Monitor(a) Bolsista(a); Prof(a) Orientador(a)/Coordenador(a); ?· detectar a presença de lectina. A…

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UFPBPRG_____________________________________________________________XENCONTRODEINICIAODOCNCIA

SEPARAOPROTICAPORMEIODECROMATOGRAFIADEAFINIDADEAlissonGuedesCampos(1),TatianeSantiGadelha(3),CarlosAlbertodeAlmeidaGadelha(4).

CentrodeCinciasExatasedaNatureza/DepartamentodeBiologiaMolecular/MONITORIA

RESUMO:Cromatografiadeafinidadeumatcnicaqueutilizapropriedades fsicoqumicaspara separao dos componentes de umamistura, a partir da distribuio destes em duasfases uma mvel e outra estacionria que se encontram em ntimo contato. Durante apassagem da fase mvel (extrato protico) pela fase estacionria (sephadex G 50), oscomponentesdamisturasodistribudosdemodoquedelessoseletivamenteretidosnafaseestacionria (apresentamafinidadepelafaseestacionria),enquantooutrosmigramdeformadiferenciada.Paraa separaodeumaprotenaemparticular, introduzidaumasubstnciaqueseligafaseestacionariaremovendoadacoluna.Essaprticatemcomoobjetivosepararumgrupodeprotenas(aslectinas)deumextratovegetal,baseandosenaafinidadequeelastmpordeterminadosmonossacardeosmanoseeglicose.AsprotenaspresentesnafarinhadesementesdeCanavaliamartimaforamextradascomumasoluodeNaCl0,15M1:10(m/v), sob agitao constante durante 4 horas temperatura de 25C. A soluo sercentrifugadaa5.000xgpor20minutosa4C.Osobrenadante(extratoprotico)serfiltradoem papel de filtro. O extrato obtido foi aplicado em coluna de Sephadex G 50 (v= 10 mL)previamente equilibrada com soluo de NaCl 0,15 M. A amostra aplicada foi deixada emcontatopor30min,afimdepermitirainteraocomacoluna.Apsremoodomaterialnoretido comNaCl 0,15M, omaterial retido (lectina) ser eludo com soluode glicose 0,1M,com coletamanual de 1mL por frao emonitorada por atividadehemaglutinante a fim dedetectarapresenade lectina.Acromatografiadeafinidade temsemostradoeficienteparasepararprotenascomafinidadeporcarboidratos, tendoemvistaque,oextratodeCanavaliamartima quando submetida a esse tipo de cromatografia apresentou um eluato retido comatividadehemaglutinante.Estatcnicasemostroueficienteedefcilcompreensonoquedizrespeitointeraocompostoligantecomafaseestacionaria,almdoquepodefacilmenteserapresentadaemaulasprticas,tendoemvistaqueoprocessodeinteraoliganteocorreem30minutos.

PalavrasChave:CromatografiaSeparaoProtica.

5CCENDBMMT02.P

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(1)Monitor(a)Bolsista(a)(3)Prof(a)Orientador(a)/Coordenador(a)(4)Prof(a)Colaborador(a).

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