MCM é depositado de maneira bem regulada!

► Replicação = 1 vez só por ciclo (amplificação)Replicação = 1 vez só por ciclo (amplificação)► 4 coisas:4 coisas:

Replicação (como o ciclo celular) é regulada pelas Replicação (como o ciclo celular) é regulada pelas cinases/ciclinas e ligases de ubiquitinacinases/ciclinas e ligases de ubiquitina

MCM helicase é depositada de forma bem controladaMCM helicase é depositada de forma bem controlada►MCM MCM = mini-chromosome maintenance = mini-chromosome maintenance

(helicase)(helicase)►Cdt1/RLF-B = “carregador” da MCM

ORCs escolhem a origem e acendem como fósforo Saída de Go envolve estabilização de cdc6 que tem

a ver com o carregamento da helicase.

Coisa 1Coisa 1

Licensing = licenciar uma origem pra replicar

Por que raios é só em G1???Licenciar = por a placa

► 14 ORCs se ligam à cromatina após a fase S e antes de G1.► Cdc6 liga nas 14 ORCs no próximo G1pm► O “carregador” da MCM (cdt1) liga em cima disso► MCM chega, completando a tchurma = preRC (pré roberto

carlos)► Na hora do vamo vê mais 22 proteínas ativam o preRC e a

helicase abre as fitas e duas origens se formam!!

MCM 0000

cdc6

cdt1

Como quem “acendeu” é inibido a formar Como quem “acendeu” é inibido a formar preRC?preRC?

cdk2/A + geminina + cdc7/dbf4cdk2/A + geminina + cdc7/dbf4

E depois de S...E depois de S... --fosfatase cdc25 deixa formar cdk1/Bfosfatase cdc25 deixa formar cdk1/B-cdk1/B executa mitose e tem que sumir (culpa de APC)-cdk1/B executa mitose e tem que sumir (culpa de APC)-APC degrada a geminina liberando cdt1 em G1-APC degrada a geminina liberando cdt1 em G1-cdc6 na saída do ciclo é desfosforilado e procura ORCs...-cdc6 na saída do ciclo é desfosforilado e procura ORCs...

!

Licensing = ocorreria durante G1pm (ponto R)- ciclinas D, E e A decaem- inibidor genérico p27 inibe ciclina/cdk

Coisa 2Coisa 2

MCM é depositada de maneira bem MCM é depositada de maneira bem controladacontrolada

► Em metazoa cdt1 está ligado ao licensingEm metazoa cdt1 está ligado ao licensing superexpresse cdt1 que o DNA re-replicasuperexpresse cdt1 que o DNA re-replica

► Cdt1 é controlado por ubiquitinilações ( M,G1 S, Cdt1 é controlado por ubiquitinilações ( M,G1 S, G2)G2) Cdt1-P (cdk2/A) é alvo de SCF Cdt1-P (cdk2/A) é alvo de SCF tchautchau Cdt1 convidado por PCNA é alvo de CDL Cdt1 convidado por PCNA é alvo de CDL tchau tchau Geminina (S/M) inibe cdt1 (metazoa): perda = re-repGeminina (S/M) inibe cdt1 (metazoa): perda = re-rep

No novo G1, geminina

some e tem algum cdt1 para ajudar

nos novos preRC

Coisa 3Coisa 3

ORCs escolhem a origemORCs escolhem a origem

► Em levedura ORCs ligam na sequência da origem (ARS)Em levedura ORCs ligam na sequência da origem (ARS) Ficam lá o tempo todo! Desligadas por fosforilações (cdk1/Ficam lá o tempo todo! Desligadas por fosforilações (cdk1/BB))

► Em metazoa = sequência + fatores epigenéticosEm metazoa = sequência + fatores epigenéticos Modificações em subunidades Modificações em subunidades Perda de atividade de ORC durante Perda de atividade de ORC durante

a mitosea mitoseORC 2-5 = grudeORC 1 e 6 associadas

ORC 1 é sequestradapor cdk1/ADaí SCF ubiquitinila!citoplasmadegradação

Em M, ORC 1 estáhiperfosforiladaSaída de M:A some ORC 1 livre!

Coisa 4Coisa 4

Papel de cdc6Papel de cdc6

► Em levedura cdc6 acumula em G1Em levedura cdc6 acumula em G1S e em S é S e em S é degradadadegradada

► Em mamíferos ela é importante na saída de GoEm mamíferos ela é importante na saída de Go fosforilada por cdks, não liga APC e não é degradada.fosforilada por cdks, não liga APC e não é degradada.

► Ela fosforilada, segura a mitose, até que S se Ela fosforilada, segura a mitose, até que S se completecomplete Atuando sobre chk1 que inibe cdc25 logo cdk1/B não se Atuando sobre chk1 que inibe cdc25 logo cdk1/B não se

formaforma