TÍTULO: AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE TRIPANOCIDA IN VIVO DA (-)-HINOQUININA, OBTIDA PELAOXIDAÇÃO CATALÍTICA DE (-)-CUBEBINATÍTULO:

CATEGORIA: EM ANDAMENTOCATEGORIA:

ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDEÁREA:

SUBÁREA: FARMÁCIASUBÁREA:

INSTITUIÇÃO: UNIVERSIDADE DE FRANCAINSTITUIÇÃO:

AUTOR(ES): ANA JÚLIA GERONAUTOR(ES):

ORIENTADOR(ES): MÁRCIO LUÍS ANDRADE E SILVAORIENTADOR(ES):

COLABORADOR(ES): ANA HELENA JANUÁRIO, GUILHERME VENÂNCIO SÍMARO, KAREN C. S.REZENDE, PATRICIA M. PAULETTI, VIVIANE R. ESPERANDIM, WILSON ROBERTO CUNHACOLABORADOR(ES):

Avaliação da Atividade tripanocida in vivo da (-)-hinoquinina, obtida pela oxidação

catalítica de (-)-cubebina

Resumo

A doença de Chagas é uma Doença Tropical Negligenciada causada pelo protozoário

Trypanosoma cruzi. Durante os últimos anos, a doença tem recebido crescente atenção

como um problema emergente na América do Norte e Europa, devido a migrações

internacionais provenientes de áreas endêmicas para áreas não-endêmicas. Estima-se

que 8 a 10 milhões de pessoas estão infectadas em todo o mundo, principalmente na

América Latina, onde a doença é endêmica. Atualmente os medicamentos disponíveis,

como Benzonidazol e Nifurtimox, demandam um tratamento prolongado, precisam de

acompanhamento cuidadoso e possuem um risco substancial de efeitos adversos.

Publicações recentes revelaram inúmeras atividades biológicas atribuídas à lignana

dibenzilbutirolactônica (-)-cubebina (1), obtida a partir de Piper cubeba. Estudos citam

sua otimização estrutural, a fim de se obter derivados com maior potencial

farmacológico, baixos custo e baixa toxicidade. Dessa forma, considerando os

resultados promissores apresentados pela (-)-hinoquinina (2) contra o parasita T. cruzi,

esta lignana poderia ser considerado como um composto líder para o desenvolvimento

de novos fármacos para o tratamento. Além disso, é importante salientar que diferentes

ensaios in vivo, em diversos protocolos terapêuticos, devem ser desenvolvidos de modo

a obter uma melhor eficácia para as formas intracelulares do parasita. O objetivo deste

estudo foi avaliar a atividade tripanocida in vivo de (2), A atividade biológica in vivo

contra formas promastigotas de Trypanosoma cruzi foi avaliada e (2) mostrou atividade

tripanocida significativa. Pode-se observar que (2) foi capaz de diminuir o número de

parasitas não apenas no pico parasitêmico, mas em todo o ciclo de infecção, com

resultados mais significativos, a uma concentração de 20 mg/kg. Conclui-se, a partir dos

resultados, que a (-)-hinoquinina (2), um promissor candidato à fármaco para o

tratamento da doença de Chagas.

Introdução

A lignana dibenzilbutirolactólica (-)-cubebina (1) (Figura 1) vem despertando

grande interesse nos pesquisadores de diversas áreas, por apresentar várias atividades

biológicas, como a atividade antimicrobiana (MacRae & Towers, 1984), analgésica,

antiinflamatória (Da Silva Filho et. al., 2004; Souza et. al., 2004) e antiparasitárias,

principalmente às atividades esquistossomicida (PI 0503951-7, Processo Fapesp

04/08784-1), tripanocida (Souza et. al., 2005; Da Silva Filho et. al., 2004) e

leishmanicida (Barata et. al., 2000).

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(-)-cubebina 1

Figura 1. Estrutura química da (-)-cubebina

Apesar das políticas preventivas e do progressivo controle sanitário, a doença de

Chagas ou tripanossomíase americana ainda é uma patologia potencialmente fatal,

atualmente reconhecida pela OMS como uma das 13 doenças tropicais mais

negligenciadas do mundo (WHO, 2014). Foi descoberta em 1909, pelo médico

brasileiro Carlos Chagas, que foi quem primeiro descreveu a doença clinicamente, que

tem como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi, porém somente a partir

da década de 60 que a patologia foi considerada um grave problema de saúde no Brasil.

Os únicos medicamentos com eficácia comprovada para o tratamento da doença

de Chagas, desde a década de 60 e 70, são o Benzonidazol (Rochagan ®, Roche) e

Nifurtimox (Lampit ®, Bayer). Se administrados logo após o inicio da infecção, na fase

aguda, apresentam 80% de eficácia na cura da doença. A terapêutica atual na forma

farmacêutica de comprimido de liberação imediata requer administração de várias doses

diárias durante um longo período, cerca de 60 a 90 dias, o que dificulta a adesão do

paciente. Além disso a eficácia do tratamento diminui à medida que se aumenta o tempo

de infecção, devido ao acesso ilimitado aos amastigotas intracelulares, ocasionando

altos níveis de concentração plasmática, alta toxicidade e efeitos colaterais severos

como depressão da medula óssea, trombocitopenia e agranulocitose, hiporexia, náuseas,

vômitos, alergia cutânea e neuropatia periférica (Barrett et. al., 2003; WHO, 2013).

Objetivo

O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade tripanocida in vivo de (2) (Figura

2), um produto natural, sobre as formas amastigotas de da cepa Y de T. cruzi. O

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(-)-hinoquinina 2 Materiais e Métodos

Ensaio tripanocida sobre a forma amastigota intracelular

Visando avaliar a efetividade do composto obtido através da oxidação catalítica

da (-)-cubebina, foram realizados testes sobre a forma amastigota intracelular de

Trypanosoma cruzi.

Grupos experimentais e avaliação da parasitemia

Para a realização dos ensaios in vivo foram utilizados 25 camundongos albinos,

machos, linhagem BALB/C, pesando aproximadamente 25g cada, que foram divididos

em cinco grupos, onde foi efetuada a análise da atividade da (-)-hinoquinina, de acordo

com o descrito abaixo:

Grupos: Grupo I - controle negativo – 5 animais foram inoculados com 1 x 106

parasitas e tratados com o solvente utilizado na preparação das soluções (DMSO 5%)

durante 20 dias, para a avaliação do comportamento parasitêmico; Grupo II - controle

positivo – 5 animais foram inoculados com 1 x 106 parasitas e tratados com

Benzonidazol com a dosagem correspondente de 10 mg/kg de peso corpóreo durante 20

dias, para a avaliação do comportamento parasitêmico; Grupo III - tratamento - após

48h da inoculação intraperitoneal dos parasitas (1 x 106 parasitas), 5 animais foram

Figura 2. Estrutura química da

lignana (-)-hinoquinina.

tratados com a substância em estudo na concentração de 5 mg/kg durante 20 dias, para a

avaliação do comportamento parasitêmico; Grupo IV - tratamento - após 48h da

inoculação intraperitoneal dos parasitas (1 x 106 parasitas), 5 animais foram tratados

com a substância em estudo na concentração de 10 mg/kg durante 20 dias, para a

avaliação do comportamento parasitêmico; Grupo V - tratamento - após 48h da

inoculação intraperitoneal dos parasitas (1 x 106 parasitas), 5 animais foram tratados

com a substância em estudo na concentração de 20 mg/kg durante 20 dias, para a

avaliação do comportamento parasitêmico.

Todos os animais foram mantidos nas mesmas condições, em sala com

temperatura e luminosidade controlada, recebendo água e ração ad libitum.

Foram avaliados o tempo de sobrevida e parasitemia dos animais tratados. As

curvas parasitêmicas foram realizadas por meio da coleta de 5µL de sangue da cauda de

cada animal em experimentação, de dois em dois dias, sendo o número de parasitas

quantificado de acordo com a técnica descrita por Brener (1962).

Resultados e discussão

A avaliação da atividade tripanocida in vivo da (-)-hinoquinina foi realizada com

o objetivo de mensurar seu potencial sob as formas tripomastigotas de T. cruzi em uma

diferente margem de concentração (5, 10 e 20 mg/kg/dia) em relação aos dados já

relatados na literatura (Souza et al., 2005).

A parasitemia foi monitorada do 2º ao 20º dia após a infecção. Foram colhidos

5μl de sangue da cauda dos animais, e colocados entre lâmina e lamínula. Foi realizada

leitura de 50 campos em microscópio óptico, com objetiva de 40X, ocular de 10X e

fator de correção 106. A parasitemia foi determinada segundo Brener (1962) e

corresponde ao número de parasitos visualizados em 50 campos, multiplicado pelo fator

de correção do microscópio (número de tripomastigotas x 103/5μl de sangue).

Na Figura 3 estão representados os valores da parasitemia realizada em camundongos

Balb/c, machos, pesando em torno de 20 gramas e infectados com 1x106 formas

tripomastigotas pertencentes à cepa Y de T. cruzi.

Figura 3. Comportamento parasitêmico de animais infectados com 1x106 formas

tripomastigotas da cepa Y de Trypanosoma cruzi e tratados diariamente por via

intraperitoneal com (-)-hinoquinina nas concentrações de 5 mg/kg, 10 mg/kg e 20mg/kg

durante 20 dias. Controle positivo (Benzonidazol) e controle negativo animais tratados com

solução de DMSO 5%.

Conclusão

Os ensaios antiparasitários in vivo na doença de Chagas foram realizados e a

análise dos resultados obtidos mostrou que a lignana (-)-hinoquinina pode ser

considerada como um promissor produto natural bioativo, o que estimula a realização

de estudos posteriores.

Referências

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