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Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL

Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres

VINAGRE CORANTES Método 09

Edição: 1 Revisão: 0 Página 1 de 4

1. MÉTODO Arata e cromatográfico. 2. PRINCÍPIO Baseia-se na extração e fixação em lã do corante presente na amostra, solubilização, separação e identificação através de cromatografia ascendente em papel. 3. MATERIAL 3.1. EQUIPAMENTOS a) Chapa aquecedora b) Banho-maria c) Secador de cabelo 3.2. REAGENTES E SOLUÇÕES a) Ácido tartárico a 10% b) Ácido clorídrico 1N c) Ácido acético p.a. d) Álcool etílico a 50% e) Éter etílico p.a. f) Hidróxido de sódio 1N g) Hidróxido de amônio p.a. h) Éter de petróleo p.a. 3.3. VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS a) Micropipeta (ou tubo capilar) b) Béquer de 150 e 500 mL c) Proveta de 100 mL d) Pipeta graduada de 5 e 10 mL e) Bastão de vidro f) Pinça g) Papel Whatman nº 1 h) Cuba cromatográfica i) Lã natural: desengordurar fios de lã com éter de petróleo e secar. Aquecer com solução de

hidróxido de amônia a 5% (v/v) durante 1 hora a 80º C. Lavar com água destilada a quente e secar.

j) Algodão hidrófilo. 4. PROCEDIMENTO a) CORANTES ARTIFICIAIS ÁCIDOS Em béquer de 250 mL, colocar aproximadamente 100 mL ou 100 g da amostra (aumentar ou diminuir a alíquota de acordo com a concentração do corante), aquecer até que o volume seja reduzido a 1/3.





Acidificar com ácido tartárico e adicionar 0,3 g de lã natural tratada. Deixar em ebulição moderada por cerca de dez minutos. Retirar a lã e lavar com água corrente. Passar a lã para um béquer contendo 100 mL de água destilada e 2 mL de ácido tartárico. Aquecer por 5 minutos e lavar a lã em água corrente. Repetir esta operação até que a água da lavagem esteja incolor. Transferir a lã para um béquer contendo 20 mL de água destilada e algumas gotas de hidróxido de amônio. Aquecer cerca de 5 minutos para solubilizar o corante presente, desprezar a lã (se necessário concentrar ou diluir o extrato). b) CORANTES ARTIFICIAIS BÁSICOS Proceder como em corantes ácidos, porém, substituir a acidificação por alcalinização (devido às características opostas), usando solução de hidróxido de sódio para estabelecer as condições de fixação do corante básico. Usar ácido tartárico para solubilizar o corante. c) CORANTES NATURAIS Em béquer de 250 mL colocar aproximadamente 100 mL da amostra, (aumentar ou diminuir a alíquota de acordo com a concentração do corante), aquecer até que o volume seja reduzido a 1/3. Acidificar com ácido clorídrico 1N e realizar extração com 30 mL de éter etílico. Repetir a extração, se necessário, e juntar as fases. Caso a fase aquosa se apresente corada, neutralizar com solução de hidróxido de sódio 1N e realizar extração com 30 mL de éter etílico. Repetir a extração se necessário, e juntar as fases. Aquecer em banho-maria até eliminar todo o solvente. Dissolver o resíduo com cerca de 50 mL de álcool etílico a 50%. d) IDENTIFICAÇÃO DO CORANTE ARTIFICIAL Aplicar os padrões e o extrato obtido em (4.a) ou (4.b) a 3 cm da base do papel Whatman distanciados 3 cm entre si. Secar com ar quente. Colocar o papel em cuba cromatográfica previamente saturada com a fase móvel (um dos solventes abaixo relacionados), deixar eluir até separação dos corantes. Comparar a cor e o ''Rf'' do corante padrão com o corante correspondente da amostra. e) Solventes (fase móvel): Nº 01 - 1 mL de hidróxido de amônio p.a. + 99 mL de água. Nº 02 - Cloreto de sódio a 2,5% aquoso. Nº 03 - Cloreto de Sódio a 2% em álcool etílico a 50%. Nº 04 - 50 mL de n-butanol + 25 mL de etanol + 10 mL de ácido acético p.a. + 25 mL de água destilada.





Nº 05 - 50 mL de n-butanol + 25 mL de etanol + 10 mL de hidróxido de amônio p.a. + 25 mL de água destilada. Nº 06 - 100 mL de hidróxido de amônio a 5% v/v + 2 g de citrato de sódio. Nº 07 - 80 g de fenol + 20 g de água destilada. Nº 08 - 100 mL de isopropanol + 100 mL de hidróxido de amônio concentrado + 10 mL de água destilada. Nº 09 - Nitrato de potássio aquoso saturado. Nº 10 - Ácido cítrico a 2%. Nº 11 - 40 mL de ciclohexano + 100 mL de éter etílico. Nº 12 - 60 mL de iso octano + 20 mL de acetona + 20 mL de éter etílico. Nº 13 - 40 mL de éter de petróleo + 60 mL de acetona. Nº 14 - 50 mL de éter de petróleo + 35 mL de benzeno + 10 mL de clorofórmio + 10 mL de acetona. Nota: Nos casos em que ocorrer desvios devido a presença de algum interferente, proceder através de uma das seguintes formas:

a) Recortar (papel) a mancha, preparar uma pequena solução e tornar a cromatrografar. b) Aplicar o corante extraído da amostra, o padrão e uma mistura (na mesma proporção) de corante + padrão. Desenvolver o cromatrograma com a mesma fase móvel. Repetir a técnica usando outra fase móvel.

5. CÁLCULO E EXPRESSÃO DO RESULTADO Presença de corantes artificiais é interpretada pela coloração que a lã apresenta (ítem 4.a). Corantes artificiais ácidos colorem a lã. A identificação dos corantes é interpretada pela comparação da cor e pelos “Rf” das manchas, calculados a partir do item (4.d).

Ds

DaRf =

Onde: Da = Distância em cm percorrida pela mancha do corante da amostra e do padrão (distância entre a linha de base e o centro da mancha). Ds = Distância em cm percorrida pela fase móvel (desde a linha de base até a frente da fase móvel). REFERENCIA BRASIL. Ministério da Agricultura. Portaria nº 76 de 26 de novembro de 1986. Dispõe sobre os métodos analíticos de bebidas e vinagre. Diário Oficial da República Federativa do Brasil , Brasília, 28 nov. 1986. Seção 1, pt. 2.





*INSTITUTO de tecnologia de alimentos. Manual técnico de análise química de alimentos. Campinas, 1990.

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