Regras de Esterilizaccedilatildeo e natildeo Contaminaccedilatildeo em Ambientes

Laboratoriais Versatildeo 2

Trabalho Realizado por

Aida Sofia Santos

Luciacutelia Santos

Maria de Faacutetima Santos

Isabel Passos

Joseacute Joatildeo Clemente18-07-2013 1

Introduccedilatildeo

18-07-2013 2

A assepsia eacute extremamente

importante em microbiologia

Esterilizaccedilatildeo de meios de cultura e

soluccedilotildees

Material de vidro plaacutestico ou metal

que se utiliza

Instruccedilotildees Gerais

18-07-2013 3

As condiccedilotildees de higiene e limpeza

devem

ser rigorosas para evitar possiacuteveis

fontes de contaminaccedilotildees

Aleacutem dos cuidados normais de boas

praacuteticas de laboratoacuterio satildeo

necessaacuterios procedimentos

especiacuteficos para minimizar os riscos

de acidentes pessoais e de

contaminaccedilatildeo ambiental

Normas gerais para uso de um

Laboratoacuterio de Microbiologia

18-07-2013 4

Desinfeccedilatildeo diaacuteria do laboratoacuterio

Esta visa eliminar qualquer

interferecircncia externa que possa

influenciar na qualidade dos

trabalhos desenvolvidos

assim como proteger o pessoal

envolvido de qualquer

Contaminaccedilatildeo ambiental

Normas Gerais para uso de um

Laboratoacuterio de Microbiologia

18-07-2013 5

No iniacutecio e teacutermino de cada

trabalho praacutetico a superfiacutecie da

bancada deve ser desinfetada

Em caso de acidentes

provocados por

salpicos quebras de

frascos tubos e placas que

contenham materiais

contaminados deve proceder-

se imediatamente aacute desinfeccedilatildeo

Teacutecnicas de assepsia

Para manter uma cultura pura

eacute necessaacuterio que o meio de cultura

que se pretende utilizar seja mantido desprovido de qualquer

organismo vivo contaminante

18-07-2013 6

Para a prevenccedilatildeo de contaminaccedilotildees

durante a manipulaccedilatildeo de culturas puras

recorre-se a teacutecnicas de assepsia

18-07-2013 7

Teacutecnicas de assepsia

Para manter uma cultura pura

eacute necessaacuterio que o meio de cultura

que se pretende utilizar seja mantido desprovido de qualquer

organismo vivo contaminante

18-07-2013 6

Para a prevenccedilatildeo de contaminaccedilotildees

durante a manipulaccedilatildeo de culturas puras

recorre-se a teacutecnicas de assepsia

18-07-2013 7

Para a prevenccedilatildeo de contaminaccedilotildees

durante a manipulaccedilatildeo de culturas puras

recorre-se a teacutecnicas de assepsia

18-07-2013 7

As teacutecnicas de assepsia satildeo um conjunto

de medidas experimentais simples mas

muito importantes num laboratoacuterio de

Microbiologia

Estas teacutecnicas devem ser praticadas

durante a manipulaccedilatildeo de culturas puras e de

meios de cultura esteacutereis

18-07-2013 8

Nomeadamente

um recipiente que contenha uma dada cultura deve ser aberto

perto da chama do bico de Bunsen

de forma a impedir uma contaminaccedilatildeo

devido agrave entrada de ar exterior contaminado

18-07-2013 9

Aleacutem disso

apoacutes a sua preparaccedilatildeo cada meio de cultura

deve ser submetido a esterilizaccedilatildeo

por forma a eliminar

qualquer organismo vivo contaminante

18-07-2013 10

A transferecircncia de uma porccedilatildeo da cultura contida num tubo

ou balatildeo para outro recipiente (inoculaccedilatildeo) eacute realizada

normalmente com uma ansa previamente esterilizada

pela passagem pela chama do bico de Bunsen (e

posteriormente arrefecido) ou atraveacutes de uma

micropipeta com pontas de plaacutestico previamente

esterilizadas (em autoclave por exemplo)

18-07-2013 11

1- passar a ansa pela chama do bico de Bunsen ateacute a

extremidade ficar incandescente deixar arrefecer ao

ar mantendo a ansa sempre perto da chama

2- destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como

inoacuteculo perto da chama

3- remover uma porccedilatildeo da cultura com a ansa arrefecida

18-07-2013 12

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

18-07-2013 13

Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

Nomeadamente

um recipiente que contenha uma dada cultura deve ser aberto

perto da chama do bico de Bunsen

de forma a impedir uma contaminaccedilatildeo

devido agrave entrada de ar exterior contaminado

18-07-2013 9

Aleacutem disso

apoacutes a sua preparaccedilatildeo cada meio de cultura

deve ser submetido a esterilizaccedilatildeo

por forma a eliminar

qualquer organismo vivo contaminante

18-07-2013 10

A transferecircncia de uma porccedilatildeo da cultura contida num tubo

ou balatildeo para outro recipiente (inoculaccedilatildeo) eacute realizada

normalmente com uma ansa previamente esterilizada

pela passagem pela chama do bico de Bunsen (e

posteriormente arrefecido) ou atraveacutes de uma

micropipeta com pontas de plaacutestico previamente

esterilizadas (em autoclave por exemplo)

18-07-2013 11

1- passar a ansa pela chama do bico de Bunsen ateacute a

extremidade ficar incandescente deixar arrefecer ao

ar mantendo a ansa sempre perto da chama

2- destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como

inoacuteculo perto da chama

3- remover uma porccedilatildeo da cultura com a ansa arrefecida

18-07-2013 12

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

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Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

Aleacutem disso

apoacutes a sua preparaccedilatildeo cada meio de cultura

deve ser submetido a esterilizaccedilatildeo

por forma a eliminar

qualquer organismo vivo contaminante

18-07-2013 10

A transferecircncia de uma porccedilatildeo da cultura contida num tubo

ou balatildeo para outro recipiente (inoculaccedilatildeo) eacute realizada

normalmente com uma ansa previamente esterilizada

pela passagem pela chama do bico de Bunsen (e

posteriormente arrefecido) ou atraveacutes de uma

micropipeta com pontas de plaacutestico previamente

esterilizadas (em autoclave por exemplo)

18-07-2013 11

1- passar a ansa pela chama do bico de Bunsen ateacute a

extremidade ficar incandescente deixar arrefecer ao

ar mantendo a ansa sempre perto da chama

2- destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como

inoacuteculo perto da chama

3- remover uma porccedilatildeo da cultura com a ansa arrefecida

18-07-2013 12

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

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Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

A transferecircncia de uma porccedilatildeo da cultura contida num tubo

ou balatildeo para outro recipiente (inoculaccedilatildeo) eacute realizada

normalmente com uma ansa previamente esterilizada

pela passagem pela chama do bico de Bunsen (e

posteriormente arrefecido) ou atraveacutes de uma

micropipeta com pontas de plaacutestico previamente

esterilizadas (em autoclave por exemplo)

18-07-2013 11

1- passar a ansa pela chama do bico de Bunsen ateacute a

extremidade ficar incandescente deixar arrefecer ao

ar mantendo a ansa sempre perto da chama

2- destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como

inoacuteculo perto da chama

3- remover uma porccedilatildeo da cultura com a ansa arrefecida

18-07-2013 12

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

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Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

1- passar a ansa pela chama do bico de Bunsen ateacute a

extremidade ficar incandescente deixar arrefecer ao

ar mantendo a ansa sempre perto da chama

2- destapar a placa de Petri que contem a cultura a usar como

inoacuteculo perto da chama

3- remover uma porccedilatildeo da cultura com a ansa arrefecida

18-07-2013 12

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

18-07-2013 13

Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

5- transferir a cultura para o meio de cultura e passar o

gargalo do balatildeo novamente pela chama

6- esterilizar a ansa passando-a novamente pela chama

ateacute ficar incandescente

7- colocar a ansa esterilizada num suporte

4- destapar o balatildeo contendo o meio de cultura liacutequido a

inocular e passar o gargalo pela chama

18-07-2013 13

Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

Algumas Regras Baacutesicas

18-07-2013 14

Todo material contaminado

antes de ser lavado deve passar

pelo processo de

esterilizaccedilatildeo para que toda a sua

flora microbioloacutegica seja

completamente

destruiacuteda evitando-se que o

mesmo seja uma fonte de

contaminaccedilatildeo

Nunca se deve deixar sobre a

bancada de trabalho lacircminas

retiradas do microscoacutepio Este

material deve ser

colocado em recipiente contendo

uma

soluccedilatildeo desinfetante adequada

Regras Baacutesicas

18-07-2013 15

Todo material que deve ser

esterilizado eou lavado

(tubos pipetas placas frascoset

c)

deveraacute ser colocado em lugar

indicado no final de cada

atividade

desenvolvida no laboratoacuterio

As ansas e as agulhas

inoculadas apoacutes o uso devem

ser esterilizadas agrave chama

Regras Baacutesicas (Cont)

18-07-2013 16

O autoclave que eacute um equipamento

usado nas atividades rotineiras do

laboratoacuterio deve ser inspecionado e

verificado quanto agrave eficiecircncia de

esterilizaccedilatildeo periodicamente

Deve-se ter sempre o cuidado de

lavar e realizar a antissepsia das

matildeos antes

e apoacutes o teacutermino dos trabalhos

realizados no laboratoacuterio

Regras Baacutesicas (Cont)

18-07-2013 16

O autoclave que eacute um equipamento

usado nas atividades rotineiras do

laboratoacuterio deve ser inspecionado e

verificado quanto agrave eficiecircncia de

esterilizaccedilatildeo periodicamente

Deve-se ter sempre o cuidado de

lavar e realizar a antissepsia das

matildeos antes

e apoacutes o teacutermino dos trabalhos

realizados no laboratoacuterio

(Continuaccedilatildeo)

18-07-2013 17

Soluccedilotildees quiacutemicas devem ser

pipetadas com auxiliar de pipetagem

(pera de

borracha) e as pipetas quiacutemicas devem

estar separadas das microbioloacutegicas

Utilizar sempre uma bata limpa

18-07-2013 18

Lavar as matildeos no iniacutecio e no final de

cada sessatildeo de trabalho experimental

Manter os bicos de Bunsen e as

lamparinas acesas apenas enquanto satildeo

necessaacuterios

Natildeo comer beber ou fumar no

laboratoacuterio

Identificar todo o material utilizando

para isso marcadores de vidro

apropriados

Regras Baacutesicas (Cont)

Algumas Regras Baacutesicas (Cont)

18-07-2013 19

No manuseamento de compostos

quiacutemicos considerados perigosos evitar

o contacto cutacircneo ou a sua

inalaccedilatildeo recorrendo ao uso de uma

hote de luvas maacutescara ou oacuteculos de

proteccedilatildeo consoante as caracteriacutesticas

dos compostos

Natildeo pipetar com a boca

18-07-2013 20

Estabelecer regras bem definidas para

o circuito do material de vidro e de

plaacutestico no laboratoacuterio assim como para a

sua lavagem

Manusear com muita precauccedilatildeo certos

materiais e aparelhos fraacutegeis eou muito

sensiacuteveis e mantecirc-los devidamente limpos

Eacute o caso dos termoacutemetros cabeccedilas de

aquecimento termostatizadas aparelhos

de mediccedilatildeo de pH e balanccedilas entre outros

Continuaccedilatildeo

18-07-2013 21

Nunca usar aparelhos sem conhecer

em pormenor o procedimento de

utilizaccedilatildeo

Colocar as pipetas de vidro sujas em

contentores de plaacutestico com uma

soluccedilatildeo com detergente e

devidamente identificados para esse

fim

Continuaccedilatildeo

18-07-2013 22

Antes de colocar na pia de lavagem do

laboratoacuterio material de vidro sujo contendo

soluccedilotildeessuspensotildees deixar informaccedilatildeo

sobre os riscos do seu conteuacutedo de modo a

ficar claro o destino que se lhe deve dar

Colocar todo o material de vidroplaacutestico

contendo suspensotildees de

microrganismos no local indicado para

posterior autoclavagem

Continuaccedilatildeo

18-07-2013 23

O processamento dos produtos devem

seguir um fluxo direcionado sempre da

aacuterea suja para a aacuterea limpa

Um laboratoacuterio deve possuir

minimamente os seguintes ambientes

1-Area de receccedilatildeo e limpeza

2- Sala de preparo e esterilizaccedilatildeo

3- Sala de desinfeccedilatildeo quiacutemica quando

aplicaacutevel

4- Aacuterea de monitoramento de processo

de esterilizaccedilatildeo

5- Sala de armazenamento e distribuiccedilatildeo

de materiais esterilizados

Continuaccedilatildeo

Muito Importante

18-07-2013 24

Natildeo lamber etiquetas ou colocar qualquer

material na boca (pex canetas)

Evite o haacutebito de levar as matildeos agrave boca

nariz olhos rosto ou cabelo

Natildeo mantenha plantas bolsas roupas ou

qualquer outro objeto natildeo relacionado com o

trabalho dentro do laboratoacuterio

As unhas devem ser curtas bem cuidadas

e natildeo podem ultrapassar a ponta dos dedos

Preferencialmente sem conter verniz pois

liberta micro fraturas

Natildeo mastigue chicletes pois provocam

bacteacuterias na boca

Lavagem Correta das Matildeos

18-07-2013 25

1 Utilize a aacutegua corrente para

molhar as matildeos

2 Esfregue a palma e o dorso

das matildeos com

sabonete inclusive as unhas e

os espaccedilos entre os dedos

durante mais ou menos 15

segundos3 Enxague bem com aacutegua

corrente retirando todo o

sabonete

4 Seque-as com papel toalha

ou outro sistema de secagem

eficiente

5 Esfregue as matildeos com um

pouco de produto antisseacutetico

Regras de Seguranccedila no Laboratoacuterio

18-07-2013 26

Regras Gerais de Seguranccedila

1- Conhecer a localizaccedilatildeo das

saiacutedas de emergecircncia

2- Conhecer a localizaccedilatildeo e o

funcionamento de extintores de

incecircndio caixas de primeiros

socorros chuveiros e

equipamentos de proteccedilatildeo

3- Natildeo comer beber fumar ou

guardar alimentos no laboratoacuterio

4- Nunca trabalhar sozinho no

laboratoacuterio

18-07-2013 27

5- Utilizar os aparelhos soacute depois de

ter lido e compreendido as respetivas

instruccedilotildees de manuseamento e

seguranccedila

6- Antes de efetuar qualquer atividade

experimental ler com atenccedilatildeo o

protocolo experimental e procurar

compreender a sua finalidade

7- Manter as bancadas limpas e

arrumadas o chatildeo limpo e seco e as

passagens desobstruiacutedas

8- Efetuar o trabalho laboratorial

sempre de peacute

18-07-2013 28

9- Todos os recipientes que

contenham produtos devem estar

devidamente rotulados

10- Reagentes e equipamento

devem ser arrumados apoacutes ter

terminado a sua utilizaccedilatildeo

11- Os bicos de gaacutes apenas

devem ser acendidos quando for

necessaacuterio e deve ser vigiado o

seu funcionamento

12- Natildeo aquecer recipientes

fechados

18-07-2013 29

13- Colocar o material de vidro

partido ou rachado em recipiente

proacuteprio

14- Realizar na hotte os trabalhos

que envolvam libertaccedilatildeo de gases

ou vapores

15- Findo o trabalho

experimental verificar se as

torneiras de aacutegua e de gaacutes se

encontram fechadas e se os

aparelhos eleacutetricos foram

desligados

Materiais de Laboratoacuterio

18-07-2013 30

18-07-2013 31

18-07-2013 32

18-07-2013 33

Conclusatildeo

18-07-2013 34

Embora existam vaacuterios meios para ajudar a avaliar os riscos

inerentes a uma determinada experiecircncia ou processo a

componente mais importante

eacute a ponderaccedilatildeo profissional A avaliaccedilatildeo dos riscos deve ser

efetuada pelas pessoas mais familiarizadas com as

caracteriacutesticas especificas dos eventuais organismos normas e

equipamentos a utilizar bem como do equipamento de

confinamento e instalaccedilotildees disponiacuteveis

18-07-2013 35

httpwwwcolegiowebcombrtrabalhos-escolaresquimicasubstancias-e-misturasmaterial-de-laboratoriohtml

httprecifeifpeedubrrecifemanual_microbiologia_5_ed_2007_finalpdf

Referencias Bibliograacuteficas

httpportuguesealibabacomproduct-gsglassware-lab-supplies-553213266html

httpquimicaensinadablogspotpt2011_01_01_archivehtml

httpprofsccemsptPauloPortugalCFQSegurana_LaboratrioLaboratriohtm

httpsfenixistutlptdepartamentosdbelaterallaboratorios

httpptwikipediaorgwikiLaboratC3B3rio

httpwwwcienciaempautaamgovbr201303programa-de-iniciacao-cientifica-do-inpa-recebe-inscricoes

httpe-escolaistutlpttopicoasphid=312

httprepositoriumsdumuminhoptbitstream182222411U1pdf

httpwwwciesaplptlab

httpprofsccemsptPauloPortugalCFQSegurana_LaboratrioLaboratriohtm