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Pré-analítica: Análises Clínicas e Genética Humana

Mário Cunha & Glória Meireles

Instituto Português de OncologiaServiço de Patologia Clinica 2º CCQL-PLP - Pré analitica | Mário Cunha 1

Pré analítica: Análises Clínicas e Genética Humana

Análises Clinicas & Genética

DiagnósticoPrognóstico

Monitorização

70% das decisões médicas


Fase Pré Analítica

• Requisição

• Preparação do doente

• Colheita

• Transporte e recepção de amostra

FaseAnalítica

• Realização dos ensaios

• Controlo de Qualidade Interno

• Avaliação Externa da Qualidade

• Incerteza de Medição

Fase Pós Analítica

• Apresentação de resultados

• Emissão de resultados

• Eliminação de amostras

2º CCQL-PLP - Pré analitica | Mário Cunha 3


42º CCQL-PLP - Pré analitica | Mário Cunha


Lab. Público

Lab. Análises Clinicas

Lab. Privado

Lab. Genética

MANUAL DE COLHEITAS




Velhos problemasvs

Novos problemas


Conclusões:

Más praticas comprometem resultados

Sistemas fechado de colheita: ordem da colheita dos tubos não é relevante

Ainda ocorrem falhas na ordem da colheita, que podem comprometer os resultado (utilização de seringa)



12 países europeus: 336 auditorias, com 36 auditorias por pais 29 questões




Prazos de validade dos tubos



Troca de luvas/higienização



Quando se colocou etiqueta nos tubosComplicações com a colheita



Procedimento de identificação



Etiquetagem dos tubos


ISO 15189: Procedimentos documentados e informações das

actividades de pré colheita, disponíveis para os utentes eutilizadores dos serviços dos laboratórios Exames realizados: tipo de amostra, volume necessário, precauções

especiais, tempo de resposta, intervalos de referência e valores de decisãoclinica

Instruções para preparação do doente

Instrução para colheita de amostras -> flebotomia

HOSPITAL -> SISTEMAS DE INFORMAÇÃO



ISO 15189: Ter especial atenção com o formulário de requisição:

Ambiente Hospitalar: O modo como os pedidos são realizados pelos médicos-> Formulários

electrónicos

Massificação dos pedidos de análises

Pedidos avulso

Pedidos por perfis

Laboratório tem pouco

controlo sobre o processo



Outras “velhas” questões: Rastreabilidade:

Colheita -> Pré Analítica -> Distribuição pelos diferentes labs.



Outras “velhas” questões: Rastreabilidade:

Fusões de hospitais e laboratórios -> Transporte de amostras para o lab. central

Acondicionamento, transporte erecepção:• Critérios para aceitação e rejeição de

amostras *• Triagem (registos - data, hora, quem

triou)• IT amostras Urgentes• Alíquotas inequivocamente rastreáveis

à amostra primária original• Manuseamento: centrifugação,

aliquotagem earmazenamento/distribuição


“Novas” questões - Biologia Molecular: Estabilidade da amostra pré-analítica:

Degradação de DNA/RNA: Dnases e RNases


Inactivação de Dnases:• Amostra colhida em EDTA (quelante de Mg2+

e Ca2+)• Ajuste do pH para 7,5• Armazenamento a -20ºC ou inferior• Uso de amostras “secas”




Inibidores de PCR:


Tipos de amostra e respectivos inibidores:• Sangue: grupo heme, hemoglobina,

imunoglobulina G, lactoferrina, heparina• Urina: ureia• Respiratória: polissacáridos acídicos• Fezes: sais biliares, polissacáridos complexos• Tecidos: colagénio, mioglobina

Outros:• Heparina• KCl, SDS• Álcoois: etanol, isopropanol, fenol



Estabilidade dos ácidos nucleicos:


Estabilidade do RNA do HIV1:• Sangue total em EDTA: 72h, a

25ºC• Plasma (EDTA): 7 dias a 25ºC; 14

dias a 2-8ºC e 5 anos a -20ºC

Estabilidade DNA HBV/RNA HCV:• Sangue total em EDTA: 4 a 6h, a 25ºC• Plasma (EDTA): 24h a 25ºC; 7 dias a 2-

8ºC e 3 meses a -20ºC

Estabilidade DNA/RNA de vírus respiratórios:• Zaragatoa em meio de transporte:

• 2 dias a 25ºC• 4 dias a 2-8ºC• 2 meses a -20ºC

• Zaragatoa seca: 15 dias a 25ºC


Fase Pré Analítica

• Requisição

• Preparação do doente

• Colheita

• Transporte e recepção de amostra

FaseAnalítica

• Realização dos ensaios

• Controlo de Qualidade Interno

• Avaliação Externa da Qualidade

• Incerteza de Medição

Fase Pós Analítica

• Apresentação de resultados

• Emissão de resultados

• Eliminação de amostras

70% das decisões médicas

Testes genéticos constituemmenos de 1% de todas asinvestigações laboratoriais.

Grande impacto:• Os testes genéticos são cada vez mais

requisitados para pessoas saudáveis comhistórico familiar de uma mutação que ospredispõe para doença autossómicadominante e monogénica.



Riscos associados ao testes genéticos: Doenças com manifestação na idade adulta; Diagnóstico pré-natal; Perfil genético de embriões antes da implementação; Testes dos portadores para doenças recessivas

autossómicas ou relacionadas com o cromossoma X;



Riscos associados ao testes genéticos: Em análises clinicas a gestão do erro é bastante mais

simplificada - > medidas ao longo do tempo corroboram o diagnóstico, relativizando-o;

Em Genética, o diagnóstico é habitualmente feito com um único teste, com possíveis sequelas clinicas ou psicossociais - > uma mutação incorrectamente identificada (BRCA1/2) coloca uma carga emocional no paciente e nos respectivos familiares



Riscos associados ao testes genéticos: Incidência de erros:

1,7 erros/1000 ensaios (colheita e gestão da amostra)

Semelhante a outras áreas laboratoriais, nomeadamente a Transfusão – 0,5 a 0,8 tubos em cada 1000 contem sangue de outro para além do paciente identificado

“Wrong Blood in Tube”

Erros de identificação ->



Riscos associados ao testes genéticos: Colheita -> procedimento de risco

em alguma situações, nomeadamente na colheita de liq. Amniótico, sangue fetal ou vilosidades coriónicas; Confidencialidade de informação; Consentimento informado;



Conclusões:O objectivo de um laboratório de análises clinicas ou

de genética consiste em fornecer o resultado certo ao paciente certo, atempadamente;

As implicações de um resultado incorrecto são enormes, especialmente em Genética, com implicação nas decisões clínicas que tem de ser tomadas;

Importante definir estratégia de avaliação de risco em todas as fases, determinar indicadores quantitativos e monitorizar;

Acreditação dos laboratórios obrigatória;


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