trabalho aquicultura

Butirato e propionato para melhorar o crescimento desempenho de Litopenaeus vannamei

Discentes: Amanda AlvesFelipe Candil

Leopoldo Del Neri

Docente: Prof. Dra.Giovana

IntroduçãoLitopenaeus vannamei é conhecido pelo nome comercial de camarão-de-patas-brancas ou camarão-branco-do-pacífico;

É uma variedade de crustáceo da subordem Dendrobranchiata originário do Pacífico oriental sendo a maior espécie de camarão de cativeiro.

As doenças estão entre os principais problemas no desenvolvimento da aquicultura;

O surgimento de doenças causadas por novas enterobactérias, tais como, síndrome de necrose aguda hepatopancreática na Ásia está causando altas mortalidades em cultivos comerciais e, consequentemente, grandes perdas econômicas na carcinicultura.

Porém o uso errôneo e prescrição inadequada de antibióticos, tem selecionado organismos mais resistentes, como também, a proibição do seu uso na produção de animais, fizeram a procura por aditivos alimentares aumentar;

Os estudos sobre a suplementação de ácido orgânico ou os seus sais no crescimento marinho de camarões são limitadas, porém sabe-se que estes afetam a ação de enzimas digestivas, e influenciam na disponibiliada de e absorção de nutrientes, melhorando a resposta contra patógenos

Objetivo

Este estudo teve como objetivo determinar os efeitos da suplementação com propionato de sódio e butirato de sódio em diferentes níveis de inclusões alimentares no crescimento de Litopenaeus vannamei, e além disso realizar avaliação do desempenho de crescimento, retenção de azoto e de fósforo, parâmetros hemato imunológico de camarões e alterações na comunidade microbiana intestinal.

Material e MetodosMaterial biológico

Os camarões utilizados neste estudo eram de linhagem livre de patógenos específicos de notificação obrigatória pela OIE-World Organização Mundia de Saúde Animal obtidas na empresa AQUATEC (Rio Grande do Norte, Brasil).

Os camarões foram cultivados em laboratório de Carcinicultura Marinha na Universidade Federal de Santa Catarina, Brasil (UFSC)

Material e Métodos•Preparação e análise de dietas

–As dietas experimentais utilizadas nos ensaios foram formuladas para serem isoprotéicas, isoenergéticas e atender às exigências nutricionais de L.vannamei.

•Os ingredientes secos da dieta foram previamente moídos e peneirados (500lm).

Material e Métodos 1) Homogeneização dos microingredientes em misturador-Y (10 min);

2) Adição dos macroingredientes a serem homogeneizados (10 min);

3)Adição de óleos e lecitina de soja e 40% água quente;

4) Peletização da mistura → secagem (40ºC por 18hrs);

5) Os sais de ácidos orgânicos foram adicionados nas respectivas quantidades para substituir o caulino, o qual foi usado como um ingrediente de carga

Material e Métodos

•A composição das dietas proximal foi realizada de acordo com a metodologia descrita por a Associação dos Químicos Analíticos Oficiais (AOAC, 2005).

•A matéria seca (MS) foi calculada por análise gravimétrica, após secagem numa forno a 100 ° C durante 24 h.

Após a dieta homogeneização, o pH da solução foi medido;

Dez gramas de cada dieta, foram imersos em aquários contendo 60 L de água salgada, com 35ppt de salinidade, pH de 7,72, e uma temperatura de 28,8 ° C.

Material e Métodos

Os aquários continham ventilação verticais constante;

Depois de 2 h ,secou-se a 105 ° C até peso constante para se determinar a estabilidade através da percentagem de retenção de DM.

Material e Métodos

Material e Métodos•O desempenho do crescimento Experimental

Tabela 1. Formulação das dietas experimentais utilizados no crescimento em Clear water Litopenaeus vannamei da (Boone, 1931), complementado com o propionato de sódio (P), butirato de sódio (B) e sem suplementação (controle).

Material e Métodos1) Tanques de vidro de 12,5 m2 (6000 L) com aquecedores de 3000 W e constante arejamento;

2) Sistema de renovação estática (2/dia): possibilitando medir a temperatura e o oxigênio dissolvido;

3) Ph e amônia foram medidos semanalmente.

Material e MétodosOferecimento das dietas (4/dia):

08:00 ; 11:00 ; 14:00 ;17:00

Após 47 dias de cultura, foi possível realizar a biometria final, tal como, o peso final, peso semanal ganho, produtividade, eficiência alimentar e sobrevivência, entre outros.

Material e Métodos

No mesmo tempo, 10 camarões por unidade experimental foram coletados para análise e cálculo de retenção de nitrogênio, fósforo e retenção do taxa de eficiência proteica.

Material e MetodosAvaliações microbiota intestinal

Retira de 5camarões/unidade: contagem bacteriológica do intestino;

Diluição das amostras (1/10);

Meio de Cultura: Agar Marinho Bac. Heterotroficas) e Agar Tiossulfato, citrato e Bile sacarose (setivo);

Incubação a 29 ° C durante 24 h.

Material e MetodosRemoção e congelamento do intestino (-196ºC):

Extração de DNA e amplificação do RNAr por reações de PCR;

Desse modo, 25µLde cada amostra foram aplicado em 6% de gel de poliacrilamida a uma voltagem de 100 V durante 15 h.

Material e MétodosApós a eletroforese, o gel foi corado com 10µL de uma solução contendo 2,5µL de SYBR Gold (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) em 5% tampão TAE durante 40min, na ausência de luz.

Fotografado pelo sistema de Imagem QuantLAS 4000

Material e MétodosAnálise hemato-imunológico

Fixação de 40µL de hemolinfa em solução de formaldeído a 4% / MAS

O restante foi deixado a coagular a 4 ° C.

Congelamento (20ºC) e centrifugação (10000 g/10min): soro,

Armazenamento a 20ºC do soro, para depois utilizar na analise imunológica;

Material e MétodosContagem direta de hemócitos/mm /hemolinfa pela câmera de Neubauer, considerando ainda a diluição;

A ativida defenoloxidase(PO) foi determinada por espectrofotometria (DO490nm) através da formação de pigmentos de cromo-DOPA;

A concentração de proteína/hemolinfa foi estimada pelo método de Bradford(1976) através da utilização de soro de albumina bovina como padrão.

Material e MétodosO crescimento bacteriano em cada poço foi medida num leitor de microplacas a DO550nm, após 12 h de incubação de V.alginolyticusa 29 ° C;

Deste modo, foi possível determinar a concentração de soro mais baixa capaz de inibir o crescimento bacteriano de cada estirpe.

Material e MétodosAnálise de dados

1) Homoscedasticidade avaliada pela o teste de Bartlett;

2) Dados de desempenho de crescimento, retenção de azoto e de fósforo, a taxa de eficiência de proteína e parâmetros hemato-imunológicos foram, em seguida, submetidos a variância unifatorial;

3) Os dados sobre a qualidade da água e contagem bacteriológica foram analisados através de análise de variância.

Material e MétodosAnalise de dados:

•A performance de separação do meio foi realizada pelo teste de Student-Newman-Keuls;

•Testes estatísticos: significância de 5%;

•Os resultados similares entre a comunidade bacteriana intestinal realizada por DGGE foram analisados usando o software Bio Numerics, versão 6,6

Resultados e Discussão

Parâmetros de qualidade da água

Parâmetros com baixa variação observada: Temperatura, oxigênio dissolvido, salinidade, pH, o total nitrogênio amoniacal e nitrogênio nitrito;

Não houve diferenças significativas entre os tratamentos;


Parâmetros de qualidade da água

Todos os parâmetros de qualidade de água analisados mantiveram-se dentro dos padrões aceitáveis para o cultivo de camarões marinhos


O desempenho do crescimento

Os camarões alimentados com dietas suplementadas com propionato e butirato, em todas as concentrações analisadas(0,5%, 1%, e 2%), experimentaram um aumento no seu peso final e ganho de peso semanal.


O desempenho do crescimento

A eficiência da alimentação e sobrevivência de camarões alimentados com a dieta contendo 2% de butirato e o rendimento do suplementado com 2% propionato, 0,5% e 2% de butirato, apresentaram igualmente valores mais elevados do que os camarões alimentados a dieta de controle

Resultados e DiscussãoObservou-se o aumento do ganho de peso e a taxa de crescimento específica de L.vannamei, quando suplementado com 73 mM de propionato, butirato, fumarato e succinato em uma dieta comercial

Resultados e DiscussãoO uso de nitrogênio e fósforo

Camarões alimentados com dietas contendo 0,5% e 2% butirato mostraram uma maior percentagem de retenção de azoto e taxa de eficiência de proteínas em relação aos camarões alimentados com a dieta controle

Quanto a retenção do fósforo, não há diferenças significativas observadas entre os tratamentos


Este é o primeiro relatório de retenção de azoto e fósforo em camarão suplementado com sais orgânicos e mais estudos devem ser realizados para esclarecer os efeitos da suplementação dietética de sais orgânico e na utilização de azoto e fósforo por camarões marinhos.


•O intestino dos camarões alimentados com adieta suplementada com butirato, em todas concentrações, apresentaram contagens mais baixas de vibrios em relação a outros tratamentos;

A contagem do total de bactérias heterotróficas não foi significativa


Analise hemato-imunologica

Não foram observadas diferenças no THC dos camarões

Conclusão

•A suplementação dietética de propionato de sódio e butirato de sódio, em diferentes concentrações, modifica a microbiota intestinal e melhora a soro-aglutinação e o crescimento do Camarão;

•Butirato de sódio melhora a retenção de nitrogênio e taxa de eficiência protéica, como também, melhora eficiência alimentar, sobrevivência e rendimento.

Conclusão

Estes resultados mostraram pela primeira vez que o potencial de butirato de sódio como promotor de crescimento antibiótico para este camarão marinho.

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