5/12/2018 Reagentes-PCR protocolo - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/reagentes-pcr-protocolo 1/3

 

http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio14/pcrnamicologia.pdf 

Volume da reação para 25uL

A concentração para Taq polimerase está errada.

5/12/2018 Reagentes-PCR protocolo - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/reagentes-pcr-protocolo 2/3

 

Meio reacional para PCR

Reagentes Volume em µl para

uma amostra

Conc. do

Estoque

Conc.

final

Observações

 Água MilliQ 26 Autoclavada e tratada com UV

Tampão 10X (100mM

 Tris-HCl pH 8,3, 15

mM MgCl2 e 500 mM

KCl, 0,01% gelatin)

5 10X 1x Estocada a -25°C. As novas concentrações finaispara Tris-HCl, KCl e gelatina são respectivamente:10mM, 50mM e 0,001%

dNTPs 1 10mM 0,2mM Estocar a -20°C. Evitar mudanças frequentes detemperatura. Mixar bem antes de usar.

BSA 2 10mg/ml 0,4mg/ml

Estocada a -25°C

Primer FW  2,5 25 µM 1,25 µM Estoque já diluído do frasco original, que está 100µM em TE.

Primer RE 2,5 25 µM 1,25 µM Estoque já diluído do frasco original, que está 100µM em TE.

MgCl2 ------------------ ------------------

---

------------

--

  Já está presente no tampão 10X. Quando diluídosua concentração fica 1,5 mM (em muitostrabalhos a concentração variou de 0,5 a 2,5mM)

DNA 2 P material emEstocada a -25°C e p

Volume total 50

5/12/2018 Reagentes-PCR protocolo - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/reagentes-pcr-protocolo 3/3