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LABORATÓRIO SÃO LUIZ Procedimento Operacional Padrão DOSAGEM DO COLESTEROL HDL Página 1 de 4 POPBIO 005 Versão: 01 COLESTEROL HDL 1. NOME E SINONÍMIAS Colesterol HDL HDL 2. FUNDAMENTO Os quilomicrons, as lipoproteínas de muita baixa densidade (VLDL) e as lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são quantitativamente precipitadas com fosfotungstato e íons magnésio. Após centrifugação, o sobrenadante contém as lipoproteínas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol é quantificado fotometricamente mediante as reações acopladas descritas abaixo. A absorbância do complexo formado (vermelho), medida em 500 nm, é diretamente proporcional á concentração de colesterol HDL da amostra. Ésteres do colesterol CHE Colesterol + Ácidos graxos Colesterol + O 2 CHOD Colest-4-en-ona + H 2 O 2 2H 2 O 2 + fenol + 4Aminoantipirina POD 4H 2 O + quinonei min a 3. APLICAÇÃO E SIGNIFICADO CLÍNICO A dosagem do Colesterol HDL no sangue, juntamente com a de triglicérides e de colesterol total, é empregada principalmente na avaliação de risco de doença arterial coronariana. As lipoproteínas de lata densidade (HDL = High Density Lipoproteins) exercem uma ação importante na concentração do colesterol nos tecidos. Atuam ainda no retorno do colesterol dos tecidos periféricos para o fígado. A taxa de Colesterol HDL mantém uma relação inversa com o fator de risco de DAC (Doença Arterial Coronariana), isto é, quanto maior o seu teor na circulação menor o risco de DAC. Deste modo, o colesterol HDL exerce um efeito protetor contra a aterosclerose. A prevalência da enfermidade coronariana é muito maior em indivíduos com níveis reduzidos de HDL do que em indivíduos com teores elevados. Ao contrário, a taxa de Colesterol LDL está diretamente relacionada com o fator de risco de DAC, isto é, quando maior o seu teor na circulação maior é a probabilidade do individuo desenvolver essa doença. O colesterol, a hipertensão arterial, o fumo e a intolerância á glicose são quatro grandes fatores para o desenvolvimento da DAC. Exercícios físicos podem aumentar o Colesterol HDL, assim como algumas drogas: lovastatina, ácido nicotínico, ciclofenil, cimetidina, etanol, estrogênios, terbutalina. Valores baixos de Colesterol HDL são encontrados em indivíduos obesos, de vida sedentária, fumantes, diabéticos, na colestase, hepatopatia, arterioclerose, coronariopatia, etc. 4. AMOSTRA

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LABORATÓRIO

SÃO LUIZ

Procedimento Operacional Padrão

DOSAGEM DO COLESTEROL HDL

Página 1 de 4

POPBIO 005

Versão: 01

COLESTEROL HDL

1. NOME E SINONÍMIASColesterol HDLHDL

2. FUNDAMENTOOs quilomicrons, as lipoproteínas de muita baixa densidade (VLDL) e as lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são quantitativamente precipitadas com fosfotungstato e íons magnésio.Após centrifugação, o sobrenadante contém as lipoproteínas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol é quantificado fotometricamente mediante as reações acopladas descritas abaixo.A absorbância do complexo formado (vermelho), medida em 500 nm, é diretamente proporcional á concentração de colesterol HDL da amostra.

Ésteres do colesterol C⃗HE Colesterol + Ácidos graxosColesterol + O2 C⃗HOD Colest-4-en-ona + H 2O22H2O2 + fenol + 4−Aminoantipirina P⃗OD 4H2O + quinoneimina

3. APLICAÇÃO E SIGNIFICADO CLÍNICOA dosagem do Colesterol HDL no sangue, juntamente com a de triglicérides e de colesterol total, é empregada principalmente na avaliação de risco de doença arterial coronariana.As lipoproteínas de lata densidade (HDL = High Density Lipoproteins) exercem uma ação importante na concentração do colesterol nos tecidos. Atuam ainda no retorno do colesterol dos tecidos periféricos para o fígado.A taxa de Colesterol HDL mantém uma relação inversa com o fator de risco de DAC (Doença Arterial Coronariana), isto é, quanto maior o seu teor na circulação menor o risco de DAC. Deste modo, o colesterol HDL exerce um efeito protetor contra a aterosclerose.A prevalência da enfermidade coronariana é muito maior em indivíduos com níveis reduzidos de HDL do que em indivíduos com teores elevados.Ao contrário, a taxa de Colesterol LDL está diretamente relacionada com o fator de risco de DAC, isto é, quando maior o seu teor na circulação maior é a probabilidade do individuo desenvolver essa doença.O colesterol, a hipertensão arterial, o fumo e a intolerância á glicose são quatro grandes fatores para o desenvolvimento da DAC.Exercícios físicos podem aumentar o Colesterol HDL, assim como algumas drogas: lovastatina, ácido nicotínico, ciclofenil, cimetidina, etanol, estrogênios, terbutalina.Valores baixos de Colesterol HDL são encontrados em indivíduos obesos, de vida sedentária, fumantes, diabéticos, na colestase, hepatopatia, arterioclerose, coronariopatia, etc.

4. AMOSTRAPreparo do Paciente: A amostra de sangue deve ser colhida após um jejum de 12 horas para evitar a interferência da lipemia pós-prandial que geralmente está presente em amostras obtidas sem jejum.Amostras utilizadas: Soro.Estabilidade e armazenamento da amostra: O analito é estável por 7 dias a 2-8 ºC.Volume mínimo utilizado para análise: 1 mlCritérios para rejeição da amostra: Não utilizar amostras fortemente hemolisadas.Tratamento e pré-tratamento da amostra: Centrifugar a amostra colhida em tubo seco a 3.000 rpm por 5 minutos.

5. MATERIAL REQUERIDO E EQUIPAMENTOS Centrífuga; Tubos e Micropipetas; Agitador Vórtex; Banho - Maria; Múltiplo Marcador de Tempo; Bioplus 200F.

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DOSAGEM DO COLESTEROL HDL

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POPBIO 005

Versão: 01

6. REAGENTE UTILIZADOCOLESTEROL HDL PP - GOLD ANALISA DIAGNÓSTICA LTDAComponentes do kit: Padrão 40 mg/dL e Precipitante.Estabilidade: Os reagentes são estáveis até o vencimento da data de validade impressa no rótulo do produto e na caixa quando conservados em temperatura entre 2-8ºC bem vedados.Reagente Não Fornecido: Reagente de Cor do Kit de Colesterol PP da Gold Analisa. Deverá ser adquirido separadamente

7. PROCEDIMENTONotas1-A relação amostra/ precipitante deve ser mantida em 1/1.2-O sobrenadante obtido deve ser completamente límpido e claro.3-Após a centrifugação, remover o sobrenadante límpido dentro de 15 minutos para evitar resultados falsamente elevados.4-Algumas amostras, principalmente as lipêmicas, podem apresentar o sobrenadante límpido com uma camada na sua superfície que não deve ser pipetada para evitar resultados falsamente elevados.5-Amostras lipêmicas e algumas não lipêmicas podem resultar em sobrenadantes turvos. Nestes casos, diluir o soro a ½ com solução de NaCL 150mmol/L (0,85%) e repetir a precipitação.Realizar a dosagem e multiplicar o resultado final por 2.No caso de persistir a turbidez ou de não obter uma boa sedimentação do precipitado, a amostra não poderá ser utilizada para dosagem do Colesterol HDL por esta metodologia.6-Para a determinação do colesterol HDL no sobrenadante, utilizar o Reagente de Cor do Kit de Colesterol - PP da Gold Analisa.

Precipitação das frações VLDL e LDL do Colesterol.1- Identificar os tubos de centrífuga com as letras HDL e o número da amostra do paciente e pipetar:

2-Agitar no Agitador Vórtex por 30 segundos.3-Centrifugar a 3500 rpm durante 15 minutos para obter um sobrenadante límpido.4- Pipetar o sobrenadante límpido, imediatamente após a centrifugação, tomando o cuidado para não ressuspender o precipitado para evitar resultados falsamente elevados.Ver notas acima

Procedimento Manual1- Identificar os tubos de ensaio como "Branco" (HDL/B), "Padrão" (HDL/P) e "Teste" (HDL/Número da amostra do paciente, EX: HDL/1)2- Proceder a pipetagem conforme tabela abaixo:

3- Misturar bem e incubar os tubos por 10 minutos em banho-maria a 37ºC.4- Selecionar no aparelho Bioplus 200F a programação 11 referente ao Colesterol HDL.5- Calibrar o aparelho Bioplus 200F com água destilada ou deionizada.6- Fazer a leitura do tubo “Branco”.7- Fazer a leitura do tubo “Padrão”.8- Ler as concentrações de Colesterol HDL dos tubos “Teste”. 9- Passar o resultado para a ficha de resultados do paciente.Obs: A cor é estável por 60 minutos.

8. CÁLCULOS DO RESULTADOO equipamento já emite a concentração na unidade programada mg/dL.

Cálculo da Concentração do Colesterol VLDL e LDL

Amostra 250 µLPrecipitante 250 µL

Tubos Branco Padrão TesteReagente de Cor 1000 L 1000 L 1000 LPadrão (1) 100 L Amostra (Sobrenadante)

100 L

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Procedimento Operacional Padrão

DOSAGEM DO COLESTEROL HDL

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POPBIO 005

Versão: 01

A concentração do Colesterol VLDL e LDL pode ser calculada através da equação de Friedewald, que é muito exata para amostras cujos valores de triglicérides não ultrapassem 400 mg/dL e não pertençam a pacientes portadores de lipoproteínemia do tipo III.Equação de Friedewald Colesterol LDL = Colesterol Total – (HDL + VLDL)Colesterol VLDL = Triglicérides ÷ 5

9. CONTROLE DA QUALIDADEControle InternoCalibração periódica de micropipetas e equipamentos utilizados, controle de temperatura da geladeira para armazenamento dos kits.Observar a validade dos kits.Observar os sinais de deterioração dos reagentes como presença de partículas e turbidez, não utilizar o reagente de cor quando sua absorbância medida contra água for igual ou maior que 0,300.Utilização de soro controle patológico nas análises realizadas no primeiro dia útil de cada mês.

10. VALORES DE REFERÊNCIAOs valores de referência são determinadas a partir de dados epidemiológicos, calculados estatisticamente, que relacionam os níveis do colesterol com a prevalência de doença arterial coronariana (DAC).

1-AdultosColesterol Total Colesterol HDL Colesterol LDL

Valor desejável:<200 mg/dL

Valor desejável:≥ 60 mg/dL

Valor desejável:< 130 mg/dL

Valor limítrofe:200 a 239 mg/dL

Valor baixo:<40 mg/dL

Valor limítrofe:130 a 159 mg/dL

Valor Elevado:≥ 240 mg/dL ----------------------

Valor elevado:160 a 189 mg/dL

---------------- ---------------Valor muito elevado:

≥ 190 mg/dL

2-Crianças e adolescentesColesterol Total Colesterol HDL Colesterol LDL

Valor desejável:< 170 mg/dL

Valor desejável:> 40 mg/dL

Valor desejável:< 110 mg/dL

Valor limítrofe:170 a 199 mg/dL

Valor baixo:<35mg/dL

Valor limítrofe:100 a 129 mg/dL

Valor elevado:≥ 200 mg/dL ----------

Valor elevado:≥ 130 mg/dL

11. LINEARIDADE A reação é linear até 200 mg/dL. Para valor acima de 200 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 0,9%, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição empregado.

12. INTERFERENTESInfluências Pré-AnalíticasOs valores de Colesterol HDL de uma mesma pessoa e em ocasiões diferentes podem variar consideravelmente devido ás variações biológicas e também as variações do método analítico.As concentrações de colesterol HDL podem ainda variar devido a: dietas, prática de exercício, variação do peso corporal, ação de hormônios, uso de álcool, fumo.Interferências Analíticas.A bilirrubina até 5 mg/dL, lipemia (triglicérides até 750 mg/dL), hemólise (hemoglobina até 180 mg/dL) não produzem interferências significativas.Valores de bilirrubina acima de 5 mg/dL produzem resultados falsamente diminuídos.Valores de triglicérides acima de 750 mg/dL produzem resultados falsamente elevados.

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Procedimento Operacional Padrão

DOSAGEM DO COLESTEROL HDL

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POPBIO 005

Versão: 01

13. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS1- Burstein M, Scholnick HR, Morfin R. J Lipid Res 1970; 11: 583.2- Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Química Clínica, 4a Ed - Guanabara Koogan; 1998.3- Grove TH. Clin Chem 1979; 25:560.4- Warnick RG, Naguyent T, Albers AA. Clin Chem 1985; 2:217-222.5- COLESTEROL HDL-PP, Instruções de Uso, Gold Analisa Diagnóstica.

Nome Assinatura DataElaborado por: Samuel Martins Delgado Neto 24/03/2013Aprovado por: Samuel Martins Delgado Neto 24/03/2013Implantado por: Samuel Martins Delgado Neto 24/03/2013Substitui POP:Revalidação Anual: ___/___/___Revalidação Anual: ___/___/___Revalidação Anual: ___/___/___Desativado por: ___/___/___Razão: