Disciplina: tcnicas e analises bromatolgicas

UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA UDESC

CENTRO DE CINCIAS AGROVETERINRIAS CAV

DEPARTAMENTO DE PRODUO ANIMAL E ALIMENTOSTCNICAS DE ANLISES BROMATOLGICAS

Professores: Henrique M. N. Ribeiro Filho

Cristiane Pellizzaro Batalha

LAGES, AGOSTO DE 2014CONTEDO PROGRAMTICO

1. Introduo disciplina, apresentao do laboratrio e equipamentos utilizados.

2. Classificao dos alimentos.

3. Uso do moinho tipo Willey para moagem de alimentos4. Amostragem, preparo e conservao dos alimentos para anlise laboratorial.

6. Mtodo de Weende para avaliao dos alimentos.

6.1 Determinao da matria seca (MS) dos alimentos (secagem em estufa).

6.2 Determinao da matria orgnica (MO) e matria mineral (MM).

6.3 Determinao do extrato etreo (EE) ou gordura bruta (GB).

6.4 Determinao da fibra bruta (FB).

6.5 Determinao do N-total e clculo da protena bruta (PB).

6.6 Clculo dos extrativos no nitrogenados (ENN).

7. Mtodo de Van Soest para determinao da fibra.

7.1 Determinao da fibra em detergente neutro (FDN).

7.2 Determinao da fibra em detergente cido (FDA).

7.3 Determinao da lignina.

8. Anlises complementares: Determinao do teor de nitrognio insolvel em detergente neutro (NIDN) e nitrognio insolvel em detergente cido (NIDA).

9. Anlises fsico-qumicas do mel.

10. Anlises fsico-qumicas do leite.

COLETA DE AMOSTRA

Sempre que fizer uma coleta de amostras de um ou mais alimentos com o objetivo de realizar anlises totais ou parciais, que sejam as mais representativas possveis do local onde foram coletadas.

Devido s variaes existentes entre os diversos tipos de amostragem, o mtodo usado para coletar amostras para anlise qumica poder afetar em maior ou menor grau os resultados obtidos.

A. Como coletar alguns dos principais tipos de alimentos:

1. O mtodo de coleta depende do propsito para o qual a amostra coletada.

1.1 Se a coleta for da parte area, de plantas no campo:

Selecione ao acaso, no mnimo dez pontos, dependendo do tamanho do campo, cortam-se as partes nos pontos selecionados. Se possvel guardar em saco plstico. Se as plantas forem grandes, ou em grande quantidade de material, as mesmas devem ser cortadas com mquina de cortar forragem para se obter uma amostra representativa da mesma.

1.2 Se a coleta for de material que o animal est consumindo:

Usar a tcnica da fstula esofgica, da evacuao do rmen ou da gaiola metablica.

Fstula esofgica faz-se uma abertura no esfago, sendo que na parte externa h um reservatrio para a coleta do alimento ingerido pelo animal.

Evacuao do rmen faz-se uma abertura no rmen e coleta-se o material para anlise.

Gaiola metablica uma gaiola na qual o animal fica praticamente imvel, faz-se uma pr-adaptao do mesmo no novo ambiente; aps coleta-se amostras de fezes e urina para anlise e verifica-se a digestibilidade e o ganho pelo alimento ingerido.

1.3 Coleta direta no campo onde o animal se encontra:

Faz-se observao direta do animal em pastejo e ento coleta-se amostras do material onde o animal est pastando, de modo que represente a dieta do animal. Estas amostras coletadas nos pontos selecionados devem ser bem misturadas, aps retira-se uma amostra representativa da mesma.

1.4 Quando a amostra retirada diretamente do silo:

Escolhe-se o meio do silo, retira-se uma amostra de mais ou menos 30 a 40 cm de espessura de cima para baixo por mais ou menos 5 a 10 cm de profundidade. Guarda-se em saco plstico e leva-se ao laboratrio, se a amostra no for analisada no mesmo dia, guarde-a no freezer.

2. Silagem

Se a coleta for do material que o animal est consumindo, tomam-se amostras ao acaso do que se est dando ao animal. Se a coleta for do material ensilado (no prprio silo), a obteno de uma mdia perfeita muito difcil, pois as camadas superiores e laterais diferem das centrais e inferiores. O correto coletar as amostras que esto sendo dadas diretamente ao animal.

3. Fenos e Palhas

3.1 Em fardos: retira-se a amostra atravs de um coletor (pennstate forage sampler). Introduz este aparelho nos fardos e retira-se a amostra dependendo do lote a ser analisado. Se o lote for de 10 fardos, retira-se amostra de todos, se for superior a 10 coleta-se aleatoriamente o nmero de 10 amostras.

3.2 Sem coletor: retira-se uma fatia do feno com cerca de 7 a 13 cm, procedimento idem ao 3.1.

3.3 Em medas: com coletor de forragens, idem ao 3.1.

3.4 Sem coletor de forragem: coleta manual em vrios pontos do depsito, representando todas as camadas. Mistura-se bem todas as amostras para se ter uma nica bem representativa.

3.5 Coleta em fenos no enfardados: deve-se ter o cuidado para que a amostra seja representativa, pois nos depsitos e em medas ocorre um desprendimento de folhas das plantas, tendo como conseqncia uma discrepncia do valor nutritivo das camadas superiores e inferiores.

4. Razes, tubrculos e frutos carnosos.

Coleta-se amostras em diferentes partes do campo ou depsito. Devido ao teor de umidade que as mesmas apresentam, recomenda-se uma amostra final de 3 a 6 kg. Se a amostra no for levada imediatamente ao laboratrio, guarda-se a mesma em uma caixa de isopor com gelo hermeticamente fechada.

5. Gros e raes

5.1 Ensacados: retira-se uma amostra da parte central do mesmo, se o lote a ser ensilado for de 10 sacos, coleta-se todos, se for superior a este, coleta-se em pontos aleatrios o nmero de 10 amostras. O peso da amostra a ser analisada dever ser de um quilo.

5.2 Granel: no mnimo 20 perfuraes em diferentes partes. Mistura-se todas as amostras e retira-se uma amostra representativa da mesma. O peso da amostra dever ser de um quilo. Se a quantidade no granel for pequena, coleta-se uma amostra de cinco quilos para ser mais representativa.

6. Leite, fezes e urina.

Leite: quantidade da amostra 100 ml deve ser guardada a temperatura de 1 at ser analisada.

Fezes: 500 g da amostra coloca-se em recipiente de vidro ou plstico, deixar dentro do freezer at ser analisada.

Urina: 100 ml da amostra, coloca-se em recipiente de vidro ou plstico, adiciona-se 5 ml de tolueno para evitar evaporao da mesma e 2 ml de H2SO4 para evitar perdas de nitrognio, guarda-se no freezer.

7. Outros lquidos: tira-se uma amostra representativa dos mesmos e guarda-se no freezer, uma quantidade de 100 a 150 ml.

B. Preparo de amostra para anlise

Deve ser executado com a mxima ateno em todos os detalhes. O problema principal retardar as variaes de composio das amostras, essas podem ser:

-Perdas devido transpirao

-Decomposio pelo calor

Obs: Evitar a contaminao no campo e em laboratrio. Na moagem evitar contaminao pelo moinho, o mesmo deve estar limpo durante a moagem das amostras.

O processo a ser usado no preparo de amostras depende da afinidade da amostra e da natureza dos constituintes a serem medidos. Algumas amostras so analisadas midas, como a silagem, na qual determina-se o pH e a umidade por tolueno; outras so realizadas com amostras previamente secas, por exemplo: raes, cereais, gramneas, etc...

Amostra de fezes: descongelar sem a mesma permanecer por muito tempo na temperatura ambiente. Realizam-se anlises com amostra fresca e com a amostra previamente seca a estufa a 60 oC sob circulao de ar.

Amostra de urina: descongelar a amostra sem a mesma permanecer muito tempo sob a temperatura ambiente. Misturar uniformemente a amostra, retira-se uma alquota de 20ml e determina-se o nitrognio, o restante da amostra guarda-se novamente no freezer, at que a anlise esteja completa.

Amostra de silagem: descongelar a amostra de silagem como no caso das fezes. Retirar uma amostra de 200g, triturar e a seguir, usar esse material fresco para determinao de umidade e pH. Deve-se secar uma segunda amostra de silagem para usar na anlise de seus componentes.

Secagem de amostra: utiliza-se estufa sob circulao de ar, temperatura de 60oC.

Moagem de amostras:

Amostras secas: utiliza-se o moinho como se fez em aula prtica. Amostras midas: as amostras que devem ser analisadas frescas (sem prvia secagem) devem ser pesadas em partculas de um centmetro.

Estocagem de amostras:

Amostras secas: devem ser estocadas em frascos de vidro ou de polietileno previamente rotuladas.

Amostras midas: devem ser colocadas dentro de sacos plsticos e rotuladas, guarda-se este material no freezer at a realizao de suas anlises.

Determinao da Matria Seca (MS) e Umidade

Princpio:

A umidade da amostra removida por evaporao causada pelo calor. A quantidade de material residual aps a remoo da gua a matria seca.

Consideraes gerais:

A determinao da matria seca (MS) o ponto inicial da anlise de alimentos. Sua determinao tem importncia para a comparao dos valores nutritivos de diferentes alimentos, atravs do conhecimento da maior ou menor diluio dos nutrientes. Alm disso, serve para diferenciar o custo do(s) principal(is) nutriente(s), com implicao no valor real do frete. O teor de MS tem importncia, tambm, na conservao dos alimentos, visto que esta depende do teor de umidade.Amostras de alimentos com mais de 85% de MS podem ser modas e submetidas diretamente determinao do teor de MS total. Amostras com 85% ou menos de MS necessitam ser submetidas a uma pr-secagem, em estufa com circulao forada de ar temperatura de 55-60C ou utilizando outro dispositivo secante, por exemplo, um forno microondas. Esse processo visa facilitar o trabalho nos moinhos, melhor homogeneizar as amostras e permitir seu armazenamento. Aps a realizao da pr-secagem determinado o teor de MS a 105oC e calculado o teor de MS total.

Procedimento para determinao do teor de MS a 105oC - Secar os cadinhos em estufa a 105oC por uma noite.

- Retirar da estufa e colocar em dessecador para esfriar (evitar ao mximo a abertura do dessecador).

- Retirar do dessecador o cadinho e pesar ( T ) usando a balana analtica.

- Adicionar aproximadamente 2,000g da amostra moda ( P1 ) no cadinho.

- Secar na estufa a 105 oC por uma noite ou at obter um peso constante.

- Colocar no dessecador para esfriar o material antes da pesagem.

- Pesar a amostra seca (P2).

Clculo:

% MS = P2 T x 100

P1 T

T = tara do cadinho

P1= peso do cadinho + amostra mida

P2= peso do cadinho + amostra seca

No do cadinhoTara ( T )P1P2 Peso da amostra mida (P1 - T )Peso da amostra seca ( P2 T )% MS% gua

No caso de amostras cuja pr-secagem desnecessria a MS a 105oC igual a MS total da amostra. Contudo, nas amostras que necessitam ser submetidas a pr-secagem a MS total deve ser calculada por:

MS total = MS 60oC x MS 105oC / 100Determinao da Matria Orgnica e Cinzas (Matria Mineral)Princpio:

Cinza o nome dado ao resduo obtido por aquecimento a 550-600oC. O teor de matria orgnica (MO) calculado pela diferena do peso seco e o peso da matria mineral, considerando que o peso perdido corresponde a MO incinerada.

Consideraes gerais:

A determinao do teor de cinzas fornece uma indicao da riqueza da amostra em elementos minerais, mas no quantifica esses elementos individualmente. De qualquer forma, sua determinao importante porque permite o clculo de outras fraes do alimento (por exemplo, dos extrativos no nitrogenados como ser visto mais adiante), bem como, a quantificao do teor de MO. O conhecimento do teor de MO dos alimentos fundamental para a determinao do seu valor energtico. Atravs da determinao da matria mineral pode-se, ainda, detectar fraudes como a adio de areia na amostra.

Do ponto de vista metodolgico, deve-se ter ateno com o tempo e a temperatura de incinerao. Caso o procedimento seja realizado a temperaturas superiores a 600oC pode ocorrer uma reduo de ons como Cl, I, Zn, entre outros, e, assim, diminuir o peso final dos minerais.Procedimento:

Utilizar o material que se determinou a umidade;

Colocar o cadinho de porcelana com a amostra seca na mufla a 550-600o por 3 h;

Esfriar em dessecador, no mnimo por 1h;

Pesar as cinzas em balana analtica.

Clculo:

% MM = peso das cinzas x 100 %MO = 100 - % MM

peso da amostra seca

N

cadinhoPeso do cadinhoPeso da amostra secaPeso das cinzas% cinzas

(% MM)% MO

Determinao do Extrato Etreo (EE) ou Gordura Bruta (GB)

Princpio:

Gorduras leos pigmentos e outras substncias lipdicas so extradas da amostra pela ao de um solvente orgnico. O solvente orgnico mais utilizado o ter etlico.O ter aquecido, volatilizado e, aps condensar-se, passa pela amostra e arrasta as fraes solveis nele. O processo sucessivamente repetido at no restarem mais fraes extraveis na amostra. Na seqncia, o ter destilado e coletado em outro recipiente. A gordura extrada calculada por diferena de pesagem do balo coletor.

Consideraes gerais:

Os lipdeos (compostos solveis em ter) mais importantes do ponto de vista energtico e dos montantes presentes nos alimentos e nos tecidos dos animais so as gorduras. A gordura constitui a frao mais energtica do alimento, sendo 2,25 vezes mais energtica que protenas e carboidratos. Alm disto, as gorduras so fontes de cidos graxos essenciais (cido Linoleico e cido araquidnico), e vitaminas lipossolveis (A, D, E e K).

Sua determinao serve principalmente para balancear as dietas dos animais e, tambm tem importncia para o armazenamento dos alimentos por se constituir de uma frao instvel.

Erro: Este mtodo apresenta o problema do solvente extrair tanto os lipdios nutritivos (cidos graxos, triglicerdeos, galactolipdeos, fosfolipdeos, colesterol, ergosterol, carotenides, etc), quanto substncias no nutritivas (clorofila e outros pigmentos, resinas, ceras, leos volteis, alcalides e carotenides).

Procedimento:

-Colocar com antecedncia os bales de Soxhlet (limpos) em estufa a 105oC por 24 h ou por uma noite;

-Esfriar o balo e em dessecador por aproximadamente 1 h;

-Pesar o balo;

-Pesar o papel filtro;

-Pesar aproximadamente 1,00 g da amostra em papel filtro;

-Colocar o solvente orgnico (ter, hexano ou benzeno) nos bales;

-Colocar o papel filtro com amostra devidamente dobrado no extrator;

-Conectar o balo ao extrator e estes ao condensador;

-Ligar as placas e abrir a torneira do condensador.

Obs: ajustar a temperatura de tal modo que a velocidade de gotejamento seja de 3-4 gotas por segundo

-Contar o tempo a partir do primeiro refluxo, deixando-o por 4 h.

-Aps o perodo de extrao, o solvente deve ser recuperado para posterior aproveitamento.

-O balo com gordura extrada colocado na estufa a 105oC por 2 h (se no for possvel realizar a secagem nesse perodo o balo dever ser guardado em local limpo e tampado com papel alumnio);

-Esfriar o balo em dessecador por 1 h e pesar.

Clculo:

% GB ou % EE = peso da gordura x 100

peso da amostra seca

Peso da gordura = (peso do balo + gordura) (peso do balo)

Determinao da Fibra Bruta (FB)

Princpio:

Queima do resduo que resistiu a digesto cida e alcalina subseqentes, sob condies controladas.

Consideraes gerais:

Sob o termo fibra encontram-se as fraes de celulose, hemicelulose e lignina insolvel, que resistem a tratamentos sucessivos com cidos e bases (simulao da digesto animal em no ruminantes). Contudo, ao se utilizar esta metodologia uma frao significativa da celulose e da lignina so solubilizadas, subestimando o valor final.

Procedimento:

- Colocar todo resduo da amostra que sofreu a extrao de gordura (pacotinho) em um bquer apropriado;

- Adicionar um pouco de asbestos ou amianto previamente lavado e incinerado;

- Adicionar 200 ml de cido sulfrico a 1,25% fervente e levar ao aparelho determinador de fibra;

- Deixar por 30 min em fervura;

- Retirar do aparelho e filtrar com Filter Screen que deve estar conectado ao kitazato com bomba de vcuo;

- Lavar com gua destilada quente (4 vezes de 50 ml), filtrando sempre com Filter Screen;

- Finalmente, desligar a bomba de vcuo e lavar bem o filtro com hidrxido de sdio 1,25% fervente, completando o volume at 200 ml;

- Ferver por mais 30 min;

- Filtrar, desta vez em um cadinho de vidro sinterizado, conectando-o a bomba de vcuo;

- Limpar bem o bquer com gua quente (3vezes de 50 ml), derramando o contedo no cadinho para que sejam aproveitadas todas as partculas;

- Lavar com 15ml de etanol e depois lavar com 15 ml de acetona, deixar filtrar e levar a estufa por uma noite ou 24 h;

- Esfriar no dessecador e pesar;

- Colocar na mufla a 550oC por 3 h,

- Esfriar no dessecador e pesar.

Clculo:

% FB = peso da fibra bruta x 100

peso da amostra seca

Peso da fibra = (peso do cadinho aps secagem) (peso do cadinho aps a queima)

Determinao do teor em Parede Celular (Fibra Insolvel em Detergente Neutro FDN)

Princpio:

Consiste na determinao da fibra dos alimentos submetidos a digestes em detergente neutro, que solubiliza o contedo celular e permite que os componentes da parede celular fiquem insolveis, exceto a pectina.

Consideraes gerais:

O termo fibra compreende as fraes de celulose, hemicelulose e lignina, os quais so digeridos apenas por enzimas produzidas por microrganismos presentes no rmen e/ou no intestino grosso dos animais domsticos.Na sua determinao por meio de digesto em detergente neutro essas fraes permanecem intactas, sendo assim, o melhor mtodo para se determinar a qualidade de uma forragem. Destaque-se que, o teor de FDN negativamente correlacionado com o consumo voluntrio de forragem, e este, por sua vez, a principal varivel que determina o desempenho zootcnico dos animais.

Soluo em detergente neutro (SDN)

18,60g de EDTA (etilenodiaminotetracetato dissdico)

6,81g de borato de sdio decahidratado

Colocar em um bquer com aproximadamente 400mL de gua destilada e aquecer at que se dissolvam (soluo 1)

30,0g de lauril sulfato de sdio

10mL de etilenoglicol

Dissolver em gua destilada (soluo 2)

4,56g de fosfato cido de sdio anidro

Dissolver em gua por aquecimento (soluo 3).

Misturar seqencialmente a soluo 1, 2 e 3. A quantidade total de gua destilada utilizada para as trs solues deve ser 1 litro.

A soluo detergente neutro deve ter pH entre 6,9 e 7,1.

Equipamento de uso comum: conjunto bomba de vcuo com kitazato e cadinhos de vidro sinterizado.

Procedimento 1 (utilizando placas de aquecimento com condensador para bquer de 600 mL forma alta)1. Retirar os cadinhos de vidro sinterizado da estufa, esperar esfriar e pesar.

2. Pesar 1,0g da amostra seca ao ar triturada em moinho e colocar em copo de bquer (600 ml) do aparelho digestor (o mesmo da fibra bruta)

3. Adicionar em ordem:

100mL de soluo detergente neutro

2mL de decahidronaftaleno

4. Aquecer ebulio por 1 h no digestor com condensador.

5. Filtrar em cadinho de vidro, previamente pesado, por suco a vcuo. Tenha o cuidado de transferir todo o contedo do bquer usando gua quente;

6. Lavar o filtrado tomando-se o cuidado de fechar o vcuo cada vez que a gua quente for adicionada.

7. Esperar esfriar e lavar o filtrado duas vezes com acetona, interrompendo o vcuo cada vez que a acetona for adicionada ao filtrado e religando-o em seguida.

8. Levar os cadinhos para estufa a 105oC por no mnimo 12h. Esfriar os cadinhos em dessecador e pesar.

Procedimento 2 (utilizando Extrator Velp Fiwe, EVF)

1. Retirar os cadinhos de vidro sinterizado da estufa, esperar esfriar e pesar.

2. Pesar diretamente no interior do cadinho 1 (um) grama ( 50mg) de amostra seca ao ar

3. Ligar a gua do EVF

4. Colocar uma quantidade de gua destilada para ferver (250ml/amostra)

5. Ligar o EVF

6. Colocar os cadinhos previamente tarados no EVF necessita de acompanhamento;

7. Colocar 10mL de SDN

8. Ajustar potncia de aquecimento

9. Quando em ebulio, comear a contagem de tempo de 1 hora

10. Observar os cadinhos quanto formao de depsitos de fibras em pontos localizados, se necessrio, use o sistema de presso necessita de acompanhamento;

11. Terminada a contagem de tempo, colocar a potncia de aquecimento a zero. Utilizar o sistema de vcuo para drenar o resduo da digesto - Necessita de acompanhamento;

12. Lavar as amostras com gua fervente por duas vezes as colunas devem ficar perfeitamente limpas Necessita de acompanhamento. Utilizar o sistema de vcuo para drenar o resduo;

13. Desligar EVF;

14. Desligar gua do EVF;

15. Remover os cadinhos do EVF Necessita acompanhamento;

16. Esfriar;

17. Lavar com acetona o kitazato;

16. Levar os cadinhos para estufa a 105oC por no mnimo 12h. Esfriar os cadinhos em dessecador e pesar.

Clculo:

% fibra em detergente neutro (FDN) = (tara do cadinho + FDN) (tara do cadinho) x 100

peso da amostra seca

Procedimento 3 (utilizando saquinhos de polister e condensador para bquer de 600 ml forma alta)1. Retirar os saquinhos de polister da estufa, esperar esfriar e pesar.

2. Pesar 0,3 g da amostra seca ao ar triturada em moinho3. Selar o saquinho e colocar em copo de bquer (600 ml) do aparelho digestor (fibra bruta). Coloque no mximo seis saquinhos por bquer.

4. Adicionar em ordem:

100 ml de soluo detergente neutro / cada grupo de trs saquinhos 2 ml de decahidronaftaleno

4. Aquecer a ebulio por 1 h no digestor com condensador.

5. Lavar os saquinhos no mnimo trs vezes com gua quente e uma vez com acetona.

6. Levar os saquinhos para estufa a 105oC por no mnimo 12 h. Esfriar os saquinhos em dessecador e pesar.

Clculo:

% Fibra em detergente neutro (FDN) = (saquinho + FDN) (tara do saquinho) x 100

peso da amostra seca

Determinao do teor em Fibra Insolvel em Detergente cido (FDA)

Princpio:

A determinao do teor em FDA segue basicamente os mesmos princpios da determinao do teor em FDN. A diferena que a soluo detergente neutra substituda por uma soluo detergente cida.

Consideraes gerais:

O termo FDA compreende as fraes de celulose, lignina e slica. Na sua determinao, por meio de digesto em detergente cido estas fraes permanecem intactas. O teor de FDA negativamente correlacionado com a digestibilidade das forragens.

Soluo detergente cida

cido sulfrico 1N... 28,5 mlCetil trimetil amnio brometo.................................20,0 g

Para preparar a soluo adicionar a quantidade de cido especificada em 1 litro de gua destilada, agitar e em seguida adicionar o CTAB.

Agitar vigorosamente e deixar em repouso para que os reagentes se dissolvam totalmente.

Procedimento 1 (utilizando placas de aquecimento com condensador para bquer de 600 mL forma alta)1. Pesar 1g da amostra seca ao ar, triturada em moinho

2. Colocar em copo bquer (600 ml) do aparelho digestor (fibra bruta)

3. Adicionar em ordem:

-100 ml de soluo detergente cida

-2 ml de decahidronaftaleno (anti-espumante)

4. Aquecer a ebulio por 1 hora no digestor com condensador;

5. Filtrar em cadinho de Gooch ou filtrante de vidro, previamente pesado, por suco a vcuo. Tenha o cuidado de transferir todo contedo do bquer usando gua quente;

6. Lavar o filtrado com gua quente, duas vezes no mnimo, tomando-se o cuidado de fechar o vcuo cada vez que a gua for adicionada;

7. Lavar o filtrado duas vezes com acetona, interrompendo o vcuo cada vez que a acetona for adicionada ao filtrado e religando-o em seguinda.

8. Levar o cadinho para estufa a 105C por, no mnimo 2 horas. Esfriar os cadinhos em dessecador e pesar.

Clculo:

% Fibra em detergente cido (FDA) = (cadinho + FDA) tara do cadinho x 100

peso da amostra seca

Procedimento 2 (utilizando saquinhos de polister e condensador para bquer de 600 ml forma alta)1. Retirar os saquinhos de polister da estufa, esperar esfriar e pesar.

2. Pesar 0,3 g da amostra seca ao ar triturada em moinho

3. Selar o saquinho e colocar em copo de bquer (600 ml) do aparelho digestor (fibra bruta). Coloque no mximo seis saquinhos por bquer.

4. Adicionar em ordem:

100 ml de soluo detergente cida / cada grupo de trs saquinhos

2 ml de decahidronaftaleno

4. Aquecer a ebulio por 1 h no digestor com condensador.

5. Lavar os saquinhos no mnimo trs vezes com gua quente e uma vez com acetona.

6. Levar os saquinhos para estufa a 105oC por no mnimo 12 h. Esfriar os saquinhos em dessecador e pesar.

Observao: A anlise pode ser realizada sequencialmente, ou seja, utilizando os saquinhos previamente submetidos a ao da soluo detergente cida. Nesse caso, os itens 1,2 e 3 do procedimento acima so desnecessrios. Clculo:

% Fibra em detergente cido (FDA) = (saquinho + FDA) (tara do saquinho) x 100

peso da amostra seca

Determinao do teor de Lignina - utilizando cido sulfrico 72%Princpio

A soluo de cido sulfrico 72% solubiliza a celulose do FDA, restando lignina (matria orgnica) e slica (matria mineral). O resduo insolvel em cido sulfrico 72% incinerado, permitindo assim o clculo do teor de lignina na amostra. Consideraes

O termo lignina utilizado para designar um grupo de substncias com unidades qumicas semelhantes. A estrutura qumica da lignina ainda no est exatamente definida. Sabe-se, contudo, que esses compostos tm uma digestibilidade muito baixa e esto intimamente associados a carboidratos da parede celular, principalmente com a celulose. A associao da lignina com a celulose impe uma barreira fsica ao ataque da flora microbiana, diminuindo a digestibilidade das forragens. Procedimento 1 (usando saquinhos de polister)1. Coloque os saquinhos com FDA em uma bandeja de vidro. Umedea-os levemente com gua destilada, utilizando um picete. 2. Cubra os saquinhos com uma soluo de cido sulfrico 72% e mantenha-os mergulhados por trs horas nessa soluo.

3. Retire os saquinhos da soluo cida. Escorra o excesso de soluo cida e lave com gua destilada quente at no haver mais reao. Os saquinhos devem ficar livres de cido.

4. Leve os saquinhos para estufa a 105C em uma bandeja e deixe por no mnimo 12 horas. Esfrie os saquinhos em dessecador e pese.

5. Coloque os saquinhos em cadinhos de porcelana limpos e previamente tarados. 6. Leve os cadinhos de porcelana mufla a 550C por trs horas. Depois de desligar a mufla espere a temperatura baixar a pelo menos 200C. Retire os cadinhos e espere esfriar em dessecador.

7. Pese o cadinho + cinzas.

% Lignina = (saco + resduo H2SO4 72%) (tara saco) (peso das cinzas) x 100

peso amostra seca

Peso das cinzas = (cadinho + cinzas) tara do cadinho

Importante: O valor de cinzas pode ser utilizado para corrigir os valores de FDN e FDA. recomendado que nos resultados dos teores de FDN e FDA seja indicado se o valor foi ou no corrigido para cinzas.Procedimento 2 (usando cadinhos com fundo filtrante):

1. Coloque o cadinho contendo FDA em uma bandeja esmaltada de vidro.

2. Umedecer a amostra com gua destilada e colocar um pouco de soluo de cido sulfrico 72%.

3. Com uso de basto de vidro, homogeneizar a mistura at que se torne uma massa pastosa. Distribu-la no fundo do cadinho.

4. Adicionar a soluo de cido sulfrico 72% at cobrir a amostra, deixando que esta passe lentamente pela amostra por 3 h. Durante as trs horas tenha o cuidado que a amostra no fique descoberta de cido sulfrico.

5. Aps 3 horas, filtrar o excedente de cido em bomba de vcuo e lavar com gua quente at que no haja mais reao cida.

6. Lavar o filtrado duas vezes com acetona, interrompendo o vcuo toda vez que esta for adicionada, religando-o em seguida.

7. Levar os cadinhos para a estufa a 105C por no mnimo 12 horas. Esfriar os cadinhos em dessecador e pesar.

8. Incinerar o resduo dos cadinhos por 3 horas (550). Esfriar em dessecador e pesar.

Clculo:

% Lignina = (cadinho + resduo seco aps H2SO4 72%) ( cadinho + cinzas) x 100

peso da amostra seca

Determinao do Nitrognio Total e da Protena Bruta (PB)

Princpio:

Determinao de N pelo mtodo de Kjeldahl. Este mtodo consiste em trs etapas: (1) digesto em cido sulfrico com catalisador, (2) destilao da amnia em soluo receptora, e (3) titulao com soluo padro.

Consideraes gerais:

O mtodo de Kjeldahl foi descrito inicialmente h mais de um sculo. Desde ento tem sofrido modificaes, mas ainda a metodologia mais amplamente utilizada para amostras de origem biolgica.

O termo protena bruta envolve um grande grupo de substncias com estruturas semelhantes, porm com funes fisiolgicas distintas. As protenas apresentam porcentagens de N quase constantes, em torno de 16%, com base nisto se determina a quantidade de N na amostra e se estima o valor protico. Esta estimativa resulta em dois erros: o valor 16% de N um valor mdio, podendo no ser exato e parte do N determinado no necessariamente de origem protica.

Digesto

Procedimento:

1. Ligar o bloco de digesto para pr-aquecimento

2. Pesar 0,3 g de amostra seca ao ar e transferir para tubo de digesto

2. Adicionar ao tubo 0,5 g de mistura catalisadora (10 partes de sulfato de potssio ou sdio e 1 parte de CuSO4)

3. Adicionar 5 ml de H2SO4 pelas paredes do tubo

4. Levar os tubos ao bloco de digesto, ligar o exaustor e o bloco. A temperatura do bloco dever aumentar gradativamente at 390C. A digesto estar completa num perodo de 22,5 horas, quando a amostra estiver completamente clara. Ao final da digesto, desligar o bloco, esperar esfriar e adicionar gua destilada. A gua destilada deve ser adicionada lentamente, pelas paredes do tubo, at completar 20 ml. Agitar o tubo para dissolver o sal formado. Nesse momento o processo pode ser interrompido

5. Sempre feito um teste branco, em um tubo que recebe todos os reagentes menos a amostra.

Consideraes:

A mistura catalisadora tem o objetivo de elevar o ponto de ebulio do cido sulfrico de 180C para 400C, permitindo acelerar a digesto e conferir maior poder de oxidao ao oxignio da amostra. Isso permitido porque, durante a digesto, o carbono contido na amostra oxidado formando CO2 que se desprende. No final da digesto o material fica completamente claro aps ter passado por uma fase inicial bastante escura.

O nitrognio da amostra (tanto protico como no protico) transformado em amnia (NH3). A amnia reage com o H2SO4 formando (NH4)2SO4.

Matria orgnica + H2SO4 CO2 + (NH4)2SO4Destilao

Procedimento:

Em nosso laboratrio realizada em uma unidade de destilao automtica (Velp, UDK 140) conforme procedimento descrito em anexo.

Consideraes:

Durante a destilao o sulfato de amnio tratado com uma soluo de hidrxido de sdio 40%, em excesso, ocorrendo a liberao de amnia, conforme a reao:

(NH4)2SO4 + 2NaOH 2NH4OH + Na2 SO4NH4OH NH3 + H2OA amnia desprendida ento recebida em uma soluo de cido brico

NH3 + H3BO3 NH4H2BO3 Titulao

Procedimento:

a ltima fase. O NH4H2BO3 titulado com HCl 0,1 com fator conhecido, at a viragem do indicador.

NH4+ + H2BO3 + HCl H3BO3 + NH4Cl

Clculo

% N = [(V Vbr) x N x Fc x 0,014 / peso da amostra] x 100

% PB = % N x 6,25

UDK140

Unidade de destilao automtica em corrente de vapor

Manual resumido PedRotina de iniciao

1. Ligar a gua de resfriamento do destilador

2. Ligar equipamento

3. Aguardar aquecimento da caldeira.

Rotina de operao

1. Colocar o tubo no equipamento. Fechar a porta de acrlico

2. Colocar o erlenmeyer na sada do destilador

3. Pressionar a tecla Start

4. Aguardar o sinal sonoro de finalizao da destilao

5. Remover o erlenmeyer com cuidado (pode estar quente) para posterior titulao.

6. IMPORTANTE: a remoo do tubo um procedimento perigoso, voc deve ter em mente que:

a) geralmente o tubo esta quente;

b) o excesso de NaOH aquecido ou no dentro do tubo pode causar queimaduras e acidentes. Portanto, se voc desejar, poder solicitar ajuda para remover o mesmo do equipamento.

Remoo do tubo: abrir a tampa de acrlico e remover o tubo de anlise.

7. Jogar o contedo do tubo em um copo dentro da pia para que as bolinhas sejam recuperadas para prximas anlises

8. O equipamento est pronto para outra determinao.

Rotina de finalizao

1. Verificar o estado geral do equipamento, limpar se necessrio

2. Desligar a chave, desligar da tomada

3. Desligar a gua de resfriamento.

Ateno: siga as instrues, evite erros e acidentes de trabalho

Determinao do Nitrognio Insolvel em Detergente Neutro (NIDN) e do Nitrognio Insolvel em Detergente cido (NIDA)

Princpio:

A determinao do NIDN e do NIDA realizada, respectivamente nos resduos das determinaes de FDN e FDA utilizando o mesmo procedimento para a determinao do N-total.

Consideraes gerais:

O teor de NIDN utilizado para o clculo do teor de carboidratos no fibrosos, corrigido para esta frao. O NIDA um indicador importante do N indigestvel e, conseqentemente, da protena indigestvel do alimento. Procedimento:

Inicialmente determinado o teor de N no resduo (Nr) do FDN ou do FDA, colocando-se os saquinhos de polister contendo o resduo diretamente nos tubos de digesto (obs: os saquinhos de polister no possuem N na sua composio). A seguir os teores de NIDN ou NIDA do alimento so calculados da seguinte forma:

NIDN ou NIDA (% MS) = % Nr x % FDN ou % FDN (% MS) / 100

A porcentagem de NIDN ou NIDA no N-total pode ser calculada por:

% NIDN ou NIDA (% N-total) = % NIDN ou % NIDA (% MS) / % N-total x 100

ANLISE FSICO-QUMICA DO MEL

1. Umidade e ndice de Refrao

Calcular umidade do mel aps a determinao do ndice de refrao com auxilio do refratmetro e da tabela de Chataway. U(%)