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INSTITUTO EVANDRO CHAGASFundação Nacional de Saúde - FUNASA

Ministério da Saúde - Brasil

FEBRE AMARELA

Diagnóstico Laboratorial

Sueli Guerreiro Rodrigues

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ESPECÍFICO DA FEBRE AMARELAESPECÍFICO DA FEBRE AMARELA� Pesquisa de Vírus

Isolamento: Camundongos swiss recém-nascidos

Cultura de células C6/36

Detecção de ácido nucléico: RT-PCR

� Detecção de AnticorposEnsaio imunoenzimático: MAC-ELISA, ELISA IgGInibição da hemaglutinação

� Exame Histopatológico e Detecção de Antígeno por Imunohistoquímica

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Coleta, Conservação e Transporte de Amostras para Pesquisa de Vírus

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Sangue* (soro)/0-5 dias após o

início dos sintomas

Conservação/ Transporte

Isolamento do vírusPCR

Tecidos (óbito)/

Ideal: 8 hsMáximo: 24 hs

-70 °C/Gelo seco

-70 °C/Gelo seco

Isolamento do vírusPCR

* Retração do coagulo: 2 - 6 horas a 4° C.

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ISOLAMENTO VIRAL EM CAMUNDONGOS RECÉM-NASCIDOS

Detecção de antígeno no cérebro dos camundongos recém-nascidos, pelo teste de fixação do complemento.

Camundongos Swiss

A - Sangue (fase aguda)B – suspensão de tecido (óbito)

A B

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A – Sangue, soro (fase aguda)B – suspensão de tecido (óbito)

A B

Imunofluorescência direta(A) células não inoculadas(B) células infectadas - VFA

ISOLAMENTO VIRAL EM CULTURA DE CÉLULAS C6/36

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DETECÇÃO DE GENOMA VIRAL

Faixas 1 a 3 (fígado) - cDNA com 1000, 848 e 1024 pb, respectivamente (região estrutural). Faixas 6 (fígado) e 10 (baço) - cDNA com 695 pb (NCR 3’).Faixa 8 (C6/36 infectadas) - cDNA com 695 pb (NCR 3’). Faixas 5 (baço), 7 (coração) e 9 (fígado) - controles negativos.Faixas 4 e 11: peso molecular.

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Coleta, Conservação e Transporte de Amostras para Pesquisa de Anticorpos

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Sangue* (soro)/> 5 dias após o

início dos sintomas

Conservação/ Transporte

Detecção de anticorpos IgM(MAC-ELISA)

-20° C/Gelo seco ou comum

* Retração do coagulo: 2 - 24 horas à temperatura ambiente.

Sangue* (soro)/1ª amostra: até 7 dias

2ª amostra: 14° - 30° dias(após o início dos sintomas)

Detecção de anticorpos IgG (IH, ELISA)

-20° C/Gelo seco ou comum

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MACMAC--ELISAELISA

Anti-IgM humanaIgM humana (soro do paciente)AntígenoConjugado ( peroxidase)Substrato (Sistema ABTS)

Microplaca para teste de ELISA

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INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃOINIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO

INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃOHEMAGLUTINAÇÃO

Anticorpos anti-VFA

Anticorpo não específico

Antígeno do VFA

Hemácias de Ganso

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EXAME HISTOPATOLÓGICOEXAME HISTOPATOLÓGICO

IMUNOHISTOQUÍMICAIMUNOHISTOQUÍMICA

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Conservação/ Transporte

Tecidos (óbito)/

Ideal: 8 hsMáximo: 24 hs

Histopatologia

Imunohistoquímica

Temperatura ambiente/

Formalina tamponada

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IMUNOHISTOQUÍMICAIMUNOHISTOQUÍMICA

Seta indicando áreas com antígenos específicos. A - Fígado, B - Baço.

LegendaLegenda

Fase sólida (LÂMINA)AntígenoAnticorpoConjugado (peroxidase)

Substrato

Antígenos detectado

A

B

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FEBRE AMARELARede de Laboratórios

FLUXO DE AMOSTRAS:�Isolamento Viral�Exames Histopatológico�Imunohistoquímica�Controle de Qualidade

Instituto Adolfo Lutz - IAL/SPLaboratório Colaborador.

Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ-RJLaboratório Colaborador.

Instituto Evandro Chagas - IEC/PALaboratório de Referência Nacional

Centro Colaborador da OMSRN

AM

RR

AC

PA

AP

RO

MT

TO

GO

DF

MA

PI

CE

PE

ALSE

BA

ES

RJ

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MSSP

PR

SC

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PB

Sorologia (17)Sorologia a implantar (1)

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