teste de condutividade elétrica e tetrazólio para avaliação da qualidade fisiológica de...

7/26/2019 Teste de Condutividade Eltrica e Tetrazlio Para Avaliao Da Qualidade Fisiolgica de Sementes de Jacaranda Pu

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TESTE DE CONDUTIVIDADE ELTRICA E TETRAZLIO PARA AVALIAODA QUALIDADE FISIOLGICA DE SEMENTES DE Jacaranda puberula

Cham. E Matayba elaeagnoidesRadlk.

I. Identificao do projetoIdentificao do aluno: Gabriela Fernanda Souza

Identificao do possvel orientador: Luciana Magda De Oliveira

II. ResumoOs testes de vigor so ferramentas rpidas e prticas para a indicao

da viabilidade de sementes florestais, permitindo a simulao de condiesadversas ocorridas durante a germinao e o crescimento das espcies. Os

testes de condutividade eltrica e de tetrazlio so testes bioqumicos de

determinao de vigor, com grande potencial de aplicao em sementes

florestais. Entretanto, so necessrias padronizaes das suas metodologias

relacionadas com a realidade de cada espcie. O objetivo do presente projeto

ser a avaliao da qualidade fisiolgica de sementes de Jacaranda puberula

Cham. e Matayba elaeagnoides Radlk, atravs do teste de condutividade

eltrica e tetrazlio, comparando-os com os resultados obtidos pelos mtodos

clssicos de qualidade e vigor de sementes. As sementes sero provenientes

de matrizes existentes em um fragmento de Floresta Ombrfila Mista,

localizada no municpio de Irani-SC, e em seguidas sero armazenadas em

condies de laboratrio. No teste de condutividade eltrica, as sementes

sero embebidas em gua destilada por diferentes perodos (6, 12, 24, 30 e 36

horas), assim como quantidades diferentes de gua destilada (75 e 100 ml por

repetio). Para o teste de tetrazlio sero utilizadas as concentraes de

0,2%, 0,5% e 1% de sal de tetrazlio, em tempos de embebio de 60,120 e

180 minutos. O teste de germinao ser realizado atravs do mtodo do

papel-filtro. Ser realizado delineamento inteiramente casualizado, seguido de

teste de Bartlett para testar a homogeneidade dos dados, teste F e, teste de

Tukey (p>5).


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III. Introduo

Para a grande maioria das espcies nativas ainda so incipientes os

trabalhos sobre caractersticas silviculturais, mtodos de propagao, bem

como a definio de metodologias para a anlise das sementes utilizadas. Para

a produo de mudas por sementes, a padronizao e o aperfeioamento do

teste de germinao visam avaliar o potencial das sementes para semeadura e

comparar a qualidade de diferentes lotes, o que deve ser conduzido sob

condies ambientais ideais e especficas para cada espcie (BRASIL, 2009).

Portanto, tornam-se urgentes e necessrios estudos sobre a qualidade

fisiolgica de sementes de espcies nativas, visando subsidiar formao de

mudas para plantios comerciais, recuperao de reas degradadas e

preservao ambiental (GUEDES et al., 2011).

A germinao e vigor das sementes dependem tanto de valores

intrnsecos da planta, como maturao fisiolgica e dormncia, quanto de

fatores extrnsecos, como temperatura, substrato, quantidade de gua e luz.

Deste modo, evidencia-se a necessidade do conhecimento de fatores

influenciadores da germinao e que possam ser controlados e manipulados,

visando melhores resultados em processos germinativos e consequentemente,diminuio de custos na produo de mudas nativas (AVELINO, 2014).

Os mtodos mais rpidos para determinao da qualidade das sementes

florestais so os mtodos de vigor, que permitem detectar diferenas na

qualidade fisiolgica de lotes de sementes semelhantes, mas que podem

apresentar comportamentos diferenciados em condies de armazenamento

ou de campo distintos (OLIVEIRA, 2012).

Caracterizao das espcies

Jacaranda puberula Cham.

Conhecida como caroba ou carobinha, a Jacaranda puberula uma

espcie arbrea pertencente famlia Bignoniaceae, classificada

ecologicamente como helifita e seletiva higrfita, encontrada tanto em

florestas primrias quanto secundrias, em solos midos de plancies, aclives


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suaves e terrenos pedregosos. Com potencial na utilizao em recomposio

de reas degradadas, devido ao seu rpido crescimento e adaptabilidade a

solos arenosos e argilosos degradados (REITZ, 1974).

A espcie apresenta altura de 4 a 7 metros, com 30 a 40 cm de

dimetro, folhas compostas bipinadas com fololos glabros medindo de 3 a 5

cm. A distribuio geogrfica da espcie se d do estado do Rio de Janeiro at

o Rio Grande do Sul. Seu florescimento ocorre nos meses de agosto e

setembro e a maturao dos frutos se d de fevereiro a maro (LORENZI,

2008).

De acordo com Kuniyoshi (1983), a espcie apresenta frutos do tipo

capsula lenhosa deiscente, de colorao castanha escura, com frutificao de

fevereiro a maro. As sementes, que no apresentam dormncia, so aladas e

sem endosperma, se dispem transversalmente a sutura longitudinal central. A

coleta das sementes deve ser realizada no incio da deiscncia dos frutos,

momento que os mesmos apresentam aspecto lenhoso e colorao escura, os

frutos devem ser secos ao sol, para finalizao da deiscncia.

Matayba elaeagno idesRadlk

De acordo com Lorenzi (2008), Matayba eleagnoides uma espcie

arbrea semidecdua, muito frequente em submatas de Floresta Ombrfila

Mista e matas semidecduas, ocorrendo de Minas Gerais at o Rio Grande do

Sul. Os indivduos adultos podem apresentar altura de 6 a 14 metros, com 30 a

50 cm de dimetro, sendo bastante importantes na recuperao de reas

degradadas.

Os frutos de Matayba elaeagnoides so classificados como capsulasglobosas, carnosas com colorao avermelhada, apreciados pela avifauna

(Kuniyoshi, 1983). As sementes, geralmente trs por fruto, so ariladas, de

forma oblonga e obovada, no necessitando de quebra de dormncia. Lorenzi

(2008) destaca que o florescimento da espcie se d nos meses de setembro a

novembro e o amadurecimento dos frutos, durante os meses de dezembro e

janeiro.


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Deteriorao x vigor de sementes

Logo aps o amadurecimento das sementes, inicia-se o processo de

deteriorao, que pode ser mais acentuado em algumas espcies. Isso

influencia diretamente o vigor germinativo das sementes florestais, fazendo

com que a semente perda sua capacidade de gerar uma plntula normal

(OLIVEIRA, 2012).

As condies ambientais so fatores determinantes na velocidade de

deteriorao de sementes, como temperatura, umidade, ao de fungos e

insetos, assim como o armazenamento podem tornar mais rpido e intenso

este processo. Sabe-se ainda, que alguns constituintes das sementes podem

torn-las mais ou menos resistentes deteriorao que outras sementes,

geralmente sementes com maiores teores de leos apresentam deteriorao

mais rpida. Entre as principais alteraes relacionadas com a deteriorao, se

destacam o esgotamento de reservas alimentares, alteraes da composio

qumica, alteraes nas membranas celulares, alteraes enzimticas e de

nucleotdeos (VILLELA; PERES, 2004).

O vigor compreende caractersticas do potencial fsico e fisiolgico das

sementes, revelando as alteraes oriundas do avano da deteriorao, que

nem sempre so identificadas pelos testes de germinao. Assim,

considerado o potencial de emergncia de plntulas normais em variadas

condies ambientais (MARCOS-FILHO, 1999).

Testes de vigor

A principal funo das sementes a multiplicao e perpetuao daespcie, fazendo com que a floresta aumente sua riqueza. Entretanto, para que

isso acontea, a semente deve apresentar algumas caractersticas, que

envolvem aspectos genticos, fsicos, fisiolgicos e sanitrios. S assim, a

espcie pode assegurar sua sobrevivncia em uma comunidade vegetal

(OLIVEIRA, 2012).

A aplicao de testes de vigor possibilita a comparao entre lotes de

sementes para diferentes objetivos, com eles possvel analisar a resistnciadas sementes de determinada espcie a condies adversas. Isto, pois, em


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algumas ocasies, as primeiras alteraes causadas pela deteriorao das

sementes ocorrem antes que se perceba o declnio da sua capacidade

germinativa (VIEIRA; KRZYZANOWSKI, 1999).

De acordo com Marcos-Filho (1999), os testes de vigor podem ser

divididos em quatro categorias: fsicos, bioqumicos, de resistncia e

fisiolgicos. Os testes fsicos avaliam aspectos morfolgicos das sementes,

como tamanho, peso, densidade e colorao. J os testes de resistncia levam

em considerao o desempenho das sementes quando expostas a condies

de estresse. Enquanto que, os testes fisiolgicos consistem no ndice de

velocidade de germinao das sementes. Quanto aos testes bioqumicos, so

avaliadas alteraes bioqumicas associadas ao vigor das sementes, como os

testes de condutividade eltrica e de tetrazlio.

De acordo com Pin-Rodrigues et al. (2004), os testes de vigor podem

ainda ser divididos em diretos e indiretos. Os testes diretos so aqueles

realizados em campo ou condies de laboratrio que simulem condies

adversas de campo. J os mtodos indiretos avaliam as caractersticas fsicas,

fisiolgicas e bioqumicas que expressam a qualidade e vigor das sementes.

Teste de condutividade eltrica

O teste de condutividade eltrica comeou a ser utilizado na dcada de

1920, como indicativo do vigor de sementes agrcolas, porm foi a partir da

dcada de 60 que se intensificaram as pesquisar acerca do mesmo (RAMOS,

2011).

Segundo Vieira e Krzyzanowski (1999), o teste de condutividade eltrica

segue dois princpios: um fsico, ligado com a avaliao da corrente eltrica,por meio da soluo de embebio, e um princpio biolgico, relacionado com a

perda de lixiviados do interior da clula para o meio exterior, como acares,

aminocidos, cidos graxos, enzimas e ons inorgnicos, envolvendo

processos bioqumicos inteiramente relacionados com a integridade das

membranas celulares.

Quanto maior for o nmero de lixiviados liberados para a soluo de

embebio, menor ser o vigor das sementes, devido a diminuio deresistncia de membranas e, consequentemente ao aumento da


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permeabilidade das sementes. Assim, o teste de condutividade considera que

com o envelhecimento das sementes, ocorre sua deteriorao e em

consequncia, aumenta-se sua permeabilidade e a lixiviao de exsudatos. Os

solutos exsudatos apresentam cargas positivas, e so detectados por

aparelhos como condutivmetros, fazendo com que a avaliao deste teste seja

simplificada (OLIVEIRA, 2012).

De acordo com Pia-Rodrigues et al. (2004), os testes de condutividade

eltrica podem ser realizados seguindo dois sistemas, o de condutividade em

massa, que analisa um conjunto de sementes, ou a anlise individual, onde se

analisam as sementes individualmente. Normalmente o mtodo mais utilizado

o de condutividade em massa. Entretanto, existem diversos fatores que

influenciam os valores de condutividade eltrica, como o tamanho e teor inicial

de gua das sementes, tempo e temperatura de embebio, nmero de

sementes da amostra, assim como o gentipo de cada espcie (RAMOS,

2011). O presente fato demonstra a necessidade de padronizao do teste

para cada espcie estudada, levando em considerao o nmero de sementes,

tempo e temperatura de embebio.

Teste de tetrazlio

Tratando-se de um teste tradicional na determinao da qualidade e do

vigor de sementes, o teste de tetrazlio consiste em um teste relativamente

rpido, com resultados confiveis e com a vantagem de no ser afetado pela

presena de fungos e bactrias, que podem mascarar outros testes de

germinao (PIN-RODRIGUES et al., 2004). Outra vantagem da utilizao

deste teste a possibilidade de utilizao em sementes que apresentamdormncia, o que fica dificultado em testes de germinao normais.

Baseado na alterao da colorao dos tecidos da semente como

consequncia da reao que ocorre entre o sal de tetrazlio e enzimas

desidrogenases oriundas da respirao das sementes, os testes de tetrazlio

podem ser realizados em sementes recm-colhidas ou armazenadas. Durante

o teste, o sal de tetrazlio difundido atravs dos tecidos. Quando ocorre a

formao da colorao vermelho carmim claro, subentende-se que existeatividade respiratria das mitocndrias, indicando viabilidade celular e dos


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tecidos. Quando da formao de colorao mais escura, indica-se um processo

de deteriorao do tecido, devido a maior difuso do sal de tetrazlio nesses

tecidos. J, quando o tecido apresenta-se morto, a colorao do mesmo

permanece original (FRANA NETO; KRZYZANOWSKI; COSTA, 1998).

Fatores como a preparao das sementes, e a concentrao de soluo

utilizada e tempo de colorao podem influenciar os resultados do teste de

tetrazlio. As sementes podem ser utilizadas inteiras ou realizando-se corte ou

puno do tegumento, seccionamento das sementes ou mesmo retirada do

tegumento ou embrio, visando facilitar o contato do sal com os tecidos da

semente. A concentrao de sal varia de acordo com a espcie avaliada,

oscilando entre 0 a 1% para sementes florestais. importante acondicionar as

sementes no escuro, uma vez que o sal de tetrazlio reage com a

luminosidade. fundamental o conhecimento das estruturas das sementes

para a correta avaliao do teste.

IV. Objetivos

Objetivo principal

Avaliar a qualidade fisiolgica de sementes de Jacaranda puberula

Cham. e Matayba elaeagnoides Radlk, atravs da utilizao dos testes de

condutividade eltrica e do tetrazlio.

Objetivos especficos

Estabelecer um protocolo adequado para a realizao do teste de

condutividade eltrica para as sementes de Jacaranda puberula Cham.

e Matayba elaeagnoidesRadlk.

Estabelecer um protocolo adequado para a realizao do teste detetrazlio para as sementes de Jacaranda puberula Cham. e Matayba

elaeagnoidesRadlk.

Verificar e comparar a viabilidade econmica do teste de condutividade

eltrica e do tetrazlio em relao aos testes clssicos de germinao,

aplicados s sementes de Jacaranda puberula Cham. e Matayba

elaeagnoidesRadlk.


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V. Hiptese

O teste de condutividade eltrica e de tetrazlio analisam a viabilidade

de sementes florestais com a mesma exatido e confiabilidade de testes

clssicos.

VI. METODOLOGIA

Obteno de sementes

Tanto as sementes de Matayba elaeagnoides quanto as sementes de

Jacaranda puberula sero coletadas de dez indivduos, selecionados levando

em considerao aspectos como circunferncia altura do peito, altura total e

comercial, rea de copa, assim como sanidade, localizao, qualidade de copa

e de tronco, localizados em um fragmento de Floresta Ombrfila Mista no

municpio de IraniSC, com no mnimo 200 metros de distncia entre elas. O

clima da regio Mesotrmico Brando, com temperaturas mdias entre 10C e

15C, Supermido sem seca (IBGE, 2010 a). De acordo com Pandolfo (2002),

a regio apresenta pluviosidade mdia de 1700 a 1900 mm anuais.

Os solos da regio foram formados a partir de rochas baslticas, com

maior acidez. Apresentam saturao de bases menor que 50%, sendo

considerados como solo distrficos (CROCE, 2002). A regio apresenta altitude

entre 800 e 1200 m (IBGE, 2010 b).

Teste de condutividade eltrica

Para a avaliao de condutividade eltrica sero utilizadas 100

sementes por lote, divididas em quatro repeties, para a determinao domelhor tempo de embebio em gua destilada, sero utilizados os seguintes

tratamentos: 6 horas (T1), 12 horas (T2), 24 horas (T3), 30 horas (T4) e 36

horas (T5).

Para a determinao da quantidade de gua deionizada sero testados

75 e 100 ml. As solues sero mantidas em recipientes de vidro a temperatura

constante de 25C.

Ao final do perodo de embebio, a medio ser realizada comutilizao de condutivmetro. O resultado da leitura ser dividido pelo peso da


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subamostra, expresso em S cm1g1 de semente, seguindo metodologia

recomendada por Pin-Rodrigues et al. (2004).

Teste de tetrazlio

Para a realizao do teste de tetrazlio sero utilizadas as

concentraes de 0,2% (T1), 0,5% (T2) e 1% (T3) de sal de tetrazlio, com

sementes previamente umedecidas em papel filtro por 24 horas. Cada lote ser

composto de quatro repeties de 25 sementes, totalizando 100 sementes por

lote. Sero ainda testados os perodos de embebio de 60,120 e 180 minutos,

onde as sementes embebidas sero mantidas no escuro a temperatura

constante de 25C, conforme recomendam Pin-Rodrigues et al. (2004). Aavaliao das sementes ser realizada seguindo as recomendaes da Regra

para Anlise de Sementes (BRASIL, 2009).

Teste de germinao

O teste de germinao ser realizado em caixas plsticas do tipo

gerbox, utilizando-se como substrato papel-filtro umedecido. Cada lote ser

formado de quatro repeties de 25 sementes Os testes sero conduzidos em

sala de germinao com temperatura de 25C e fotoperodo de 12 h, com

avaliao da germinao aos sete e 14 dias.

A avaliao das plntulas ser realizada de acordo com o indicado por

Brasil (2009), classificando-as em plntulas normais, com pequenos defeitos,

plntulas anormais, e sementes no germinadas, como sementes duras,

sementes mortas e sementes dormentes.As variveis avaliadas sero primeira

contagem de germinao, germinao, tempo mdio de germinao e ndice

de velocidade de germinao.

Delineamento experimental

O delineamento experimental utilizado ser inteiramente casualizado,

com utilizao do teste de Bartlett para testar a homogeneidade dos dados, os

que se mostrarem homogneos, sero submetidos ao teste F e, pelo teste de

Tukey (p>5), suas mdias sero comparadas. Os dados que no apresentarem


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homogeneidade sero transformados em arco seno. Para a correlao linear

entre os testes de tetrazlio e de germinao, ser realizada a anlise de

correlao linear simples de Pearson.

VII. Cronograma

Atividade Referencialterico

Finalizaodo projeto

Coleta desementes

Teste degerminao

Teste detetrazlio

Teste decondutividade

Anliseestatstica

Finalizao doprojeto

Set/2016 xOut/2016 xNov/2016 xDez/2016 xJan/2017 xFev/2017 x

Mar/2017Maio/2017 x x xJun/2017 x x xJul/2017 xAgo/2017 xSet/2017 xOut/2017 xNov/2017 xDez/2017


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VIII. Referncias

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