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XXVI ENCONTRO DE JOVENS PESQUISADORES VIII MOSTRA ACADÊMICA DE INOVAÇÃO E TECNOLOGIA

DETERMINAÇÃO DA VIABILIDADE DE CÉLULAS DE QUERATINÓCITOS HUMANOS ASSOCIADOS A EXTRATOS DE PRÓPOLIS VERMELHA

SIGLA DO PROJETO: PRÓPROLIS / PROBIC - FAPERGS

Lorenzet G¹; Garcia CSC¹; Roesch-Ely M¹; Henriques JAP¹.

¹Laboratório de Proteômica, Genômica e Reparo de DNA, Instituto de Biotecnologia, Universidade de Caxias do Sul, RS, Brasil.

A própolis vermelha é encontrada na região Nordeste brasileira. Este tipo de própolis tem-se mostrado bem tolerada pelo organismo, comraros incidentes de alergia e baixa ou nenhuma toxicidade. Além disso, apresenta atividade antimicrobiana, anti-inflamatória e regenerativa,sendo uma excelente candidata para o tratamento de lesões em queimados.

Os resultados observados nestes ensaios evidenciam que o extrato de própolis vermelha nas concentrações de 25μg/mL e 50μg/mLapresentam prevalência de viabilidade e migração celular. Assim, possivelmente, há uma grande perspectiva de que o extrato deprópolis, nessas concentrações, possa ser aplicada em áreas que seja necessária a regeneração de tecidosqueimados, por estimulação e remodelamento da matriz do leito da ferida.

Verificar a viabilidade celular através do método clonogênico e avaliar a migração celular, ambos ensaios com células HaCat (não tumorais de queratinócitos humanos) após tratamento com extratos da própolis vermelha.

No ensaio clonogênico observou-se que houveformação de colônias das células tratadas comprópolis vermelha somente nas concentrações de25µg/mL e 50µg/mL, além do controle negativo. Jánas concentrações de 100µg, 200µg e controlepositivo não houve formação das colônias em quase100% dos tempos testados (figura 1).

No ensaio de migração celular observou-se quehouve migração através da fenda realizada nasconcentrações de 25µg/mL, 50µg/mL e no controlenegativo. Já nas concentrações de 100µg/mL,200µg/mL e no controle positivo não houve migraçãocelular, permanecendo a estrutura da fendasemelhante desde o dia 0 (figura 2).

100 100 100 100

29

0 0 0

8678 89 86

5850

6351

4 1 0 03 0 0 00

20

40

60

80

100

1 DIA 2 DIAS 3 DIAS 7 DIAS

% v

iab

ilild

ade

Tempo

Viabilidade celular - Ensaio ClonogênicoContNeg PosCont 25 µg 50 µg 100 µg 200 µg

FIGURA 1: Concentrações de 25, 50, 100 e 200µg/mL, controle positivo e controle negativo testados em 1, 2, 3 e 7 dias.

2. Avaliação da migração celular:

FIGURA 2: Respectivamente de A a F concentrações de 25, 50, 100, 200 µg/mL e controles positivo e negativo do dia O. Respectivamente de G a L concentrações de 25, 50, 100, 200 µg/mL econtroles positivo e negativo do dia 7.

A B C D E F

G H I J KL

1. Verificação da viabilidade celular pelo método clonogênico:

Inoculo de 350 células/mL em placa de 6 poços.

Fixação com metanol e coloração com cristal violeta

Contagem das colônias de células

Inoculo 4x104 células/mL e incubou-se em placas de 24 poços.

Formação de fenda

Visualização da migração celular.

Microscópio óptico

HaCat

APÓS 96h

Tratamento das células

25, 50, 100 e 200ug/mLControle PositivoControle Negativo

APÓS 10

dias

HaCat25, 50, 100 e 200ug/mL

Controle PositivoControle Negativo

24h

48h

72h

168h

APÓS 96h

24h

48h

72h

168h

PROBIC/FAPERGS