replicação do dna · 26/04/2015 3 origens de replicação primase ribonucleoproteína liga‐se...
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ReplicaçãodoDNA
JoséFranciscoDiogodaSilvaJunior– MestrandoCMANS/UECE
ComoaconteceasíntesedoDNA?
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Replicaçãosemi‐conservativa
Origensdereplicação
▪ Locais com um contexto de
sequência específico
▪ Ligam proteínas específicas
▪ Quando acionadas, essas proteínas permitem o início da
replicação
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Origensdereplicação
Primase
▪ Ribonucleoproteína
▪ Liga‐se à helicase em procariotos
formando o chamado primossomo
▪ Sintetiza um primer de RNA contendo
aproximadamente 11 bases; fornece 3’
OH
▪ DNA polimerase lenta e sujeita a erros
▪ Evita a progressão da forquilha uma vez
que a fita líder anda mais rápido
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DNApolimerase
▪ Enzimas que catalisa a reação de síntese do DNA
▪ Adiciona nucleotídeos tri‐fosfato à extremidades 3’OH livre
▪ Alongamento da cadeia de DNA sempre é feito na direção 5’>3’
(endonuclease 5’>3’)
▪ Incapaz de fazer DNA do zero (precisa ter extremidade 3’OH livre)
▪ Possui mecanismo de correção de erros (exonuclease 3’>5’)
TiposdeDNApolimerase
▪ DNA polimerase I
▪ Descoberta em 1956 (Kornberg pai)
▪ Função precisa descoberta apenas em 1969: remove o primer de RNA
da fita descontínua
▪ DNA polimerase III
▪ Descoberta em 1970 (Kornberg filho)
▪ Principal enzima que realiza a replicação em procariotos
▪ DNA polimerase II
▪ Lenta, envolvida em reparo do DNA
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Replicação
▪ DNA Polimerase III
▪ Sen do 5’ → 3’
▪ Nucleotídeos 3P são adicionados
▪ Liberação de Pirofosfato
DesenovelamentodoDNA
▪ Retirada das histonas
▪ Proteínas de ligação a fita simples (SSBPs)
▪ DNA helicase
▪ Quebra pontes de H
▪ DNA topoisomerases
▪ Tiram a tensão
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Forquilhadereplicação
Forquilhadereplicação
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Replicaçãodasfitas
▪ Fita líder
▪ Primase age uma vez
▪ Fita retardada
▪ Primase age várias vezes
▪ 1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication possible discontinuity of
DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967 Jun;20(3):255‐60
Forquilhadereplicação
▪ Polaridade da síntese define fitas líder e retardada (descontínua)
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DireçõesdereplicaçãonaForquilha
Micrografia,bolhadereplicação
Forquilhas de replicação
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ReplicaçãodoDNA
▪ DNA Pol precisa de um molde inicial
▪ Primase: gera um molde de RNA
complementar
▪ A DNA Pol III agora é capaz de adicionar bases à extremidade 3’OH
Eliminação dos fragmentos de
Okasaki
DNA Pol I