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Page 1: Método Enzimático para Determinação de Glicose …E1lise%20de%20glicose.pdf · Método Enzimático para Determinação de Glicose Introdução No presente método, a glicose da

Método Enzimático para Determinação de Glicose

Introdução

No presente método, a glicose da amostra sofre a ação da glicose oxidase em presença

de oxigênio produzido peróxido de hidrogênio; este, em presença de fenol e de 4-

aminoantipirina, sofre a ação da peroxidase produzindo um composto róseo-avermelhado

(quinonimina) com máximo de absorção em 505nm.

Materiais:

- Espectrofotômetro

- Sistema de banho-maria

- Vidraria

- Pipetas manuais e automáticas

- Água destilada

- Reagente enzimático

- Amostra e padrões de glicose

Procedimento:

Preparar 10mL de soluções padrão de glicose nas seguintes concentrações: 100mg/dL,

75mg/dL, 65mg/dL, 35mg/dL e 15mg/dL .

Adicionar o reagente enzimático aos volumes dos padrões de acordo com a tabela:

Branco Padrões Amostra

Amostra - - 20µL

Padrões - 20µL -

Reagente Enzimático 2mL 2mL 2mL

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria a 37°C durante 15 minutos.

Determinar as absorbâncias dos padrões em 505nm e construir a curva analítica.

Determinar a absorbância da amostra desconhecida e, através da curva analítica, determinar

sua concentração.

Obs: A cor formada é estável por 60 minutos.