Alpha Scientists in Reproductive Medicine and ESHRE SpecialInterest Group of Embryology

Padronização de uma terminologia comum em relação à classificação da morfologia embrionária para efeitocomparativo inter-clínicas.

Consenso: Representa os padrões mínimos que cada laboratório deve reportar em relação à classificação de morfologia oocitária e embrionária.

A padronização do tempo de checagem de fertilização e clivagem é crítica, para que seja possivel a comparação de resultados entre laboratórios, e deve ser calculada em horas pós-inseminação do óvulo :

•Checagem Fertilização: 17±1

• Day-2 embryo assessment 44±1

• Day-3 embryo assessment 68±1

• Day-5 embryo assessment 116±2

Maturação oocitária: mudanças dentro do oócito, preparando-o para a ovulação.

Apesar da conclusão das mudanças nucleares para a produção de oócitos em MII, esta não define sua competência e não reflete a maturidade molecular e estrutural do oócito. Um oócito, que não completou a maturação citoplasmática (MC), é de pobre qualidade e incapaz de atingir seu desenvolvimento com pleno sucesso.

•Meiose reiniciada.• Membrana nuclear

desaparece.•Cromossomos migram para a

periferia • Extrusão do primeiro do

corpúsculo polarArranjo cromossomico

haploide (23).

Arranjo cromossômico diploide (46)

Maturidade do citoplasma: citoplasma claro, comestrutura uniforme e granulosidade homogênea efina.

Imaturidade do citoplasma: excesso degranularidade, presença de vacúolos e inclusões nocitoplasma

A. Farrag et al, 2008. Recombinant HCG for triggering ovulation increases the rate of mature oocytes in women treated for ICSI.

Loutradis Det al, 1999. Oocyte morphology correlates with embryo quality and pregnancy rate afterintracytoplasmic sperm injection. Fertil Steril, 72, 240-244.

Complexo cumulus-oócito (COC): Score 0 ou 1,sendo:

1: COC considerado de boa qualidade – célulasdo cumulus e corona radiata expandido

0 : COC considerado de má qualidade –Células do cumulus compactadas

Oócito normal

Envolto por Zona Pelúcida uniforme

Citoplasma translúcido uniforme, livre de inclusões

Corpúsculo polar de tamanho normal.

Mais da metade de todos os oócitos humanos aspirados mostram pelo menos uma anormalidade morfológica

ANORMALIDADES ZP: cor ou espessura alteradas da ZP devem ser registradas

ANORMALIDADES EPV: Presença de inclusões no EPV Aumento considerável no tamanho do EPV

ZP Espessa

Inclusões no EPV

ANORMALIDADES: De acordo com o consenso, oócitos com tamanho consideravelmenteaumentado não devem ser inseminados, devido aoelevado risco de aneuploidia.

ANORMALIDADES: Cluster: área central distinta e escura de

granulação no citoplasma.Taxa de aneuploidia: 47%

sER: Agrupamento de retículo endoplasmático liso. Visualizado como um disco suave, ligeiramente elíptico e plano no citoplasma (disco único ou uma série de discos menores).

Taxa de aneuploidia: 37%

Meriano J. et al. (2001). Tracking of oocyte dysmorphisms for ICSI patients may prove relevant to theoutcome in subsequent patient cycles.

SER reduzem significativamente as chances de gestação clinica e aumentam as chances de gestação quimica (Otsuki et al., 2004).

Hiromitsu Hattori et al, 2014: Tx fertilização(p<0,01). Tx Gestação Clínica sER+ (3/36 – 8,3%) vssER- (24/105 – 22,9%; p=0,0559)

Oócitos com SER fertilizados não devem ser transferidos (quando possivel)

Vacúolos

Pequenos vacúolos (5 –10 µm de diâmetro) parecem não ter consequência biológica.

Grandes vacúolos (>14 µm de diâmetro): associados a baixa fertilização. Quando o oócito fertiliza e o vacúolo persiste durante a clivagem, a taxa de blastulação é reduzida.

ANORMALIDADE: Oócito gigante

Geralmente associado a um conjunto diploide de material genético.

Aparecem com baixa frequência (0,26% a 0,31%) e são facilmente identificados por seu diâmetro aumentado (aproximadamente 200 μm, comparados com oócitos de tamanho regular, em torno de 140 μm

Devem ser descartados, pois há grandes probabilidades de gerar um embrião triploide.

Atlas de Reprodução Humana, 2012. Albuquerque M. Albuquerque L e Azevedo A. Avaliação Morfológica da Qualidade dos oócitos (Capitulo 13)

Pronúcleos devem ter tamanhos iguais e de localizaçãocentral.

PNs tamanhos diferentes: embriões com baixo potencialde desenvolvimento e altas taxas de aneuploidia (Scott et al., 2000; Scott, 2002c, 2003; Munné and Cohen, 1998; Sadowy et al., 1998).

Localização não-central: falha de algum mecanismodurante o processo, como na formação dos microtúbulospor exemplo.

Número de nucleolos e distrubuiçãoentre os PNS

Tamanho Nucleolos e PNS

Polarização Nucleolos

Localização e Disposição dos PNS

2PNA >3 – Igual Iguais Polarizados Central

2PNB >3 –Diferentes

Iguais Nãopolarizados ou polarização unilateral

Central

2PBC ≤3 – Diferente Desiguais Independente da polarização

Periférico

Número de nucléolos e distribuição entre os PNS

Tamanho Nucléolos e PNS

Polarização Nucléolos

Localização e Disposição dos PNS

Categoria 1(Simétricos)

>1 – Igual Iguais Ambos Polarizados ou ambos não polarizados

Central e justapostos

Categoria 2(Não Simétricos)

>1– Diferente Desiguais Polarização unilateral

Não-Centralizadose/ou distantes

Categoria 3 (Anormal)

0 ou 1 –Diferente

Independente Independente da polarização

Independente

2 2

1 13

A observação de halo translúcido periférico nocitoplasma do oócito fertilizado não fornece evidênciassuficientes para oferecer valor prognóstico.

Estágio de Desenvolvimento esperado:

D2: 4 Células

D3: 8 Células

D5: Blastocisto

Fragmentação Embrionária:

Leve: <10%

Moderada: 10-25% (

Grave: >25% (um quarto do embrião fragmentado)

Tamanho das Células

Simétricas ou assimétricas

Multinucleação

Mais de um núcleo em um mesmo blastômero, incluindo micronúcleos, em D2.

Potencial implantação

Anomalias cromossômicas

Aborto espontâneo

Grau Classificação Descrição

1 Bom 4 células<10% fragmentaçãoSem multinucleaçãoCélulas Simétricas

2 Regular 3 ou 5 células10-25% fragmentaçãoSem multinucleaçãoCélulas Assimétricas

3 Ruim <3 ou > 5 células>25% fragmentaçãoMultinucleadoCélulas Assimétricas

Grau Classificação Descrição

1 Bom 8células<10% fragmentaçãoSem multinucleaçãoCélulas Simétricas

2 Regular 6-7 ou 9-10 células10-25% fragmentaçãoSem multinucleaçãoCélulas Assimétricas

3 Ruim <6 ou >10 células>25% fragmentaçãoMultinucleadoCélulas Assimétricas

Fertaid classifica Blastocisto segundo Gardner = Androfert.

Consenso altera apenas a classificação de expansão dos blastocistos

Blastocisto Boa Qualidade:

1. Totalmente expandido a eclodido (Graus IV, V ou VI)

2. ICM: proeminente, facilmente visualizado, com muitascélulas compactadas e fortemente aderidas umas àsoutras

3. Trofoblasto: muitas células comprimidas formando um epitélio coeso