UPCII M MicrobiologiaTeórica 26-27

2º Ano2013/2014

Sumário: Capítulo XX. Doenças Periodontais

Agentes etiológicos das patologias periodontais Virulência dos agentes microbianos associados à

doença periodontal Mecanismos imunopatogénicos de destruição de

tecidos em doença periodontal Capítulo XXI. Doenças Periodontais

Fontes de infecção “One Visit Endodontics” Considerações microbiológicas sobre obturação Agentes antibacterianos utilizados na desinfecção

endodôntica Infecções focais

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Adesão das bactérias peridontopatogenicas P.gingivalis

Fim A e Mfa Internalin J Hemaglutininas

Aggregatibacter FLP tipo IV (genes tad) Aae e ApiA (adesão especifica às células

epiteliais= EmaA adesão ao colagénio

T. denticola OMP Msp (ligação a MMPs e células)

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Adesão das bactérias peridontopatogenicas F. nucleatum

RadD outras bactérias FadA ligação às células epiteliais

T. forsythia BspA adesina para outras bactérias, células do

hospedeiro e matriz

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Invasão das células epiteliais P. gingivalis

Integrinas Acção sobre o citoesqueleto Inibição da apoptose

Como resultado da invasão por peridontopatogénicas as células epiteliais podem acionar a secreção de interleucinas.

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Estabelecimento da etiologia

Postulados de Koch?

Dificuldades no cultivo Presença em Indivíduos/locais saudáveis Dificuldades de identificação Falta de modelo animal

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Alternativas Associação Eliminação Resposta do hospedeiro Patogenicidade em modelos animais Factores de virulência Porphyromonas gingivalis

Aggregatibacter actinomycemcomitans

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A. actinomycetemcomitans P. gingivalis

Associação>Crónicas e LAP (Tecidos do hospedeiro)

25% saudáveis

> Lesões periodontais

EliminaçãoLesões tratadas (=0)

Lesões recorrentes (>)

Lesões tratadas (=0)

Lesões recorrentes (>)

Resposta> de Ac no FC e soro LAP > de Ac no FC e soro

(Perio)

ModeloRoedores Roedores e primatas

não humanos

Factores de virulênciaVer à frente

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Aggregatibacter actinomycemcomitans Anaeróbio Facultativo Não móvel Bastonete G- Números aumentados em LAP e periodontite

crónica Existe também em lesões tratadas e em locais

saudáveis Existem 5 serótipos (a-e) Serótipo b associado a locais com patologia Estirpes que produzem leucotoxina associadas

a LAP

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Porphyromonas gingivalis Anaeróbio Não móvel Bastonete G- Associada a lesões 25% locais saudáveis têm Há diferentes estirpes

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Virulência dos agentes periodontais Complexa

Modulação da resposta do hospedeiro Multifactorial Espécies mais estudadas:

P. gingivalis A. actinomycemcomitans T. denticola E. corrodens F.nucleatum P. intermedia T. forsythia

Há mecanismos comuns a estas e outras espécies Factores de virulência:

Moléculas Mecanismos

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Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis Proteases

Nutrição Efeitos em proteínas importantes do hospedeiro

Gingipains (proteases de cisteina) R(arginina) K (lisina)

prtT (proteases de cisteina tipo strep) Periodontain (inibidor de serpins -protease alfa1) Trp (pz-peptidase) tipo papaina Aminopeptidases Peptidase tipo conversora de endotelina Prolil dipeptidil peptidase IV (digestão de matriz extracelular)

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Hemaglutininas Nas fimbrias Na LPS Em lípidos de superfície Como domínios de proteases HagA-C

Medeiam ligação a epitélio e eritrócitos

Adesão ↔hemaglutinação ↔ fimbriação ↔ proteólise

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Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis

Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis LPS

Ácidos gordos mais longos e ramificados Menos propriedades endotóxicas

Fimbrias ~45kDa Fimbrilina (FimA) 67kDa (fimbrias menores) Adesão colonização e destruição periodontal Vacinação com FimA protege contra reabsorção

óssea Vesículas

Típicas de G- Veículos de entrega dirigida de toxinas (LPS,

hemaglutininas, proteases)

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Comparados com enterobacterias

Cápsula polissacárida Seis serótipos existentes Encapsuladas menos fagocitadas mais virulentas Cápsula mascara LPS

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Factores de virulência (Moléculas) de P.gingivalis

Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Adesão, colonização e formação de biofilme Biofilme Agregação intergénica com:

Streptococci orais e Actinomyces naeslundii Fusobacterium Treponema denticola e Tanerella forsythia

Fimbrias Células epiteliais Fibroblastos Células endoteliais Matriz extracelular (fibronectina e fibrinogénio) Prps e estaterina Hidroxiapatite coberta de saliva FimA inibida por S. cristatus inibida a formação de biofilme SspB de S.gordonii interage com P.gingivalis

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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Invasão das células epiteliais FimA e integrinas Arranjos do

citoesqueleto Sinalização MAPK

Alteração [Ca++] Transcrição de IL8

Produção de proteases digestoras da matriz extracelular

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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Invasão das células endoteliais Presença em placas ateroscleróticas Invasão in vitro de endotélio Estímulo de citocinas e CAMs Mediada por FimA Fica no autofagosoma que não matura

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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Proteolítica Degradação de matriz extracelular Degradação de mediadores químicos do hospedeiro Degradação de receptores do hospedeiro (C5a)

Activação Prototrombina Proteina C Factor X Kallikrein-kinin Neutrófilos

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Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Resposta inflamatória Promoção

Activação de citocinas e quimocinas PMN Monócitos Células epiteliais

Inibição IL-1ra IL-4 Degradação de citocinas Antagonismo na produção de IL-8 (factores de

transcrição) Diminuição de TLR expressos à superficie

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IL-1beta, TNF-alfa, IL-6 e IL-8

Inflama-ção

e reabsor-ção óssea

Factores de virulência (Mecanismos) - P.gingivalis

Reabsorção óssea, destruição óssea e inibição da formação de osso Interferência na regulação da actividade de

osteoblastos e osteoclastos. Activação de osteoclastos por LPS IL-1beta,

prostaglandina E2 (PFGE2) e TNF-alfa aumenta produção de proteases do hospedeiro que destroem tecido conjuntivo e osso e inibem sintese de colagénio pelos osteoblastos.

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Factores de virulência (Moléculas e organelos) –A.actinomycemcomitans

Toxinas Leucotoxinas (específicas para espécie e para células-

monócitos, neutrófilos e alguns linfócitos) Forma poros na membrana plasmática

Citotoxinas (Cytolethal Distending Toxin /Immunosupressive Factor) Distende células Pára ciclo celular Rearranja actina Causa apoptose

LPS Polissacárido O antigénio imunodominante Reabsorção ósseas, agregação plaquetária, necrose da pele Liga hemoglobina Activa macrófagos ↓IL-1alfa e TNF ↑ citocinas proinflamatórias e anti inflamatórias

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Factores de virulência (Moléculas e organelos) – A.actinomycemcomitans

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Moléculas que se ligam ao Fc Inactivação da região Fc dos anticorpos inactivação da

fagocitose Inactivação do complemento

Vesículas Leucotoxina, LPS e bacteriocinas

Material extracelular Glicoproteína adesiva Indutora de reabsorção óssea

Fimbrias 54kDa e 6.5kDa Flp Papel na adesão

Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Adesão

Mais eficiente em células com fimbrias Coadesão e coagregação apenas com Fusobacterium

Adesão não específica Locus tad formação de longas fibrilas e pili

Adesão específica a células epiteliais Fimbrias ExAmMat Vesículas Adesinas (aae)

Adesão a matriz extracelular OMPs ligam colagénio e fibronectina

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Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Invasão de células epiteliais

Escapa a fagocitose Transita entre células vizinhas Localiza-se nos pólos positivos do microtúbulos

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Factores de virulência (Mecanismos) – A.actinomycemcomitans Interferência com defesas do hospedeiro

Ligação a factores quimiotáticos (inibição de neutrófilos) Receptores de adesão Ligação ao endotélio Inibição e resistência ao H2O2 e outras defensinas do

hospedeiro Reabsorção óssea

SAM GroEL actua em osteoclastos e osteoblastos

LPS Provoca a libertação de cálcio

Microvesículas Apoptose

Activação de caspases

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Factores de virulência – Treponema denticola Proteínas de superfície

Msp com actividade formadora de poros (porina) e adesão (adesina)

Proteases Proteases tipo quimiotripsina (dentilisina) Adesão celular, destruição tecidular e invasão dos tecidos

Proteínas ligadoras de ferritina e hemoglobina Mobilidade e quimiotaxia

Mutantes imóveis não infectam hospedeiro Adesão

À matriz extracelular, células epiteliais e endoteliais Coagregação com P.gingivalis e Fusobacterium

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Factores de virulência – Treponema denticola Invasão de tecidos

Não invade as células propriamente ditas mas sim os tecidos

Modulação da resposta do hospedeiro Inactiva monocitos e neutrófilos

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Factores de virulência – E. corrodens Pili tipo IV

Espécies com pili corroem o agar das placas

Exopolisacarídeo Ligado à supressão imunológica

LPS Actividade hemaglutinadora adesão a células

epiteliais Reabsorção óssea

OMPs Efeitos citotoxicos em macrófagos Induz agregação plaquetária Consome complemento

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Factores de virulência – E. corrodens Adesão

Células epiteliais, macrofagos e eritrócitos Lectin Like substance (EcLS) Liga-se a Streptococcus sanguis e Actinomyces

viscosus Indução de citocinas proinflamatórias

IL-6, IL-8 e PGE2 Inibição do crescimento

Esgota lisina do meio convertendo para cadaverina inibe crescimento de células epiteliais

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Factores de virulência – Fusobacterium nucleatum Toxinas

Butirato, propionato e amónia matam e inibem profliferação de fibroblastos

Coagregação Muito prevalente com várias espécies de

anaeróbios obrigatórios colonizadores tardios Adesão

Adere fortemente a fibronectina, e colagénio. Adere especificamente a PMNs, Macrófagos,

linfócitos, fibroblastos e células epiteliais

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Factores de virulência – Prevotela intermedia Fimbrias

Vários tipos e tamanhos Hidrolases

Proteases de Igs Hemolisinas e hemaglutininas Coagregação

Muito especifica com Actinomyces Adesão

A células epiteliais A colagénio tipo I, fibrinogénio, laminina e IgG.

Invasão de células epiteliais Indução de citocinas inflamatórias

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Factores de virulência – Tanerella forsythia Hidrolases

Protease tipo tripsina Protease de cisteina especifica para arginina Sialidase

Coagregação Com P.gingivalis e S. cristatus

Adesão BspA liga a fibrinogénio e fibronectina Liga-se a eritrocitos, fibroblastos e leucocitos

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Destruição tecidular em Perio Mediada pelo sistema imunitário Causada directamente por factores de

virulência dos MO

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Lesão inicial Histologicamente é uma resposta inflamatória

aguda Alterações vasculares Degradação do colagénio Alterações nas células epiteliais Infiltração dos tecidos por neutrófilos

Infiltrado de células linfóides dominadas por linfócitos T

Perda de colagénio Migração do epitélio (retração gingival)

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Lesão estabelecida Linfócitos B predominam Células plasmáticas MNP Neutrófilos infiltram-se no epitélio

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Lesão avançada Células plasmáticas predominam Perda de tecido conjuntivo Perda óssea

27-11-201337 T26-27 MJC

Neutrófilos Barreira ao nível do epitélio juncional Patologias raras (neutropenias) periodontite

precoce e severa Mas c/ MO mediadores de destruição

celular

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Factores genéticos de predisposição Genes de controlo da função dos neutrófilos

IL1 e TNF Receptores FC nas célula fagociticas

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Modelos animais da periodontite Não há nenhum ideal

Primatas Semelhança anatómica MI semelhante Desenvolvem perio com idade Histopatologia diferente Provoca-se perio aumentando a deposição de placa

bacteriana Estudos para o desenvolvimento de vacinas e dos

factores que controlam a perda óssea

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Modelos animais da periodontite

Roedores Ratinhos (mice)

Várias diferenças quer na dentição quer na flora Economia Conhecimento genético de estirpes Estudos do papel dos vários determinantes

imunológicos Determinação de patogenicidade e factores de

virulência

27-11-201341 T26-27 MJC

Modelos animais da periodontite

Roedores Ratos (Rats)

Dentes maiores manipulação mais fácil Utilização de espécie gnotobióticas para ver efeitos de

infecção por um único agente Estudos de vacinação

27-11-201342 T26-27 MJC

Bibliografia

Capítulo 12 até p 261

Capítulo 33

27-11-201343 T26-27 MJC

Capítulo 23-26

Endodontia Polpa dentária

Tecido conjuntivo altamente vascularizado com nervos e células do SI

Dentro da câmara pulpar que protege de trauma e intrusão microbiana. Logo é estéril

No entanto ocorrem infecções da polpa: Infecções secundárias, Causas iatrogénicas, Trauma

oclusal (raro) São infecções endógenas oportunistas

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História Infecção endodôntica

Dente “morto”

Foco de infecção

Extração

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História Infecções endodonticas são causadas por

microrganismos Utilização de técnicas de assépsia cirúrgica ao

“trabalhar” na cavidade oral. Isolar o dente durante o trabalho endodôntico Usar agentes desinfectantes quando se trata

o dente Cultura do material removido durante o

tratamento endodôntico para ajudar na terapia e prognóstico.

Até cerca de 1950 não havia consenso sobre a natureza infecciosa da inflamação pulpar. Isso acontece com o artigo de Kakehashi, 1965.

27-11-201346 T26-27 MJC

Tubos dentinários

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albumina, transferrina, tenascina e protoglicanos

No laboratório S.mutans e gordonii invadem TD mas Pg não só em associação com Streptococci.

Progresso da infecção endodôntica

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Fontes infecciosas O princípio do tratamento

endodôntico tratamento cirúrgico de feridas.

Lesões endodônticas são frequentemente lesões secundárias de cárie que podem iniciar mesmo antes de haver exposição pulpar. Muitos do MO isolados de lesões

endodônticas iniciais são Streptococcus não hemolíticos.

Podem também resultar da exposição da polpa por quebra de integridade da câmara pulpar ou por forçar MO pelos canais dentários (tratamento de dentisteria).

Infecção de canais acessórios, foramen apical associadas a perio

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Infecções dos canais radiculares

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Micorbiota associado a infecções endodonticas MO isolados por cultura:

Bacteroides 70% Prevotella 60% Lactobacillus 51% Streptococci orais 41% Clostridium 36% Fusobacterium 33% Propionobacterium

29% Peptostreptococcus

25% Corynebacterium 25%

MO identificados por PCR: Cerca de 20% da flora da

cavidade oral Não há Porphyromonas Quase o dobro de

espécies diferentes que o isolado em cultura (12-20)

Bacteroides e Firmicutes continuam a ser os mais abundantes

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Infecções sintomáticas e assintomáticas

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Diversidade diminui com o avançar da infecção

Enterococcus fecalis Gram positivo anaeróbio

facultativo Associado a necrose

pulpar Bastante resistente

(cultura) Acumula frequentemente

plasmídeos de resistência e por isso é de tratamento difícil

Tem a capacidade de se ligar ao colagénio

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Cultivo da flora é útil? Não é possível esterilizar os canais

Debridamento é essencial e Controlo da infecção

hipoclorito de sódio peróxido de hidrogénio Hidróxido de cálcio Antibacterianos (penicilina)

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One visit endodontics = tratamento cirúrgico de feridas. Como se tratam feridas?

Cortar Limpar Fechar

Neste tipo de procedimento OVE o principio é o mesmo Acesso Debridamento Desinfeção Selagem

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Abcessos dentoalveolares Obturação Antibioterapia Debridamento, etc Perigo do abcesso funcionar como foco de

infeção Após a eliminação da dor, pode voltar a selar-se

com agentes com propriedades antimicrobianas. Solução controversa e perigosa alastramento

da infecção.

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Agentes antibacterianos Hidróxido de cálcio

Alkalino sem ser caustico Estimula regeneração dentinária

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Infecção endodontica

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Infecção endodontica

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Bibliografia

Capítulo 14 e 15

Capítulo 35

27-11-201360 T26-27 MJC

Capítulo 29, 30