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  • Universidade do Algarve

    Instituto Superior de Engenharia

    Avaliao da contaminao microbiolgica

    e da resposta ao stress ambiental em moluscos

    bivalves da Ria Formosa

    Marina Lameirinhas Cabral

    N. 34347

    Dissertao de Mestrado em Tecnologia de Alimentos

    Trabalho efetuado sob a orientao de:

    Doutora Florbela Soares

    Professor Doutor Eduardo Esteves

    Faro, 2015

  • Universidade do Algarve

    Instituto Superior de Engenharia

    Avaliao da contaminao microbiolgica

    e da resposta ao stress ambiental em moluscos

    bivalves da Ria Formosa

    Marina Lameirinhas Cabral

    N. 34347

    Dissertao de Mestrado em Tecnologia de Alimentos

    Trabalho efetuado sob a orientao de:

    Doutora Florbela Soares

    Professor Doutor Eduardo Esteves

    Faro, 2015

  • Avaliao da contaminao microbiolgica e da resposta ao stress ambiental em

    moluscos bivalves da Ria Formosa

    Declarao de autoria do trabalho

    Declaro ser a autora deste trabalho, que original e indito. Autores e trabalhos consultados

    esto devidamente citados no texto e constam da listagem de referncias includa.

    Copyright Marina Lameirinhas Cabral 2015

    A Universidade do Algarve tem o direito, perptuo e sem limites geogrficos, de arquivar e

    publicitar este trabalho atravs de exemplares impressos reproduzidos em papel ou de forma

    digital, ou por qualquer outro meio conhecido ou que venha a ser inventado, de o divulgar

    atravs de repositrios cientficos e de admitir a sua cpia e distribuio com objetivos

    educacionais ou de investigao, no comerciais, desde que seja dado crdito ao autor e

    editor.

    Marina Lameirinhas Cabral

  • Este trabalho foi publicado parcialmente nos seguintes formatos:

    Em painel, com o seguinte ttulo:

    Cabral*, M., Esteves, E. & Soares, F. (2014) Updating data on the seasonal changes in the

    microbiological quality of clams, Ruditapes decussatus, cultured in the Ria Formosa (South

    Portugal). International Meeting on Marine Resources 2014 (IMMR14) (Peniche), Escola

    Superior de Turismo e Tecnologia do Mar, Instituto Politcnico de Leiria, Portugal, 10-11 de

    julho. (Poster) Frontiers in Marine Science (93) Conference Abstract: IMMR | International

    Meeting on Marine Research 2014. doi:10.3389/conf.FMARS.2014.02.00093

    http://www.frontiersin.org/marine_science/10.3389/conf.FMARS.2014.02.00093/full

  • AGRADECIMENTOS

    com particular prazer que expresso o meu agradecimento a todos aqueles que

    acompanharam este trabalho e contriburam para a sua realizao.

    Agradeo Doutora Florbela Soares por me ter convidado a realizar este trabalho no IPMA e

    por me ter acompanhado e apoiado com interesse e motivao sua realizao, pela

    amabilidade, ensinamento, e encorajamento que sempre demonstrou ao longo destes 2 anos.

    Ao Professor Doutor Eduardo Esteves por ter aceitado orientar este trabalho e por me ter

    acompanhado e apoiado com motivao e interesse.

    Direo do IPMA Instituto Portugus do Mar e Atmosfera, por ter possibilitado a

    realizao da parte prtica deste mestrado no Laboratrio de Microbiologia, em Olho.

    Ao Doutor Pedro Pouso por ter possibilitado a realizao de anlises nos laboratrios da

    Estao de Piscicultura de Olho.

    Doutora Cristina Figueira um agradecimento por ter disponibilizado para a utilizao do

    laboratrio de Qumica do Instituto Superior de Engenharia.

    Doutora Laura Ribeiro pelo incentivo, interesse e disponibilidade para ajudar.

    Doutora Domitlia Matias pela disponibilizao do equipamento do laboratrio da

    (EMMT).

    A todos os que trabalham na Sede e na Estao de Aquacultura de Olho, e em especial Luz

    pela ajuda nas anlises microbiolgicas e ao Sr. Fernando pela ajuda na recolha das amostras

    e apresentao de dados no Sistema de Informao Geogrfica.

    Agradeo minha me Joaquina a ternura, a motivao e todo o apoio e incentivo que me deu

    ao longo destes ltimos anos, pois sem isso no seria quem sou hoje

    Ao Mrcio, muito obrigada pela amizade, apoio, motivao e por me ter ajudado

    A uma pessoa especial um muito obrigado pelo amor, apoio, motivao e incentivo.

    Um muito obrigado a todos os amigos pelo apoio e por terem estado comigo nos bons e

    principalmente nos maus momentos.

    O meu agradecimento final dedicado minha irm Llia, pelo carinho, pela pacincia, apoio,

    motivao e por estar sempre presente quando me vi nas situaes mais variadas.

    A todos, um sincero MUITO OBRIGADA!

  • RESUMO

    A Ria Formosa a regio mais importante para a produo de moluscos bivalves na costa sul

    de Portugal. Este estudo avalia a contaminao microbiolgica e caractersticas bioqumicas

    indicadoras de stress de moluscos bivalves (Ruditapes decussatus) provenientes de reas de

    produo de duas Zonas da Ria Formosa (uma rea mais povoada, Faro-Marchil (A), e uma

    rea menos povoada, Cacela-Vila Real de Santo Antnio (Cacela-VRSA) (B), que foram

    analisadas mensalmente, entre agosto de 2012 e julho de 2013. Os nveis de Escherichia coli,

    Vibrio spp. e bactrias marinhas totais foram analisados e relacionados com perfis de

    temperatura e precipitao. Os nveis mais elevados de E. coli foram encontrados em bivalves

    provenientes de Faro-Marchil, durante perodos de temperaturas mais elevadas (vero),

    devido, principalmente, ao aumento da populao durante o vero nessa rea. Embora os

    valores obtidos se encontrem dentro dos valores correspondentes ao estatuto sanitrio desta

    zona (Classe B). Os nveis mais elevados de E. coli em Cacela-VRSA foram observados

    especialmente durante o inverno, provavelmente devido a fontes difusas de descargas fecais.

    Para ambas as reas, os nveis mais altos de Vibrio spp. foram encontradas em fevereiro e

    maro de 2013; estes meses correspondem a um nvel mais elevado de bacterioplncton na

    Ria Formosa. Nveis mais baixos de Vibrio spp. foram encontrados em outubro de 2013 em

    ambas as reas de produo de bivalves. O ndice de peroxidao lipdica em amostras de

    amijoa-boa em Faro-Marchil e em Cacela-VRSA foram ligeiramente mais elevados nos

    meses de vero e de Outono. A anlise destes resultados pode ser particularmente til para o

    desenvolvimento de pesquisas sanitrias e avaliar os riscos sade humana associados ao

    consumo de bivalves, com a consequente melhoria da qualidade dos bivalves

    comercializados, resultar em agregao de valor ao produto final.

    Palavras- chave: E. coli, Vibrios, Ruditapes decussatus, Monitorizao microbiolgica,

    Sade Publica, Peroxidao lipdica

  • ABSTRACT

    Ria Formosa Lagoon is the most important region for bivalves production in the South

    Portuguese coast. This study evaluates the microbiological and biochemistry contamination of

    clams Ruditapes decussatus originating from two bivalves production areas of Ria Formosa (a

    more populated area, FaroMarchil, and a less populated area, CacelaVila Real de Santo

    Antnio (Cacela-VRSA)) that were analyzed monthly, between August 2012 and July 2013.

    The levels of Escherichia coli and Vibrio spp. were monitored and related with temperature

    profiles. The highest levels of E. coli were found in bivalves collected from the Faro-Marchil

    area during periods of higher temperatures (summer), mainly due to the population increase

    during the summer in that area. Notwithstanding the current classification (Class B) of this

    shellfish harvesting production area should not be changed. In Cacela-VRSA, higher levels of

    E. coli were observed especially during the winter, probably due to diffuse sources of faecal

    discharges. For both areas, the highest levels of Vibrio spp. were found in February and

    March 2013; these months correspond to a higher level of bacterioplankton in Ria Formosa.

    Lower levels of Vibrio spp. were found in October 2013 in both bivalve production areas. The

    lipid peroxidation index in clam-good samples in Faro-Marchil and Cacela-VRSA were

    slightly higher in the months of summer and autumn. The analysis of this information can be

    particularly useful in the development of sanitary surveys and evaluate the human health risks

    associated with bivalves consumption, thence improving the quality of marketed bivalves,

    result in adding value to the final product.

    Keywords: E. coli, Vibrios, Ruditapes decussatus, Microbiological Monitoring, Public

    Health, Lipid Peroxidation

  • ABREVIATURAS

    IPMA- Instituto Portugus do Mar e Atmosfera

    MMGB Minerals Modified Glutamate Medium

    LPO Peroxidao Lipdica

    NP- Norma Portuguesa

    TBX- Agar de Triptona Bils X- Glucorondeo

    TSA- Agar Triptona de Soja

    H2O - gua

    H2SO4 Sulfato de hidrognio (cido sulfrico)

    HCl - cido clordrico

    HNO3 - Nitrato de hidrognio (cido ntrico)

    K2CO3 - Carbonato de potssio

    KOH - Hidrxido de potssio

    CH3CN - Metanol

    NaCl - Cloreto de sdio

    OMS - Organizao Mundial de Sade (WHO World Health Organization)

    ZPB- Zona de produo de bivalves

    ETAR- Estao de tratamento de guas residuais

    NMP- Numero mais provvel

    UFC- Unidades formadoras de colnias

  • NDICE 1 INTRODUO ................................................................................................................. 1

    1.1 Caracterizao da espcie em estudo ............................................................................... 1

    1.1.1 Taxono