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Método Enzimático para Determinação de Glicose
Introdução
No presente método, a glicose da amostra sofre a ação da glicose oxidase em presença
de oxigênio produzido peróxido de hidrogênio; este, em presença de fenol e de 4-
aminoantipirina, sofre a ação da peroxidase produzindo um composto róseo-avermelhado
(quinonimina) com máximo de absorção em 505nm.
Materiais:
- Espectrofotômetro
- Sistema de banho-maria
- Vidraria
- Pipetas manuais e automáticas
- Água destilada
- Reagente enzimático
- Amostra e padrões de glicose
Procedimento:
Preparar 10mL de soluções padrão de glicose nas seguintes concentrações: 100mg/dL,
75mg/dL, 65mg/dL, 35mg/dL e 15mg/dL .
Adicionar o reagente enzimático aos volumes dos padrões de acordo com a tabela:
Branco Padrões Amostra
Amostra - - 20µL
Padrões - 20µL -
Reagente Enzimático 2mL 2mL 2mL
Homogeneizar bem e colocar em banho-maria a 37°C durante 15 minutos.
Determinar as absorbâncias dos padrões em 505nm e construir a curva analítica.
Determinar a absorbância da amostra desconhecida e, através da curva analítica, determinar
sua concentração.
Obs: A cor formada é estável por 60 minutos.