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BF&A_ 1Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Tópicos em Validação de M étodos

Dr Oscar Bahia Filho

BF&A Consultores

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BF&A_ 2Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

1. Reconhece Padrões,

2. Observa e mantém sob controle,

3. Melhora

Sistema de Gestão no Lab

Gestor

Barreira 1Confiabilidade Instrumental

Barreira 2“Gargalos” da Análise

Barreira 3Significância do resultado

Barreira 4Cumprimento dos requisitos legais

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BF&A_ 3Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Método AnalíticoMétodo Analítico

Análise de RotinaAnálise de Rotina

Como os “de fora” pensam que é

“Sistema Analítico”“Sistema Analítico”Como realmente é

Réplica Experimental

Ens aio Local

Es tabilidade

Ajusta / Verifica

Qualificação Instrumental

Avaliação

Matriz Analitos

padrão

Matriz Analitos

Adequado?s

n Adequado?

sn

Otimiza Método

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BF&A_ 4Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

A validação do método é feita para garantir que a metodologiaanalítica é exata, reprodutível e flexível sobre uma faixa específicaque uma substância será analizada.

É uma avaliação que garante a conformidade com as exigênciaslegais ou fim proposto (interesse de terceiros) do método analítico

“O processo que prove evidência documentada de que realiza aquilopara o qual está indicado para fazer.”

Obstáculo: Linguagem Metrológica x Linguagem Científica

Por que validar?

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BF&A_ 5Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Definições

ICH*“O objetivo da validação de um método analítico é demonstrar que éadequado para o seu propósito”.

*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals forHuman Use

USP**Validação de um método analítico é o processo que fornece umaevidência documentada, através de estudos de laboratório, de que realizaaquilo para o qual é indicado para fazer.

A performance é expressa em termos de características analíticas.

**United States Pharmacopeia 24

Para quem?Para quem?

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BF&A_ 6Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Reconhecimento formal da competência de um laboratório para realizarensaios específicos

Voluntário e aberto a qualquer tipo de laboratório

Reconhecimento formal da competência de um laboratório para realizarensaios específicos

Voluntário e aberto a qualquer tipo de laboratório

Credenciamento / Avaliação

Um laboratório de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatórios/laudos.

Os principais meios são:

usar métodos validados, ter POP´s de controle interno da qualidade, participar de programas de ensaios de proficiência, e estar credenciado por Norma nacional/internacional

Um laboratório de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatórios/laudos.

Os principais meios são:

usar métodos validados, ter POP´s de controle interno da qualidade, participar de programas de ensaios de proficiência, e estar credenciado por Norma nacional/internacional

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BF&A_ 7Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Avaliação para Credenciamento

Exame de um laboratório de calibração ou ensaio paradeterminar a conformidade com os requisitos de credenciamentopreviamente estabelecidos

Requisitos do Credenciamento*NBR ISO/IEC 17025

NIT DICLA 028 (BPL)

NIT DICLA 083 (Lab. Clínicos)

outros

* Todas as normas fazem alusão a: Validação de métodos e Estimativa da Incerteza da medida

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BF&A_ 8Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

EuraChem, ICH US FDA US EPA ICH USP FAO/AIEA Codex, MAPA (CLAVE), MS (ANVISA) MMA (IBAMA)....

IUPAC (Interdivisional Working Party onHarmonisation of Quality AssuranceSchemes for Analytical Laboratories)

Protocolos de Validação

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BF&A_ 9Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Processo de Validação

ValidaçãoSoftware

Hardware

Método Analítico

Critérios Conformidade

A qualificação instrumental (IQ) é uma etapa anterior ao processo de validação.

Antes de validar um método, deve-se certificar que todos os esforços de otimização já tenham sido esgotados para as condições locais do ensaio.

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BF&A_ 10Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Especificidade/ seletividade (interferência) LOD LOQ Faixa (Linearidade) Exatidão (recuperação) Precisão ( Repetibilidade, Precisão intermediária e

Reprodutibilidade) Robustez (resistência a variações intencionais) Aplicabilidade (nível)

Elementos da validação

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BF&A_ 11Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

1. Linearidade e Faixa

Plano de Validação

Elemento de validação

- prepare 5 níveis de soluções padrão- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD- mede 3 x cada

Tarefa experimental

- gráfico adequado- RSD 10%

Critérios de aceitação

- modelo de Regressão- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (instrumental)- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)

Cálculos

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BF&A_ 12Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

2. Exatidão

Plano de Validação

Elemento de validação

- 80 ≥ % recuperação ≤ 120- RSD (médio) 15%

Critérios de aceitação

- % recuperação- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (método)

Cálculos

- prepare 12 réplicas de placebo- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD- mede 3 x cada

Tarefa experimental

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BF&A_ 13Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

3. Seletividade/Especificidade

Plano de Validação

Elemento de validação

- prepare 5 réplicas de placebo- mede 3 x cada

Tarefa experimental

- Concentração equivalente do placebo- média, SD e RSD%

Cálculos

- média ≤ 33% do LOQ (método)- RSD ≤ 15%

Critérios de aceitação

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BF&A_ 14Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

4. Precisão (repe e repro)

Plano de Validação

Elemento de validação

- prepare 5 réplicas de placebo (2 labs mínimo)- fortifique com 100% LOQ- mede 3 x cada

Tarefa experimental

- RSD ≤ 15%- 80 ≥ % recuperação ≤ 120

Critérios de aceitação

- % de recuperação- média, SD e RSD%- teste de significância de Fisher

Cálculos

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BF&A_ 15Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

5. LOQ e LOD

Plano de Validação

Elemento de validação

- prepare 5 réplicas de placebo- fortifique 100% TD- mede 3 x cada

Tarefa experimental

- 80 ≥ % recuperação ≤ 120- RSD (médio) 15%

Critérios de aceitação

- % recuperação- média, SD e RSD%- LOD e LOQ (método)

Cálculos

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BF&A_ 16Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

6. Robustez*

Plano de Validação

Elemento de validação

Tarefa experimental- Nas 12 réplicas do placebo e 5 níveis desolução padrão, medidas 3 x cada.

*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforços e promoveinformações quanto a robustez.

Variações intencionais- nível de treinamento do técnico,- diferentes dias,- diferentes fornecedores,- diferentes laboratórios,- pequenas mudanças nas etapas do método- etc.

Cálculos- dependem das variações

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BF&A_ 17Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Testes Estatísticos

Usados para facilitar a tomada de decisões, evitando as subjetivas, osmais comuns são:

StudentDistribuição normal dos valores experimentais – Linearidade e Faixa,Robustez

CochranTesta a homogeneidade (variância) dos dados – Linearidade e Faixa,Exadidão, Precisão

DixonDescobre dados outliers se o teste de Cochram for falso – Linearidade eFaixa, Exadidão, Precisão

FischerCompara a varância de duas populações – Linearidade e Faixa, Exadidão,Precisão, Robustez

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BF&A_ 18Tópicos em Validação de MétodosI Escola Avançada de Metrologia em Química – Nov/2003

Faixa L

inear

Inclinaçãoa

LoQ

LoD

S/N > 10 e RSD < 10%S/N > 3

u. d

e R

espo

sta

u. de Concentração

Interseçãob

LOD e LOQ

YL= yB + k * SB

YL é a menor leitura diferente do “branco”, yB é a média das medidas do “branco”, SB é o desvio padrão do “branco” e k fator (2,3, etc..)

IUPAC

LD = 3 * S / a * C LQ = 10 * S / a * C

Referência

S é o desvio padrão da medida, a é a inclinação da curva de calibração e C é a concentraçào usada