Laboratório de Medicina Genômica

Centro de Pesquisa Experimental

Hospital de Clínicas de Porto Alegre

Silvia Liliana Cossio, PhD.

MARCADORES MOLECULARES DE MARCADORES MOLECULARES DE DIAGNDIAGNÓÓSTICO ASOCIADOS A CSTICO ASOCIADOS A CÁÁNCER NCER

HEREDITARIOHEREDITARIO

Cáncer

• Es un problema significativo de salud pública en el mundo

• La incidencia está en aumento

• Se lo define como una enfermedad genómica, que surge como

consecuencia de alteraciones que se acumulan en el material genético

de células normales, las cuales sufren transformaciones hasta

volverse malignas.

• El proceso carcinogénico resulta de múltiples etapas

Displasia Carcinoma in situ

Carcinoma invasivo

Normal Hiperplasia

Tiempo

Secuencia adenoma-carcinoma , Fearon y Vogelstein, 1990

Factores de riesgo

Historia

personal/hábitos Genéticos

Ambiental

Enfermedad multifactorial

Factor de riesgo: EDAD

400

300

200

100

Riesgo de Cáncer y Edad

Número de casosde cáncer(por 100,000 pers.)

Edad en años

Cólon

Mama

0 20 40 60 80

Esporádico

(70-80%)

Familiar (20-30%)

Hereditario (5%-10%)

Tipos de cáncer

Mutaciones germinativasMutaciones somáticas

Mutación en

células de un tejido Mutación

en células

germinales

Todas las

células

afectadas

Progenitor Prole

Ocurre a edad temprana

Alteraciones heredadas en genes de alta

penetrancia

Alto riesgo de desarrollar cáncer

Otros tumores asociados

Varias generaciones afectadas

ESPORÁDICO HEREDITARIO

Ocurre a edad avanzada

Acumulo de alteraciones genéticas a lo

largo de la vida del individuo

Bajo riesgo de desarrollar cáncer

Sin desarrollo de tumores asociados

Casos aislados de individuos afectados

Qué es un Síndrome de Predisposición

Hereditária al Cáncer?

Condición en la que un indivíduo hereda una probabilidad mayor de

desarrollar determinado(s) tipo(s) de tumor

Esta predisposición es causada por mutaciones en:

oncogenes,, genes supresores de tumor o genes de reparo del DNA

El indivíduo afectado hereda una predisposición al cáncer

No todo indivíduo con un gen mutado desarrolla cáncer

Existen factores externos que influencian la penetrancia

Factores que afectan la Penetrancia

Factores

hormonales y

reproductivos

Genes

modificadores Exposición a

carcinógenos

Respuesta al

daño del DNA

Cáncer de Mama y Ovario Hereditario - Hereditary Breast and Ovarian Cancer

Syndrome (HBOC)

Síndrome de Lynch - Lynch Syndrome (HNPCC)

Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like - LFS and LFL

Cáncer de Mama y Colon Hereditario - Hereditary Breast and Colon Cancer

Syndrome (HBCC)

Poliposis Asociada a MUTYH - MUTYH Associated Polyposis (MAP)

Laboratório de Medicina Genômica:

Síndrome HBOC

Síndrome autosómica dominante, causado por mutaciones germinativas en BRCA1 y BRCA2

Mutaciones en estos genes predisponen al desarrollo de ciertos tipos de tumores: mama, ovario,

próstata, páncreas, melanoma.

Screening de mutaciones germinativas:

DHPLC � 5382insC (BRCA1),

PCR-Secuenciamiento � 185delAG y 3450del4 (BRCA1)

5382insC y 6174delT (BRCA2)

MLPA � reordenamientos génicos en BRCA1/2

• MLPA: Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification

Hibridización

Ligación

Amplificación

Electroforesis capilarwww.mrc-holland.com

Síndrome de Lynch

Síndrome autosómico dominante de predisposición a cáncer de colon, endometrio, ovario,

intestino delgado, tracto hepatobiliar, tracto uroepitelial, estómago, cerebro.

Mutaciones germinativas en genes del sistema MMR de reparo (MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2)

han sido asociadas con SL.

Screening de mutaciones germinativas del SL:

Análisis por IHQ � expresión de proteínas

Analisis de IMS � Inestabilidad de Microsatélites (TT y TN)

Análisis por MS-MLPA � análisis de metilación

mlh1 -

mlh1 +

pms2 -msh 6 -msh 2 -

pms2 +msh6 +msh2 +

• IHQ

PCR Multiplex SSCP BAT26

TN TTTN

TN

TN

TT

TT

TT

NR24

PentaC

NR21

BAT25

MONO27

BAT26

PentaD

Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like

Síndrome autosómico dominante caracterizado por predisponer a pacientes portadores de

mutación germinativa en TP53 a varios tipos de tumores en edad joven.

Entre los principales tumores asociados: tumores de mama, carcinomas, sarcomas, sistema

nervioso central, adrenocortical.

Otros tumores asociados (LFL): leucemias, melanomas, cancer colorrectal, de pulmon,

gastrico, de celulas germinales, plexo coroideo y tumor de Wilms.

Screening para mutaciones germinativas en TP53:

RT-PCR (Ensayo TaqMan) � mutación R337H (exon 10),

PCR-Secuenciamiento � gen completo

Análisis por MLPA � reordenamientos génicos

Síndrome HBCC

Mutaciones germinativas en el gen CHEK2 predisponen al desarrollo de cáncer de mama y colon

principalmente.

La mutación germinativa 1100delC (exón 10) es la mutación mas comúnmente encontrada en

familias HBCC.

Screening de mutación germinativa:

Long-range PCR + Secuenciamiento � mutación 1100delC

Síndrome MAP

Síndrome autosómico recesivo que causa oligopoliposis colónicas en presencia de mutaciones

germinativas en el gen MUTYH.

Clínicamente, pacientes con MAP tienen características similares a individuos con FAP

atenuada, presentando entre 15 a 100 pólipos con histología idéntica a los casos de FAP.

El fenotipo de MAP puede solapar completamente al fenotipo de poliposis clásica, haciendo

difícil el diagnóstico diferencial.

Screening de mutaciones germinativas en MUTYH:

RT-PCR (ensayo TaqMan) � Y179C (exón 7) y G396D (exón 13)

PCR-Sequenciamiento � gen completo

Por qué es importante identificar

individuos en riesgo para cáncer

hereditário?

• Riesgo de cáncer superior al de la población

• Riesgo para diversos tipos de tumores

• Medidas eficaces de reducción de riesgo

• Tratamientos específicos para formas hereditarias de cáncer

?

Avaliação do Heredograma: HNPCC

Critérios de Amsterdam

Qual gene MMRmutado?

IHQ

Expressão normal

Encerrarinvestigação

Qual gene MMRalterado?

Positivo

Diagnóstico clínico deHNPCC

IMS

Seqüenciamentogene(s) MMRselecionado(s) Metilação

IHQ

Extração e quantificação

DNA TEP

Negativo

Expressão anormal

Critérios de Bethesda

Não metilado Metilação somática

Especialmente se hMLH1

Implementar um screening histo-molecular para casos de sospecha de síndrome de Lynch en el HCPA:

Laboratório de Medicina Genômica, CPE – HCPA

Coordinador: Patricia Ashton-Prolla

Ana Paula Brandalize (biol)

Ingrid Petroni Ewald (biol)

Juliana Giacomazzi (biomed)

Diego Paskulin (biol)

Mariana Fitarelli (biol)

Barbara Alemar (biol)

Gabriel Macedo (biol)

Patricia Izetti (med)

Patricia Silva (enf)

Telma Machado (enf)