
LASSBio-1494 407,6 533,1
LASSBio-1495 1155,0 138,6
LASSBio-1496 630,0 74,5
LASSBio-1497 59,7 32,7
compostos mais lábeis ao metabolismo
metabolismo dependente de CYP450/FMO
metabolismo independente de CYP450/FMO
metabolismo dependente de CYP450/FMO/CE
Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ
Estudo do Metabolismo Plasmático e Estudo do Metabolismo Plasmático e MicrosomalMicrosomal
LM, Lima©
metabolismo dependente de CYP e/ou FMO
LM, Lima©
PRODUTO t1/2 SEM
COFATOR
(minutos)
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
LASSBio-998 66 75,3
LASSBio-1494 407,6 533,1
LASSBio-1495 1155,0 138,6
LASSBio-1496 630,0 74,5
LASSBio-1497 59,7 32,7
Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ
Gráfico 1 – Percentual de inibição da metabolização dos compostos
LASSBio-998 (1) e LASSBio-1497 (2) x log concentração do inibidor de
CES, o composto bis-p-nitrofenilfosfato (5), utilizando a fração microssomal hepática de ratos na ausência de cofatores.
Estudo do Metabolismo Plasmático e Estudo do Metabolismo Plasmático e MicrosomalMicrosomal
LM, Lima©
+.
+. +.
Rapidamente metabolizado no plasma e em
microssomas hepáticos → metabólito ativo??
LM, Lima©
+.
+.
LM, Lima©
PRODUTO t1/2 Plasmática
(minutos)
LASSBio-998 76,8
LASSBio-1494 2133,0
LASSBio-1495 1401,7
LASSBio-1496 522,6
LASSBio-1497 45,5
PRODUTO t1/2 SEM COFATOR
(minutos)
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
LASSBio-998 66,0 75,3
LASSBio-1494 407,6 533,1
LASSBio-1495 1155,0 138,6
LASSBio-1496 630,0 74,5
LASSBio-1497 59,7 32,7
metabolismo dependente de CYP e/ou FMO
compostos mais lábeis ao metabolismo hidrolítico
Solubilidade aquosa
0,093µM Solubilidade aquosa
3,349µM
Solubilidade aquosa
0,193µM
Solubilidade aquosa
0,215 µM
Solubilidade aquosa
0,11 µM
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Efeito de LASSBio-998 (21), LASSBio-1007 (24) e os novos análogos
(25-28) na inibição da fosforilação de MAPK p38 em células THP-1
diferenciadas com PMA .
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Veí
culo
LASSBio
-998
LASSBio
-100
7
LASSBio
-149
4
LASSBio
-149
5
LASSBio
-149
6
LASSBio
-149
7
SB20
3580
0
50
100
150
200
250
****
*
IL-1
beta
(p
g/m
l)
Veí
culo
LASSBio
-998
LASSBio
-100
7
LASSBio
-149
4
LASSBio
-149
5
LASSBio
-149
6
LASSBio
-149
7
SB20
3580
0
100
200
300
400
500
600
**
**
**
TN
F (
pg
/ml)
Fig. 1 – Análise da capacidade dos análogos do LASSBio-998 inibirem a
secreção de IL-1beta e TNF induzida pelo LPS. Células THP-1 (1x106 )
foram estimuladas com os diferentes análogos do LASSBio-998 a 10
mM. Após 30 minutos foi adicionado LPS (10 ng/ml) e as culturas
mantidas por um total de 24 horas. Os níveis de IL-1beta (A) e TNF (B)
foram avaliados por ELISA conforme instrução do fabricante (R&D Systems). Veículo = DMSO. p ≤ 0.05 em relação ao veículo.
Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
IL-1b
(IC50 mM)
TNF
(IC50 mM)
LASSBio-998 5,1 32,6
LASSBio-1494 96,6 2,5
LASSBio-1495 41,7 80,2
LASSBio-1496 2,0 0,0002
LASSBio-1497 38,6 2,9
LASSBio-1007 21,8 4,3
SB203580 2,0 0,5
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
LPS LPS+5 LPS+6a LPS+6b LPS+6c LPS+6d LPS+7 LPS+SB pp38
p38
LPS
LPS+5
LPS+6a
LPS+6b
LPS+6c
LPS+6d
LPS+7
LPS+SB
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
pp38
/p38
LASSBio-998 LASSBio-1496 LASSBio-1497 LASSBio-1494
LASSBio-1495 LASSBio-1007
pp38 expression in THP-1 cultures after stimulation with LPS. All molecules tested
were able to decrease pp38 expression. Phosphorylation of p38 was detected by
immunoblotting using the specific antibody
LM, Lima©
Hipernocicepção Mecânica Induzida por Carragenina
em camundongos
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
Contr
ol
SB20
3580
mol/k
g
m
LASSB
io-9
98 1
00
mol/k
g
m
LASSB
io-9
98 3
00
mol/k
g
m
LASSB
io-1
494
100
mol/k
g
m
LASSB
io-1
495
100
mol/k
g
m
LASSB
io-1
496
100
mol/k
g
m
LASSB
io-1
497
100
0
2
4
6
8Carageenan 100 mg/paw
***
****
***
***
*
Inte
nsit
y o
f H
ype
rno
cic
ep
tio
n
m
ech
an
ical th
resh
old
(g
)
Contr
ol
SB20
3580
mol/k
g
m
LASSB
io-1
495
30
mol/k
g
m
LASSB
io-1
495
100
mol/k
g
m
LASSB
io-1
495
300
Carageenan 100 mg/paw
***
***
***
DI50= 90 (70115) mmol/Kg
Imax: 6014%
LM, Lima©
Contr
ol
SB20
3580
mol/k
g
m
LASSBio
-998
100
m
ol/kg
m
LASSBio
-998
300
m
ol/kg
m
LASSBio
-149
4 10
0 m
ol/kg
m
LASSBio
-149
5 10
0 m
ol/kg
m
LASSBio
-149
6 10
0 m
ol/kg
m
LASSBio
-149
7 10
0
0
40
80
120Capsaicin 1.6 mg/paw
*** *** *** ***
*
***
A
Lic
kin
g (
s)
Contr
ol
SB20
3580
mol/k
g
m
LASSBio
-149
5 30
m
ol/kg
m
LASSBio
-149
5 10
0 m
ol/kg
m
LASSBio
-149
5 30
0
Capsaicin 1.6 mg/paw
******
***
DI50= 234 (161339) mmol/Kg
Imax: 534%
B
Hiperalgesia Térmica Induzida por Capsaicina em
camundongos
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
LM, Lima©
Antigen-induced arthritis (AIA)
* pre-treatment day 0
1th IM s.c. day 7
2nd IM s.c.
day 21
Challenge i.a.
mBSA + CFA
5h after challenge:
measurement of mechanical hypernociception and cell migration
mBSA + CFA
LM, Lima©
Antigen-induced arthritis (AIA)
LM, Lima©
Partial Ligation of Sciatic Nerve (PLSN)
7h after surgery:
measurement of
mechanical hypernociception
LM, Lima©
CONSIDERAÇÕES FINAISCONSIDERAÇÕES FINAIS
Mestrado
1995-1997
Doutorado
1997-2001
1. LIMA, L. M et al. (1999) Journal
of the Brazilian Chemical Society
(1999) 10, 421-428.
2. LIMA, L. M et al. Pharmacy and
Pharmacology Communications
(1999) 5, 673-678.
1. LIMA, L. M et al. European Journal of
Pharmaceutical Sciences (1999), 73, 281-
292.
2. LIMA, L. M et al. European Journal of
Medicinal Chemistry (2000) 35, 187-203.
3. LIMA, L. M et al. Synthetic Communications
(2000) 35, 3291-3306.
4. LIMA, L. M et al. Química Nova (2001)
24, 683-688.
5. LIMA, L. M et al. Química Nova (2002)
25, 825-834.
6. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal
Chemistry Letters (2002) 12, 1533-1535.
7. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal
Chemistry (2002) 10, 3067-3073.
8. ROCCO, P R M et al. The European
Respiratory Journal (2003) 21, 1-8.
9. BEVILAQUA, J V et al. Biochemical
Engineering Journal (2004) 21, 103-110.
10. LIMA, L. M et al. Current Medicinal
Chemistry. Anti-inflammatory & Anti-allergy
Agents (2004), 3, 09-18.
2002 Menção Honrosa (concurso de melhor Tese
de Doutorado), Instituto de Química da Universidade Federal do
Rio de Janeiro
Patente
1. Uso do composto lassbio 596
e congêneres, e composições
farmacêuticas contendo os
mesmos, no tratamento da
síndrome do desconforto
respiratório agudo. 2002,
Brasil. Patente: Privilégio de
Inovação. Número do
registro: PI0208767, data de
depósito: 08/10/2002
LM, Lima©
CONSIDERAÇÕES FINAISCONSIDERAÇÕES FINAIS
LM, Lima©
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
Dra Vera L G Koatz
(Professora IBQM)
In Memoriam Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
LM, Lima©
Instituto Nacional de Ciência & Tecnologia
de Fármacos e Medicamentos www.inct-nofar.ccs.ufrj.br
“Quanto menos alguém sabe sobre
o passado e o presente, mais
inseguro será o seu juízo sobre o
futuro”. (Sigmund Freud)
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo PlasmáticoEstudos de Metabolismo Plasmático
Tabela– Tempo de meia vida plasmática de LASSBio-998
(21) e análogos (25-28) calculados a partir da expressão
t1/2 = 0,693/a, sendo a a inclinação da reta do logaritmo neperiano da concentração da amostra vs. o tempo de incubação
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal
Fígado Preparação do fígado
•Centrifugação a 900 g, 30 min, 4 °C •Centrifugação a 10.000 g, 1 h, 4 °C
Fração citosólica Fração microssomal
Quantificação de proteínas
Quantificação de proteínas
Conservação a -80° C por 6 meses
1 Cabrera, M. et. al. Toxicology Letters 2009, 190, 140-149. 2 Lavaggi, M. L. et.al. Chemical Research in Toxicology 2008, 21, 1900-1906.
Fração S9*
Ultracentrifugação 100.000 g, 1 h, 4 °C
Enzimas de Fase I e II
Enzimas de
Fase I
CYP 450
FMO CES
* Fração S9: fração submitocondrial
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal
Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ
top related