SEQUENCIAMENTO

DE

DNA

SEQUENCIAMENTO DE DNA

• TÉCNICA

• PRÁTICA MÉDICA HOJE

• FUTURO

TÉCNICA:

1. EXTRAÇÃO DO DNA: A TÉCNICA VARIA DE ACORDO COM O MATERIAL.

PROTEINASE

DETERGENTES

CENTRÍFUGA

ETANOL

TÉCNICA

2. AMPLIFICAÇÃO

PCR {DNA + PRIMER + dNTP + Taq polimerase

95o C : denatura

60o C: anelamento do primer e extensão da molécula pela taq polimerase

3. ANÁLISE E QUANTIFICAÇÃO DO MATERIAL AMPLIFICADO

TÉCNICA

4. MARCAÇÃO

PCR { MATERIAL AMPLIFICADO + PRIMER+ dNTPs + ddNTPs MARCADOS + Taq polimerase

A Taq pol pode adicionar também análogos dos nucleotídeos. O método de Sanger usa essa

habilidade para incorporar ddNTPs à sequência. Quando um ddNTPs é incorporado à cadeia, a

extensão termina seletivamente em A,C,G ou T devido a falta o grupo 3´OH.

TÉCNICA

5. SEQUENCIAMENTO: o sequenciador automático detecta a fluorescência dos 4 diferentes ddNTPs marcados. As quatro cores podem ser detectadas isoladamente , graças a eletroforese capilar.

PREVENÇÃO GENOTÍPICA

PREVENÇÃO FENOTÍPICA