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BF&A_ 1Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Tópicos em Validação de M étodos
Dr Oscar Bahia Filho
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BF&A_ 2Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
1. Reconhece Padrões,
2. Observa e mantém sob controle,
3. Melhora
Sistema de Gestão no Lab
Gestor
Barreira 1Confiabilidade Instrumental
Barreira 2“Gargalos” da Análise
Barreira 3Significância do resultado
Barreira 4Cumprimento dos requisitos legais
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BF&A_ 3Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Método AnalíticoMétodo Analítico
Análise de RotinaAnálise de Rotina
Como os “de fora” pensam que é
“Sistema Analítico”“Sistema Analítico”Como realmente é
Réplica Experimental
Ens aio Local
Es tabilidade
Ajusta / Verifica
Qualificação Instrumental
Avaliação
Matriz Analitos
padrão
Matriz Analitos
Adequado?s
n Adequado?
sn
Otimiza Método
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BF&A_ 4Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
A validação do método é feita para garantir que a metodologiaanalítica é exata, reprodutível e flexível sobre uma faixa específicaque uma substância será analizada.
É uma avaliação que garante a conformidade com as exigênciaslegais ou fim proposto (interesse de terceiros) do método analítico
“O processo que prove evidência documentada de que realiza aquilopara o qual está indicado para fazer.”
Obstáculo: Linguagem Metrológica x Linguagem Científica
Por que validar?
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BF&A_ 5Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Definições
ICH*“O objetivo da validação de um método analítico é demonstrar que éadequado para o seu propósito”.
*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals forHuman Use
USP**Validação de um método analítico é o processo que fornece umaevidência documentada, através de estudos de laboratório, de que realizaaquilo para o qual é indicado para fazer.
A performance é expressa em termos de características analíticas.
**United States Pharmacopeia 24
Para quem?Para quem?
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BF&A_ 6Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Reconhecimento formal da competência de um laboratório para realizarensaios específicos
Voluntário e aberto a qualquer tipo de laboratório
Reconhecimento formal da competência de um laboratório para realizarensaios específicos
Voluntário e aberto a qualquer tipo de laboratório
Credenciamento / Avaliação
Um laboratório de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatórios/laudos.
Os principais meios são:
usar métodos validados, ter POP´s de controle interno da qualidade, participar de programas de ensaios de proficiência, e estar credenciado por Norma nacional/internacional
Um laboratório de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatórios/laudos.
Os principais meios são:
usar métodos validados, ter POP´s de controle interno da qualidade, participar de programas de ensaios de proficiência, e estar credenciado por Norma nacional/internacional
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BF&A_ 7Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Avaliação para Credenciamento
Exame de um laboratório de calibração ou ensaio paradeterminar a conformidade com os requisitos de credenciamentopreviamente estabelecidos
Requisitos do Credenciamento*NBR ISO/IEC 17025
NIT DICLA 028 (BPL)
NIT DICLA 083 (Lab. Clínicos)
outros
* Todas as normas fazem alusão a: Validação de métodos e Estimativa da Incerteza da medida
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BF&A_ 8Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
EuraChem, ICH US FDA US EPA ICH USP FAO/AIEA Codex, MAPA (CLAVE), MS (ANVISA) MMA (IBAMA)....
IUPAC (Interdivisional Working Party onHarmonisation of Quality AssuranceSchemes for Analytical Laboratories)
Protocolos de Validação
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BF&A_ 9Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Processo de Validação
ValidaçãoSoftware
Hardware
Método Analítico
Critérios Conformidade
A qualificação instrumental (IQ) é uma etapa anterior ao processo de validação.
Antes de validar um método, deve-se certificar que todos os esforços de otimização já tenham sido esgotados para as condições locais do ensaio.
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BF&A_ 10Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Especificidade/ seletividade (interferência) LOD LOQ Faixa (Linearidade) Exatidão (recuperação) Precisão ( Repetibilidade, Precisão intermediária e
Reprodutibilidade) Robustez (resistência a variações intencionais) Aplicabilidade (nível)
Elementos da validação
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BF&A_ 11Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
1. Linearidade e Faixa
Plano de Validação
Elemento de validação
- prepare 5 níveis de soluções padrão- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- gráfico adequado- RSD 10%
Critérios de aceitação
- modelo de Regressão- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (instrumental)- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)
Cálculos
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2. Exatidão
Plano de Validação
Elemento de validação
- 80 ≥ % recuperação ≤ 120- RSD (médio) 15%
Critérios de aceitação
- % recuperação- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (método)
Cálculos
- prepare 12 réplicas de placebo- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
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BF&A_ 13Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
3. Seletividade/Especificidade
Plano de Validação
Elemento de validação
- prepare 5 réplicas de placebo- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- Concentração equivalente do placebo- média, SD e RSD%
Cálculos
- média ≤ 33% do LOQ (método)- RSD ≤ 15%
Critérios de aceitação
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4. Precisão (repe e repro)
Plano de Validação
Elemento de validação
- prepare 5 réplicas de placebo (2 labs mínimo)- fortifique com 100% LOQ- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- RSD ≤ 15%- 80 ≥ % recuperação ≤ 120
Critérios de aceitação
- % de recuperação- média, SD e RSD%- teste de significância de Fisher
Cálculos
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BF&A_ 15Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
5. LOQ e LOD
Plano de Validação
Elemento de validação
- prepare 5 réplicas de placebo- fortifique 100% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- 80 ≥ % recuperação ≤ 120- RSD (médio) 15%
Critérios de aceitação
- % recuperação- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (método)
Cálculos
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BF&A_ 16Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
6. Robustez*
Plano de Validação
Elemento de validação
Tarefa experimental- Nas 12 réplicas do placebo e 5 níveis desolução padrão, medidas 3 x cada.
*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforços e promoveinformações quanto a robustez.
Variações intencionais- nível de treinamento do técnico,- diferentes dias,- diferentes fornecedores,- diferentes laboratórios,- pequenas mudanças nas etapas do método- etc.
Cálculos- dependem das variações
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BF&A_ 17Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Testes Estatísticos
Usados para facilitar a tomada de decisões, evitando as subjetivas, osmais comuns são:
StudentDistribuição normal dos valores experimentais – Linearidade e Faixa,Robustez
CochranTesta a homogeneidade (variância) dos dados – Linearidade e Faixa,Exadidão, Precisão
DixonDescobre dados outliers se o teste de Cochram for falso – Linearidade eFaixa, Exadidão, Precisão
FischerCompara a varância de duas populações – Linearidade e Faixa, Exadidão,Precisão, Robustez
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BF&A_ 18Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003
Faixa L
inear
Inclinaçãoa
LoQ
LoD
S/N > 10 e RSD < 10%S/N > 3
u. d
e R
espo
sta
u. de Concentração
Interseçãob
LOD e LOQ
YL= yB + k * SB
YL é a menor leitura diferente do “branco”, yB é a média das medidas do “branco”, SB é o desvio padrão do “branco” e k fator (2,3, etc..)
IUPAC
LD = 3 * S / a * C LQ = 10 * S / a * C
Referência
S é o desvio padrão da medida, a é a inclinação da curva de calibração e C é a concentraçào usada