INTRODUO

CENTRO DE CINCIA DA SADE - CCS

QUMICA ANALTICA QUANTITATIVA

PROF. FRANCISCO ARTUR

CROMATOGRAFIA

ANTONIO SAMUEL FERNANDES

JOSILENE BRAGA

KARYSIA VERAS

ROSELY ROCHASobral CE

2010I. INTRODUOA Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao.

O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processo seja dependente da cor.

Apesar deste estudo e de outros anteriores, que tambm poderiam ser considerados precursores do uso dessa tcnica, a cromatografia foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi redescoberta. A partir da, diversos trabalhos na rea possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com os avanos tecnolgicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas.

A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios, sendo alguns deles listados abaixo:

1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico

Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia planar resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por centrifugao (Chromatotron) e cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em coluna, os quais sero mais bem compreendidos quando classificados por outro critrio.

2. Classificao pela fase mvel empregada

Em se tratando da fase mvel, so trs os tipos de cromatografia: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da gravidade, e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase mvel. A CLAE foi inicialmente denominada cromatografia lquida de alta presso, mas sua atual designao mostra-se mais adequada. No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna. Enquanto na CGAR so utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase estacionria.

3. Classificao pela fase estacionria utilizada

Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao.

4. Classificao pelo modo de separao

Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos. Dentre os vrios tipos de cromatografia, especial nfase ser dada cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia lquida clssica e de alta eficincia (CLAE) e cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR).II. CROMATOGRAFIA PLANA

Na cromatografia plana, a fase estacionria suportada sobre uma placa plana ou nos poros de um papel. Nesse caso, a fase mvel desloca-se atravs da fase estacionria por ao da capilaridade ou sob a influncia da gravidade. til em separao de compostos polares. Encontra-se bastante difundida devido sua facilidade experimental e ao seu baixo custo.1. Cromatografia em Papel

Esta tcnica assim chamada porque utiliza para a separao e identificao das substncias ou componentes da mistura a migrao diferencial sobre a superfcie de um papel de filtro de qualidade especial (fase estacionria). A fase mvel pode ser um solvente puro ou uma mistura de solventes. Este mtodo muito til para separar substncias muito polares, como acares e aminocidos. Possui o inconveniente de poder-se cromatografar poucas quantidades de substncia de cada vez.Manipula-se o papel com cuidado e pelas pontas, e cortam-se tiras em tamanhos que possam ser contidos nas cubas. importante cortar o papel seguindo o eixo das fibras, pois a celulose est orientada neste sentido, o que facilitar a passagem da fase mvel. Os lquidos polares tero grande afinidade pelas hidroxilas da molcula de celulose, formando pontes de hidrognio, ficando retido e funcionando como fase estacionria, e os lquidos menos polares sero repelidos por esta estrutura, funcionado como fase mvel.As cubas devero ser perfeitamente fechadas para permitir a saturao interna. A cromatografia pode ser ascendente ou descendente, sendo que esta ltima mais rpida e consome menos eluente. 2cm de altura de eluente na cuba suficiente para a cromatografia ascendente.

Coloca-se a amostra a ser analisada um pouco acima da extremidade inferior do papel seco, que aps ter esta extremidade inferior mergulhada numa mistura de solventes, tero os seus constituintes arrastados, juntamente com esta mistura que tende a subir por capilaridade. Os diferentes constituintes apresentaro variao na velocidade de deslocamento, de acordo com os seus coeficientes de partio. Os componentes menos solveis na fase estacionria (gua) tero uma movimentao mais rpida. Pode ser utilizado para anlise de mistura de aminocidos ou misturas de acares. A cromatografia em papel pode ser tambm no sentido descendente e bidimensional, este ltimo realizado em duas etapas com solventes apresentando diferentes propriedades.

2. Cromatografia em Camada DelgadaA cromatografia em camada fina (ou delgada) uma tcnica simples, barata e muito importante para a separao rpida e anlise quantitativa de pequenas quantidades de material. Ela usada para determinar a pureza do composto, identificar componentes em uma mistura comparando-os com padres; acompanhar o curso de uma reao pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes e ainda para isolar componentes puros de uma mistura.

Na cromatografia de camada delgada a fase lquida ascende por uma camada fina do adsorvente estendida sobre um suporte. O suporte mais tpico uma placa de vidro (outros materiais podem ser usados).

Sobre a placa espalha-se uma camada fina de adsorvente suspenso em gua (ou outro solvente) e deixa-se secar. A placa coberta e seca chama-se "placa de camada fina". Quando a placa de camada fina colocada verticalmente em um recipiente fechado (cuba cromatogrfica) que contm uma pequena quantidade de solvente, este eluir pela camada do adsorvente por ao capilar.

Cromatografia em camada delgada.

A amostra colocada na parte inferior da placa, atravs de aplicaes sucessivas de uma soluo da amostra com um pequeno capilar. Deve-se formar uma pequena mancha circular. medida que o solvente sobe pela placa, a amostra compartilhada entre a fase lquida mvel e a fase slida estacionria. Durante este processo, os diversos componentes da mistura so separados. Como na cromatografia de coluna, as substncias menos polares avanam mais rapidamente que as substncias mais polares. Esta diferena na velocidade resultar em uma separao dos componentes da amostra. Quando estiverem presentes vrias substncias, cada uma se comportar segundo suas propriedades de solubilidade e adsoro, dependendo dos grupos funcionais presentes na sua estrutura.

Depois que o solvente ascendeu pela placa, esta retirada da cuba e seca at que esteja livre do solvente. Cada mancha corresponde a um componente separado na mistura original. Se os componentes so substncias coloridas, as diversas manchas sero claramente visveis. Contudo, bastante comum que as manchas sejam invisveis porque correspondem a compostos incolores. Para a visualizao deve-se "revelar a placa". Um mtodo bastante comum o uso de vapores de iodo, que reage com muitos compostos orgnicos formando complexos de cor caf ou amarela. Outros reagentes para visualizao so: nitrato de prata (para derivados halogenados), 2,4-dinitrofenilidrazina (para cetonas e aldedos), verde de bromocresol (para cidos), ninhidrina (para aminocidos), etc.3. Cromatografia Centrfuga

A cromatografia centrifuga uma cromatografia em camada delgada preparativa e acelerada centrifugamente. Baseia-se no principio da operao onde a amostra a ser separada aplicada como uma soluo no centro do disco giratrio umedecido com o solvente. A eluio com solvente gera bandas circulares de separao dos componentes que so removidos juntamente com o solvente para um tubo de recepo.

compatvel com todos os solventes comumente usados nas outras tcnicas cromatogrficas, inclusive cido actico, no apropriada para uso com cidos minerais.

Tem como vantagens, a no aplicao de spot ou raspagem de bandas, as separaes so rpidas, cerca de 20 min, permite a observao direta por UV ou de compostos coloridos durante a eluio, suas camadas finas de 1, a 4 mm apresentam alta capacidade,permite a utilizao de pouco solvente e a eluio por gradiente fcil, o solvente regenerado in situ, podendo ser re-utilizado, a atmosfera de nitrognio previne oxidao das amostras, compacta (facilmente removida de um laboratrio para outro), poucos controles e no necessita altas presses, possui baixo preo e assim a Chromatotrons custa menos que um simples HPLC preparativo.

III. CROMATOGRAFIA EM COLUNA

A cromatografia em coluna costuma ser citada como o mais antigo procedimento cromatogrfico. Foi utilizada primeiramente para o isolamento dos pigmentos existentes nas folhas verdes dos vegetais.

Consiste em uma coluna de vidro, metal ou plstico, preenchida com um adsorvente adequado. uma tcnica de partio entre duas fases, slida e lquida, baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. O slido deve ser um material insolvel na fase lquida associada, sendo que os mais utilizados so a slica gel (SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p.

A mistura a ser separada colocada na coluna com um eluente (fase mvel; solvente) menos polar e vai-se aumentando gradativamente a polaridade do eluente e consequentemente o seu poder de arraste de substncias mais polares. Uma seqncia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol, gua e cido actico.

Colunas cromatogrficas. (a) Solvente adicionado coluna; (b) suporte slido sendo introduzido na coluna.

O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-se-o com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo adsorvente (grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto.

medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas, sendo que cada banda contem somente um composto. Em geral, os compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior do que os compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a fase estacionria. Se o adsorvente escolhido interagir fortemente com todos os compostos da mistura, ela no se mover. Por outro lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os solutos podem ser eludos sem serem separados. Por uma escolha cuidadosa das condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada.

Coluna cromatogrfica acoplada a um funil de separao

para manter o nvel do solvente na superfcie superior.

O xito de uma coluna depender ento da escolha de um suporte e solvente adequados para a sua realizao. Em alguns casos possvel visualizar a separao dos componentes de uma mistura observando o desenvolvimento de manchas diferentes na coluna ou acompanhando cm uma luz ultravioleta. Entretanto, na maioria das vezes, torna-se necessrio o acompanhamento da separao dos componentes pela tcnica de cromatografia em camada delgada (ccd).IV. CROMATOGRAFIA GASOSACromatografia data de 1903 no trabalho do cientista russo Mikhail Semenovich Tswett. O estudante graduado alemo Fritz Prior desenvolveu a cromatografia gasosa de estado slido em 1947. Archer John Porter Martin, quem foi vencedor do Prmio Nobel por seu trabalho no desenvolvimento das cromatografias lquido-lquido (1941) e em papel (1944), estabeleceu os fundamentos para o desenvolvimento da cromatografia gasosa e posteriormente produziu a cromatografia gs-lquido (1950). Tcnica de separao e anlise de misturas por interao dos seus componentes entre uma fase estacionria e uma fase mvel.Tcnica utilizada na Cromatografia Gasosa:

Uma cromatografia gasosa uma tcnica que se baseia na anlise qumica instrumental por separao de compostos qumicos e uma amostra complexa. Uma cromatografia gasosa usa um tubo estreito atravs do qual se d o fluxo conhecido como coluna, atravs do qual diferentes constituintes de uma amostra passam em uma corrente de gs (gs condutor, ou transportador, a fase mvel) em diferentes taxas dependendo de vrias propriedades fsicas e qumicas e suas interaes com um especfico recheio da coluna, chamada fase estacionria. Como os composto qumicos saem no final da coluna, so detectados e identificados eletronicamente. A funo da fase estacionria na coluna seperar componentes diferentes, causando a cada um sada da coluna em um tempo diferente (tempo de reteno). Outros parmetros que podem ser usados para alterar a ordem ou tempo de reteno so a taxa de fluxo do gs condutor e a temperatura.

Em uma anlise CG, um volume conhecido de analito gasoso ou lquido injetado na entrada da coluna, geralmente com o uso de uma microseringa (ou com fibras de microextrao de fase slida, ou ). Conforme o gs carreador leva as molculas do analito atravs da coluna, essa movimentao inibida pela adsoro das molculas do analito nas paredes da coluna ou no material do empacotamento da mesma.

A taxa com que as molculas progridem ao longo da coluna depende da fora da adsoro que, por sua vez, depende do tipo de molcula e do material da fase estacionria. Uma vez que cada tipo de molcula tem uma taxa de progresso diferente, os vrios componentes da mistura de analito so separados conforme progridem ao longo da coluna, chegado ao fim dela em momentos diferentes (tempos de reteno). Um detector empregado para monitorar o fluxo de sada da coluna.

Assim, o momento em que cada componente sai da coluna, e a quantidade deles, pode ser determinada. Geralmente, as substncias so identificadas (qualitativamente) pela ordem com que emerger (eluem) da coluna e pelo tempo de reteno do analito na coluna.Aplicaes prticas da Cromatografia Gasosa:

Qumica:

Determinao de antioxidantes, nutrientes ou contaminantes em alimentos.

Indstria:

Monotorizao de processos industriais.

Sade:

- Anlises dos constituintes do sangue.

- Anlise forense.

Ambiente:

- Determinao de resduos de pesticidas em produtos alimentares, guas ou esgotos.

- Determinao de gases e solventes orgnicos na atmosfera, solos ou rios.

As partes de um Cromatgrafo Gasoso:

A cromatografia um mtodo fsico de separao, no qual componentes a serem separados so distribudos entre duas fases: a fase estacionria, e a fase mvel. A amostra transportada por uma corrente de gs atravs de uma coluna empacotada com um slido recoberta com uma pelcula de um lquido. Devido a sua simplicidade, sensibilidade e efetividade para separar os componentes de misturas, a cromatografia de gs uma das ferramentas mais importantes em qumica. amplamente usada para anlises quantitativos e qualitativos de espcies qumicas e para a determinar constantes termoqumicas tais como calores de soluo e vaporizao, presso de vapor e coeficientes de atividade. A cromatografia de gs tambm usada para monitorar os processos industriais de forma automtica: analisam-se as correntes de gs periodicamente e realizam-se reaes de forma manual ou automtica para compensar variaes no desejadas.

Muitas anlises de rotina so realizadas rapidamente no campo medicinal e outros. Por exemplo, por meio do uso de apenas 0.1 centmetros cbicos (0.003 onas) de sangue, pode-se determinar as porcentagens de oxignio dissolvido, nitrognio, dixido de carbono e monxido de carbono. A cromatografia de gs til tambm na anlise de contaminantes do ar, lcool no sangue, leos essenciais e produtos alimentcios.

O mtodo consiste primeiramente na introduo da mistura de prova ou amostra em uma corrente de gs inerte, normalmente hidrognio, hlio, nitrognio ou argnio, que atuaro como gs de arrastre. As amostras lquidas vaporizam-se antes da injeo no gs de arrastre. O fluxo de gs passa pela coluna empacotada atravs da qual os componentes da amostra se deslocam a velocidades influenciadas pelo grau de interao de cada componente com a fase estacionria no voltil. As substncias que tm a maior interao com a fase estacionria so retidas por mais tempo e, por tanto, separadas daquelas de menor interao. medida que as substncias eluem da coluna, podem ser quantificadas por um detector e/ou tomadas para outra anlise.

Existem dois tipos de cromatografia de gs: cromatografia Gs - Slido (CGS) e cromatografia Gs - Lquida (CGL). A cromatografia Gs - Slida se baseia na base slida estacionria, na qual a reteno das substncias analisveis a consequncia da absoro fsica. A cromatografia Gas -Lquida til para separar ons ou molculas dissolvidas em um solvente. Se a soluo de amostra estiver em contato com um segundo slido ou fase lquida, os diferentes solutos interagem com a outra fase em diferentes graus, devido a diferenas de adsoro, intercmbio de ons, partio, ou tamanho. Estas diferenas permitem que os componentes da mistura se separem usando estas diferenas para determinar o tempo de reteno dos solutos atravs da coluna.V. CROMATOGRAFIA LQUIDA

A cromatografia lquida (HPLC) um processo de anlise de separao fsico cuja aplicao permite a anlise qualitativa mais comumente e quantitativa de uma amostra. Esse mtodo analtico vem sendo amplamente empregado graas ao rpido tempo de anlise. Permite separar constituintes de uma mistura atravs de sua distribuio em duas fases: fase mvel um lquido e a fase estacionria um slido.A cromatografia liquida utilizada em vrias reas da cincia, no acompanhamento de snteses, em anlises de pesticidas, feromnios, no isolamento de produtos naturais e sintticos e na produo e controle de qualidade de medicamentos, dentre tantas outras aplicaes.A cromatografia a lquido permite, entre outras, a anlise das seguintes classes dos principais compostos: protenas, cidos nuclicos, aminocidos, corantes, polissacardeos, pigmentos de plantas, compostos inicos, ons metlicos, ctions, lipdeos polares, explosivos, polmeros sintticos, surfatantes, farmacuticos, metablicos de plantas, nions, complexos de metais pesados, etc. Hoje a cromatografia lquida de alta eficincia tem as seguintes caractersticas:

alto poder de resoluo;

separaes rpidas;

monitoramento contnuo do eluente;

medidas quantitativas acuradas;

anlises repetitivas e reprodutveis com a mesma coluna;

automao do procedimento analtico e do manuseio dos dados Sob alguns aspectos, a cromatografia lquida de alta eficincia mais verstil que a cromatografia com fase gasosa porque ela no est limitada a amostras volteis e termicamente estveis e porque a escolha de fases estacionrias e mveis mais ampla (Mendham et al, 2002).O emprego da cromatografia a lquido para solucionar problemas analticos ou preparativos necessita, alm da instrumentao adequada, da combinao correta das condies experimentais tais como:

tipo de coluna (fase estacionria);

fase mvel, sua composio e vazo;

temperatura;

quantidade de amostra injetada, etc.

A seleo correta dessas variveis necessita do conhecimento bsico dos fatores que controlam a separao na cromatografia a lquido (Ciola,1998).

Cromatografia a lquido de alto desempenho (HPLC)A cromatografia a lquido de alto desempenho um tipo de cromatografia que emprega uma fase mvel lquida e uma fase estacionria finamente dividida e que, para ter um fluxo razovel, opera a presses elevadas. Originalmente chamava-se cromatografia lquida de alta presso e esta terminologia foi abandonada quando se constatou que o diferencial de comportamento desta para as demais cromatografias lquidas no era a maior presso, mas sim o melhor desempenho cromatogrfico. Dentre as principais caractersticas e vantagens do mtodo HPLC esto:

coluna recheada com partculas de pequeno tamanho ( 3 - 10 mm);

alta resoluo;

anlise no destrutiva;

velocidade de separao;

monitorao contnua do efluente da coluna;

medio quantitativa exata;

anlises repetitivas e reprodutivas com a mesma coluna;

automao do procedimento analtico e do tratamento dos dados.Os componentes essenciais da HPLC so:

Bomba de alta presso: dispositivo importante pois est relacionado ao tempo de reteno, a reprodutibilidade e a sensibilidade do detector. Este sistema composto por bomba e controladores de presso e vazo. De uma maneira geral, a bomba deve ter a capacidade de impulsionar a fase mvel. Existem dois tipos de bomba, com presso constante e com volume constante.

Sistema de injeo da amostra: a introduo da amostra pode ser realizada por meio de uma vlvula de amostragem ou por meio de uma seringa de injeo. O efluente desses dispositivos preenche uma serpentina de volume conhecido e o acionamento da vlvula transfere, integralmente, esse volume para a corrente de fase mvel.

Coluna: so feitas de ao inoxidvel polido, com comprimentos de 10 a 30 cm, com calibre de preciso. Dimetros internos tpicos variam de menor ou igual a 1 mm para colunas capilares; 2, 3, 4, 5 e 6 mm para colunas analticas recheadas e maior ou igual a 10 mm para colunas preparativas. Os recheios usados so constitudos por partculas pequenas, rgidas comum a distribuio granulomtrica estreita. Os tipos de recheio podem ser divididos em trs categorias: 1- grnulos porosos, polimricos, baseados em copolmeros de estireno-divinilbenzeno e so utilizados na troca de ons e na cromatografia por permeao em gel;

2- grnulos de camada porosa , constitudos por uma camada delgada de slica modificada, estes recheios peculiares so usados em alguma aplicaes de troca de ons e muito usados em cromatografia de fase reversa para anlise de compostos orgnicos;

3- partculas de slica totalmente porosas que proporcionam considervel melhoria da eficincia da coluna, da capacidade de analisar as amostras e da velocidade de anlise.

Detector: monitora a fase mvel medida que elui da coluna. So duas principais classes em que podem ser divididos: detectores de propriedades macroscpicas e detectores de propriedades de soluto, que medem a diferena entre uma propriedade fsica do soluto na fase mvel e a mesma propriedade na fase mvel pura. Esse monitoramento efetuado pela deteco propriamente dita, associada a uma transduo para um sinal eltrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente na fase mvel pura. Esse monitoramento efetuado pela deteco propriamente dita, associada a uma transduo para um sinal eltrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente.

VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

CIOLA, R. Fundamentos da cromatografia a lquido de alto desempenho: HPLC. So Paulo, SP, 1998.

MENDHAM, J.; DENNEY, R. C.; BARNES, J. D.; THOMAS, M.T. Vogel, Anlise Qumica Quantitativa. 6 ed. Londres, 2002.Cromatografia de Coluna. Disponvel em: http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/COLUNA.htm. Acesso em: 04 de maio de 2010.

Cromatografia. Disponvel em: http://ube-167.pop.com.br/repositorio/4488/meusite/qorganicaexperimental/cromatografia.htm. Acesso em: 04 de maio de 2010.

Experimento 5: Introduo a Mtodos Cromatogrficos. Cromatografia em Camada Delgada e em Coluna. Disponvel em: http://vsites.unb.br/iq/litmo/disciplinas/tecnica_pesquisa_I/Cromatografia.DOC. Acesso em: 04 de maio de 2010.

Cromatografia em Papel. Disponvel em: http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/CROMA_PAPEL.htm. Acesso em: 03 de maio de 2010.

Cromatografia em Papel. Disponvel em: http://www.setor1.com.br/analises/cromatografia/cro_pa.htm. Acesso em: 03 de maio de 2010.

Cromatografia Gasosa. Disponvel em: http://www.ebah.com.br/cromatografia-gasosa-nivel-tecnico-ppt-a24620.html. Acesso em: 28 de abril de 2010.

PENTEADO, Jos Carlos, et. al. Experimento didtico sobre cromatografia gasosa: uma abordagem analtica e ambiental. Disponvel em: http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-40422008000800047&script=sci_arttext. Acesso em: 28 de abril de 2010.

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