UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAÍBA

CENTRO DE CIÊNCIAS EXATAS E DA NATUREZA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA MOLECULAR

BIOQUÍMICA METABÓLICA

Profa. Dra. Creusioni Figueredo dos Santos.

Tutor da Aula Prática: Daniel Lima de Farias.

João Pessoa-PB

2013

UNIVERSIDADE ABERTA DO BRASIL

UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA - UFPB VIRTUAL

CURSO LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS A DISTÂNCIA

Roteiro de Práticas de Bioquímica Metabólica para o Ensino de Biologia

Embora os conteúdos teóricos de Bioquímica sejam bem abordados

na literatura atual dos livros de biologia, persiste a dificuldade da abordagem prática por parte dos professores. Boa parte das dificuldades reside na aquisição dos materiais necessários, como também na escassez de literatura que estimule os docentes a execução dessas práticas. O que propomos nas experiências descritas neste “Roteiro de Práticas” é acender a luz de criatividade do professor de Biologia, para que passe a perceber que é possível a partir de experiências simples e de custo relativamente baixo, executar atividades com metodologia instigante para o aluno, onde este possa perceber o elo entre a teoria e prática refletidos na vivência do cotidiano.

CONTEÚDO:

1 – Prática de Detecção do Amido em Diferentes Amostras:

Experimento I ;

Experimento II ;

Experimento III .

2 – Ação da Enzima Amilase Salivar (Ptialina) sobre o Amido:

Experimento I ;

Experimento II .

1 – Prática de Detecção do Amido em Diferentes Amostras.

1.1 – Objetivo: Identificar a presença do amido em diferentes amostras de alimentos.

1.2 – Fundamentação teórica: Os carboidratos são classificados em três grupos: monossacarídeos, dissacarídeos e

polissacarídeos. A glicose é um exemplo de monossacarídeo e constitui um dos mais importantes carboidratos, pois é considerada o combustível para a célula. As plantas armazenam milhares de moléculas de glicose na forma de amido, já os animais as reservam na forma de glicogênio. A presente atividade tem por objetivo identificar o teor de amido em bananas verdes e maduras. E pode ser ampliada para outros tipos de alimentos.

Essa experiência ideal para expor sobre nutrientes presentes nos alimentos e, que constituem as moléculas que formam nossas células, tecidos e órgãos.

1.3 – Materiais: • Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café; • Frasco conta-gotas; • Tintura de iodo comercial (compra na farmácia); • conta-gotas, amido solúvel (amido de milho); • 1 tubo de ensaio (ou copo transparente); • 2 pires; • banana bem verde e banana bem madura. • Pedaços, fatias ou pequenas porções de alimentos contendo amido (pão, maizena, goma de mandioca, batata inglesa, inhame, macaxeira, etc).

EXPERIMENTO I

Colocar pedaços, fatias ou pequenas porções de diferentes alimentos contendo iodo em frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café e gotejar a solução de tintura de iodo. O aparecimento de coloração azulada revela à presença do carboidrato amido na amostra.

EXPERIMENTO II

Pegue uma banana verde e uma banana madura. Observe a cor, o odor, a consistência (macio ou duro), o sabor e registre as características que você encontrar no quadro abaixo:

Vamos chamar a banana verde de estado inicial e a madura, de final. Com os conhecimentos que já adquiriu, você pode responder: houve uma transformação? Neste primeiro momento de nossa investigação, nós utilizamos os órgãos do sentido para observar. Vamos dar mais um passo.

EXPERIMENTO III

Como sabemos, os alimentos possuem nutrientes. Um dos nutrientes importantes

para obtermos energia para sobreviver é o amido. Vamos testar se tem amido numa banana? - Teste de amido: A) Pegue um tubo de ensaio e coloque 20 gotas de água em uma pequena quantidade de amido solúvel. Misture bem. B) Adicione 2 gotas de solução de iodo ao tubo de ensaio. Observe a coloração e anote. C) Corte uma rodela de banana verde e coloque no pires (1) e no outro pires (2) uma rodela de banana madura. Anote as cores obtidas.

D) Compare a cor da solução de iodo + amido com as obtidas nas rodelas de banana. O que você pode concluir? E) Compare a cor obtida depois de adicionar o iodo nos pires 1 e 2. Qual das duas rodelas de banana possui mais amido?

- Continuação do Experimento II (opcional):

Vamos testar outros alimentos para ver se têm amido? Utilizando a solução de iodo, você pode testar. Sempre compare a solução de amido solúvel + iodo com as outras amostras (você pode colocar em pires ou vidrinhos transparentes).

2 – Ação da Enzima Amilase Salivar (Ptialina) sobre o Amido.

2.1 – Objetivo: Observar a hidrólise do carboidrato amido por ação catalítica da enzima amilase salivar.

2.2 – Fundamentação teórica: A ptialina (ou amilase salivar) é uma enzima da saliva, que em pH neutro, ou ligeiramente

alcalino, digere parcialmente o amido e converte-o em glicose. É na boca, com a ptialina da saliva, que começa a digestão química dos polissacarídeos ingeridos. A água umedece o alimento, o muco lubrifica-o e a amilase catalisa a hidrólise do amido que o transforma em moléculas de açúcares mais simples (oligossacarídeos e monossacarídeos). A ptialina é produzida pelas glândulas salivares, em especial pela glândula parótida.

2.3 - EXPERIMENTO I

– Materiais: • Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café. • Pipeta Pasteur ou conta-gotas. • Tintura de iodo comercial. • Água filtrada ou soro fisiológico (cloreto de sódio 0,9%). • Amido. • Saliva colhido de aluno voluntário (evitar pessoas que se alimentaram recentemente).

– Procedimento:

Prepare três tubos de ensaio (frascos de vidro ou copos descartáveis de café) contendo solução de amido como substrato (dissolva aproximadamente 0,5 g de maizena em 100 mL de água) em seguida, adicione a enzima (solução de saliva diluída em água na proporção 1:10), misture e incube o frasco na mão fechada durante 15 a 20 minutos com suaves agitações casuais. e outros três contendo clara de ovo como substrato (2,5 mL). Coloque os tubos contendo gelatina em banho-maria para facilitar a solubilização. Adicione aos tubos 2,5 mL dos reagentes, conforme apresentado na Tabela 1. Tabela 1: Substrato e respectivos reagentes a serem adicionados em cada experimento.

Experimento Substrato Enzima (reagente)

I 2 ml de Solução de Amido 0,5 ml de Água (Branco)

II 2 ml Solução de Amido 0,5 ml de Solução de Amilase Salivar (1:10)

III 2 ml Solução de Amido 0,5 ml de Solução de Amilase Salivar (1:10) Fervida

Decorrido o tempo de incubação, adicionar uma ou duas gotas de tintura de iodo comercial e agitar. Observar e comparar os resultados.

2.4 - EXPERIMENTO II

2.4.1 – Materiais: • Tubos de ensaio (12 unidades). • Estante para tubos. • Pipeta regulável. • Reagente de Benedict. • Lugol ou solução de iodo (compra na farmácia). • Mel (de preferência três tipos diferentes). • Soluções de Amido 0,5%, Sacarose 0,5% e Celulose 0,5%. • Enzima (evitar pessoas que se alimentaram recentemente). .

2.4.2 – Parte 1

– Procedimento:

Preparam seis tubos de ensaio contendo cada substrato (descritos na tabela abaixo) em seguida, adicione uma gota de lugol (ou solução de iodo comercial) em cada amostra, misture com suaves agitações casuais, e depois de um tempinho verifique e anote os resultados.

2.4.3 – Parte 2

– Procedimento:

Preparam outros seis tubos de ensaio contendo cada substrato (descritos na tabela abaixo), em seguida colocam-se 0,5ml da enzima em cada um deles, e depois incuba os tubos em banho-maria à 37°C (água morna) esperando 15 minutos. Após a incubação, adicione 1,5ml do Reagente de Benedict em cada um dos tubos e misture com suaves agitações, aquecer um tempinho diretamente na chama(fogo), verificar e anotar os resultados.

OBS.: Composição básica do mel:

Componentes Média Água (%) 17,2

Frutose (%) 38,19

Glicose (%) 31,28

Sacarose (%) 1,31

Maltose (%) 7,31

Açúcares totais (%) 1,50

Outros (%) 3,1

pH 3,91