TÉCNICAS

DETERMINACIÓN DE CCONTENIDO DE FENOLES TOTALES.

El contenido de fenoles totales se determinó por el método de Folin-Ciocalteu método de Stintzing et al (2005).

Con el fin de expresar los resultados como equivalentes de ácido gálico se realizó una curva de calibración con este reactivo. La curva se generó a partir de una solución madre de 400 mg/100 ml, se realizaron concentración con un intervalo de 0-30 mg/ml (anexo 4), cabe mencionar que la lectura del presente análisis se llevó a cabo en un espectrofotómetro marca Thermo Fisher Scientific modelo G1OS UV-Vis.

Se colocaron 100 µL de muestra centrifugada en viales de eppendorf, se les agregaron 500 µL de solución Folin-Ciocalteu y 400 µL de solución de carbonato de sodio al 7.5%, en seguida, las muestras se agitaron en un vortex marca Scientific Industries por un minuto y fueron incubados a temperatura ambiente (26 ± 2 °C) durante 30 minutos.

Trascurrido este tiempo, se midió la absorbancia a una longitud de onda de 765 nm la cual refleja la cantidad total de polifenoles.

La concentración total de fenoles presente en las diferentes muestras se calculó con la ecuación de la recta obtenida de la curva de calibración de ácido gálico ya elaborada.

Y= 0.0338x – 0.0038

ACTIVIDAD INHIBIDORA DEL RADICAL LIBRE 2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZILO (DPPH).

El radical DPPH es uno de los pocos radicales orgánicos nitrogenados estable y además comercialmente disponible. Presenta un color violeta intenso, que disminuye en presencia en un antioxidante u otro radical. De esta manera la capacidad antioxidante que tienen las muestras se cuantifica midiendo el grado de decoloración que estas provocan en una solución etanólica de DPPH.

El reactivo DPPH es un radical libre estable, que en solución etanólica su máxima absorbancia se obtiene a una longitud de onda de 520 nm.

La actividad antirradical con base en el DPPH se evaluó de acuerdo al procedimiento reportado por Morales y Jiménez-Pérez (2001). La actividad antioxidante se expresó en µmol equivalente de Trolox/L. El trolox (Carboxilico 6-hidroxi-2,5,8-tetrametilcromo) es una molécula que presenta una fuerte actividad antirradical.

La técnica consistió en preparar una solución de DPPH a una concentración de 7.4 mg/100 ml en etanol, se agitó durante 10 minutos.

Posteriormente se colocaron en viales de eppendorf 100 µL de la muestra, se agregó también 500 µL de la solución DPPH y se llevó a agitación en vortex por 1 minuto. Se dejó reposar a temperatura ambiente (26 ± 2 °C) durante 1 hr, transcurrido este tiempo, si existía turbidez en las muestras los viales se centrifugaban a 3000 rpm por 10 min. Se leyó absorbancia del sobrenadante a una longitud de onda de 520 nm.

Con el fin de expresar los resultados como equivalentes de Trolox se realizó una curva estándar con este reactivo solubilizado en etanol. La curva de calibración se generó en un intervalo de concentración de 0 a 400 µmol Trolox/L (anexo ).

La concentración final del radical libre DPPH se calculó con la ecuación de la recta obtenida de la curva de calibración de trolox solubilizado en etanol.

Y= -0.0041x + 1.5456

Cabe mencionar que las marcas de los reactivos utilizados fueron Aldrich, Meyer y Analytyka.

ANEXO

CURVA DE CALIBRACIÓN DE TROLOX

ANEXO

CURVA DE CALIBRACIÓN DE ÁCIDO GÁLICO

ESTAS SON ALGUNAS BIBLIOGRAFÍAS QUE TE PUEDEN SERVIR A LA HORA DE DISCUTIR

Barahona, C. V. C. (2013). Evaluación de la actividad antioxidante y valor nutracéutico de las hojas y frutos de la guanábana (annona muricata). Tesis. Escuela Superior Politécnica de Chimborazo. Riobamba, Ecuador.

Floegel A, Kimb D, Chung S, Koo SI, Chun OK. (2011). Comparison of ABTS/DPPH assays to measure antioxidant capacity in popular antioxidant-rich US foods.

ICBF, Instituto Colombiano de Bienestar Familiar. (2005). Tabla de Composición de Alimentos.

Karadag A, Ozcelik B, Saner S. (2009), Review of methods to determine antioxidant capacities. Food Anal Methods 2: 41 – 60.

Kuskoski EM, Asuero AG, Troncoso AM, Mancini- Filho J, Fett R. (2005). Aplicación de diversos métodos químicos para determinar actividad antioxidante en pulpa de frutos.

Repo De Carrasco R., Encina Z. C. R. (2008). Determinación de la capacidad antioxidante y compuestos bioactivos de frutas nativas peruanas. Rev. Soc. Quím. v.74 n.2. 108-124.