Abatacept ( CTLA - 4 - Ig ) um inibidor da molcula co-estimuladora de clulas T B7-1( CD80 ) . B7-1 induzida em podcitos em vrios modelos animais de proteinria .Expresso podocitria de B7-1 no evidente em podocitos nos rins humanos normais, mas encontrados em doentes com algumas doenas glomerulares . Porque observamos B7-1 imunocoloraoem 13 dos 21 selecionados aleatoriamente amostras de bipsia de rins nativosde pacientes com doena renal proteinrica , incluindo GESF primrias , deduzimosB7-1 que tinha sido induzida durante a doena . Observamos tambm colorao B7-1em cada amostra de bipsia de pacientes com GESF recorrentes que examinamos .A motilidade celularO aumento da migrao podocyte in vitro um substituto marcador de proteinria in vivo. Determinar se abatacept pode agir diretamente sobre podocytes, realizamos ensaios de migrao celular com podocytes expressando estavelmente B7-1 ou B7-1 um truncadaconstruir - isto , uma construo que falta o citoplasmtica tail (B7-1tail) (Fig. S4D no Suplementar Apndice).A activao 1-integrina e o espalhamento das clulas.Investigou-se o efeito de B7-1 e do seu inibidor,abatacept, na activao 1-integrina em podcitos por meio de microscopia confocal de fluorescncia ou activada separao de clulas, como pormenorizado no Apndice Suplementar. Ns usamos miristato de forbol espalhamento de no aderente induzida por acetato Clulas K562 como um teste independente, funcionalos efeitos de B7-1 e abatacept sobre 1-integrina activao.Deteco B7-1 em Bipsia Renal Amostras B7-1 imunocolorao foi realizada em seces de bipsia de rim congelado com o uso de cabra anti-humano B7-1 (CD80) anticorpo (R & D Systems).Migraes podocyteA adio de lipopolissacrido para o meio de cultura B7-1 induziu a expresso da protena em podcitos(Fig. 1A). Constitutiva expresso da protena de B7-1 foi encontrada em 3 integrina-knockout (3 - / -)podcitos (Fig. 1B). Abatacept bloqueados induzida por lipopolissacrido B7-1 ou induzida por migrao podocyte (Fig. S3A no Apndice Complementar).Silenciamento do gene B7-1 ou expresso do truncada construir (B7-1tail) podocyte tambm suprimiumigrao (Fig. S3A e S3B no Suplementar Apndice). Tratamento com abatacept ou gene B7-1silenciando 3 revertida - / - podocyte motilidade linha de base nveis (Fig. S3C no Apndice Suplementar).A Figura 1C mostra os efeitos de quantificados abatacept sobre a migrao podocyte.Anlise bioqumica de B7-1 vinculao a 1 Integrin Porque abatacept inibiu a migrao de 3 - / -podocytes, a hiptese de que modula B7-1 funo integrina. Coimmunoprecipitation endgenoEstudos mostraram que interagiram com 1 5 e aV integrinas em normal e 3 - / - podocytes(Fig. S4A no Apndice Complementar), sugerindo que 5 e aV so os parceiros de cadeia de 1 na ausncia de 3. Observamos co-localizao de B7-1 com vinculin em contatos focais (adeses clula-matriz que contm integrinas) de 3 - / -. podocytes (Fig S4B no Suplementar Apndice) e observou-se uma especfica interaco entre B7-1 endgeno e 1 integrina em 3 - / -. podocytes (Fig S4C no Suplementar Apndice). Mapeamento de domnio e suspenso Estudos com protenas purificadas recombinantes (Fig. S4D, S4E, e S4F no Suplementar Apndice) revelou uma interao direta entreas caudas citoplasmticas de B7-1 e 1, sugerindo que esta interaco fundamental para o efeito deB7-1 em funo 1-integrina. Para testar se o interaco observada era especfica para B7-1 e 1, realizamos uma srie de coimmunoprecipitation estudos de clulas HEK293 transfectadas. Obrigatriode talina, que conhecido por interagir com as integrinas , 7 a 1 ou 3 integrina serviu como uma positiva controle. Alm 1, B7-1 tambm interagiu com 3 integrina (Fig. S5A no Apndice Suplementar) atravs de ligao directa entre as duas protenas (Fig. S5B no Apndice Complementar). Em contraste, B7-2 (CD86), 9, que no expresso em podocytes, 4 no interagir com 1 ou 3 integrina(Fig. S5A no Apndice Suplementar).

B7-1 so protenas presentes nas clulas apresentadoras de antgeno(APC) que se ligam a CD28(presentes na superfcie de membrana dos Linfcitos T) e essa interao resulta na induo e proliferao dos linfcitos T CTLA-4antgeno 4 do linfcito T citotxicoA CTLA-4* homologa a CD28, competindo pela ligao com a B7.1 e a B7.2 e isso diminui a ativao das clulas T e consequentemente diminui a resposta inflamatria causada nos glomerulos