microscopia de campo escuro. campo clarocampo escuro + filtro vermelho

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Microscopia de Microscopia de campo escuro campo escuro

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Page 1: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Microscopia de Microscopia de campo escurocampo escuro

Page 2: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Campo claro Campo escuroCampo escuro+ filtro vermelho

Page 3: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro Campo escuro: bloqueio dos raios centrais,

permitindo apenas iluminação oblíqua na amostra.

LUZLUZ

absorçãoabsorção

Luz captada pela objetiva = Luz captada pela objetiva = refração + reflexãorefração + reflexão

reflexãoreflexão

fluorescênciafluorescência

refraçãorefração

Page 4: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Tipo de contraste no campo escuro (iluminação Tipo de contraste no campo escuro (iluminação oblíqua)oblíqua)

1) 1) NegativoNegativo: amostra é mais clara do que o plano de fundo, que fica escuro.: amostra é mais clara do que o plano de fundo, que fica escuro.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Contraste = (If - Ia) x 100 If

Page 5: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Contraste com campo Contraste com campo escuroescuro

- Os raios não desviados são - Os raios não desviados são obliterados;obliterados;- Apenas raios desviados são - Apenas raios desviados são captados pela objetiva.captados pela objetiva.

amostra

Distânciafocal

condensador

Lente do tubo

Plano da imagem

ocular

objetiva

Raiosdesviados

Raios não desviados

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 6: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

O que a técnica de campo escuro faz?O que a técnica de campo escuro faz?1) 1) Contraste negativoContraste negativo

-- Bloqueia os raios não desviados centrais, permitindo apenas a passagem de raios desviados num ângulo suficiente para serem captados pela Bloqueia os raios não desviados centrais, permitindo apenas a passagem de raios desviados num ângulo suficiente para serem captados pela objetiva;objetiva;

- os eventos de - os eventos de refração e reflexãorefração e reflexão são responsáveis pela produção de raios desviados; são responsáveis pela produção de raios desviados;

- a amostra fica - a amostra fica clara clara sobre um fundo escuro;sobre um fundo escuro;

- cria uma aparência tridimensional da amostra;- cria uma aparência tridimensional da amostra;

- a resolução é a mesma do campo claro.- a resolução é a mesma do campo claro.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 7: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

ConfiguraçãoConfiguração

condensador

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

objetiva

Luz não coletada pela objetiva

Luz difratada pela amostraamostra

Anel de campo escuro

Trabalha-se nos planosTrabalha-se nos planosda imagem conoscópicada imagem conoscópica

Só entra luz na objetiva se houver material com índice derefração maior que o da água.

Page 8: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Sem amostra Com amostra

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 9: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Dados técnicosDados técnicos1)1) AAcessórios obrigatórioscessórios obrigatórios: anel de campo escuro para o condensador;: anel de campo escuro para o condensador;

Não há objetivas especiais para esta técnica.Não há objetivas especiais para esta técnica.

OBS: alternativamente, pode-se usar um anel de fase para objetiva de alta AN (100x) com uma objetiva OBS: alternativamente, pode-se usar um anel de fase para objetiva de alta AN (100x) com uma objetiva de baixa AN.de baixa AN.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Campo escuro pode ser usada em luz transmitida e refletida e em estereoscopia.

Page 10: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Dados técnicos: fatores queDados técnicos: fatores que

influenciam no tamanho do anelinfluenciam no tamanho do anel- Posição do anel no condensador;Posição do anel no condensador;- AN da objetiva e do condensador;AN da objetiva e do condensador;- O número de campo da ocular;O número de campo da ocular;- Aumento da ocular (menor aumento requer anel mais largo);Aumento da ocular (menor aumento requer anel mais largo);- Índice de refração do meio de montagem (maior IR requer anel mais largo).Índice de refração do meio de montagem (maior IR requer anel mais largo).

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 11: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Dados técnicos do anéisDados técnicos do anéisAcessórios obrigatóriosAcessórios obrigatórios: opções de : opções de

anéis de campo escuro.anéis de campo escuro.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 12: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Dados técnicos- como fazerDados técnicos- como fazer

- - realiza o alinhamento Koehler;realiza o alinhamento Koehler;- seleciona o anel de campo escuro;seleciona o anel de campo escuro;- movimenta-se o condensador verticalmente até obter o campo escuro movimenta-se o condensador verticalmente até obter o campo escuro

e com a amostra brilhante.e com a amostra brilhante.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

incorreto correto

Page 13: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Técnicas e contrasteTécnicas e contraste

Amostra Técnica Contraste

Transparente Campo claro 2-5% Corada Campo claro 25%

Transparente Contraste de fase 15-20% Transparente Contraste diferencial

de interferência 15-20% Transparente Campo escuro 60-75% Transparente Fluorescência 60-75%

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 14: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

IndicaçõesIndicações- Objetos muito pequenos, cuja visualização é difícil sobre um fundo claro;Objetos muito pequenos, cuja visualização é difícil sobre um fundo claro;- Pode permitir a detecção de estruturas muito menores que o poder de resolução do microscópio (ex.: 0.02 Pode permitir a detecção de estruturas muito menores que o poder de resolução do microscópio (ex.: 0.02 m), mas m), mas isto isto não significa que a técnica aumenta a resoluçãonão significa que a técnica aumenta a resolução..

- Em combinação com técnica de fluorescência;- Em combinação com técnica de fluorescência;

ExemplosExemplos: - bactéria; - organelas celulares,: - bactéria; - organelas celulares,- polímeros, cílios, flagelos, microtúbulos, filamentos de actina;polímeros, cílios, flagelos, microtúbulos, filamentos de actina;- partículas de prata e ouro usadas em técnicas de histoquímica.partículas de prata e ouro usadas em técnicas de histoquímica.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 15: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

LimitaçõesLimitações

- amostras com muitos pontos de causam espalhamento podem não produzir um amostras com muitos pontos de causam espalhamento podem não produzir um contraste adequado;contraste adequado;- estruturas que causam muito espalhamento podem mascarar outras estruturas estruturas que causam muito espalhamento podem mascarar outras estruturas mais delicadas que espalham pouca luz.mais delicadas que espalham pouca luz.

Microscopia de campo escuroMicroscopia de campo escuro

Page 16: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Microscopia de contraste de Microscopia de contraste de fasefase

ImagensImagens

Page 17: Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

Raiz de dente humanoPreparo por desgaste

Sal (cloreto de sódio)