manipulaÇÃo do dna in vitro: dna- recombinante e pcr

Download MANIPULAÇÃO DO DNA in vitro: DNA- recombinante e PCR

If you can't read please download the document

Post on 18-Apr-2015

117 views

Category:

Documents

7 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

  • Slide 1
  • MANIPULAO DO DNA in vitro: DNA- recombinante e PCR
  • Slide 2
  • CLIVAGEM DO DNA EM FRAGMENTOS ENDONUCLEASES DE RESTRIO Anlise Molecular do DNA somente possvel fragmentando o DNA em pequenos tamanhos: atravs de endonucleases de restrio (enzimas bacterianas que clivam internamente o DNA) atravs de endonucleases de restrio (enzimas bacterianas que clivam internamente o DNA) Tipo de nuclease que cliva uma cadeia dupla de DNA sempre que identificar uma sequncia especfica de 4 a 8 pares de bases, produzindo um grupo 3- OH em uma extremidade e um grupo 5- fosfato na outra. As sequncias reconhecidas apresentam nas duas cadeias complementares sequncias idnticas mas invertidas: PALNDROMO.
  • Slide 3
  • CLIVAGEM DO DNA EM FRAGMENTOS NOMENCLATURA DAS ENDONUCLEASES DE RESTRIO Denominao de acordo com o organismo da qual foi isolada. Primeira letra corresponde ao gnero do microrganismo. As duas letras seguintes referem- se a espcie e um nmero final indica a ordem da descoberta da enzima no organismo. Ex:. Hae III (3 ER isolada da bactria Haemofilus aegyptius)
  • Slide 4
  • CLIVAGEM DO DNA EM FRAGMENTOS
  • Slide 5
  • DNA LIGASE Enzima que promove a ligao dos fragmentos de DNA em vetores previamente clivados por endonucleases de restrio. O DNA ligase requer um grupo OH livre na extremidade 3' de uma das cadeias de DNA e um grupo fosfato na extremidade 5' da outra cadeia.
  • Slide 6
  • REAO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR) Ferramenta que permite amplificar uma seqncia especfica de DNA (seq. alvo) em milhes de vezes dentro de poucas horas (Xerox) PCR citada em mais de 200.000 trabalhos cientficos (08/2005) HISTRIA
  • Slide 7
  • REAO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR)
  • Slide 8
  • 1c1a2c2a3c3a4c4a5c5a6c6aP P = padro de tamanho molecular lambda Hind III Nc = controle sem DNA molde Ne = amostra com DNA molde sem resultado positivo (molde?) Gel ser refeito utilizando-se outros PCRs Bandas visveis [Gel de agarose 1% corado com brometo de etdio e fotografado sob luz UV]
  • Slide 9
  • CROMATOGRAFIA POR SOUTHERN BLOT 2. HIBRIDIZAO DA SONDA A FRAGMENTOS DE DNA
  • Slide 10
  • ANLISE DE POLIMORFISMOS DE DNA (RFLP)

Recommended

View more >