ihq mama

Imuno-histoqumica no cncer de mama - Prof. Andra Rodrigues Cordovil Pires - Fonte Medicina Diagnstica

Patologia Cirrgica

Exame anatomo-

patolgico ATO

MDICO!

macroscopia clivagem processamento incluso - parafina

colorao desparafinizao microtomia bloco

lminas microscopia laudo histopatolgico

Exame Histopatolgico


Fixao

Preservar os componentes da amostra tecidual.

Proteger o material de dano osmtico (distenso ou retrao)

Para a imuno-histoqumica: tornar o antgeno insolvel, mas ainda disponvel para a reao com o anticorpo

primrio.

A utilizao de soluo de formol a 10% tamponado ou formol-salina melhora a imuno-reatividade do material.

Se no for possvel o preparo de formol tamponado, utilize pelo menos a

soluo de formol-salina a 10%

100ml de formol + 900 ml de soluo fisiolgica


Imuno-histoqumica

Mtodo de escolha: IHQ em material fixado em formol e includo em parafina

Vantagens:

material coletado e processado convencionalmente: bipsias incisionais e excisionais, core biopsy, peas cirrgicas radicais e preparados citopatolgicos.

permite utilizao de material arquivado por muitos anos.

lminas permantentes

custo acessvel


Imuno-histoqumica

Receptor de estrognio Oncoprotena c-erbB-2 GFAP

marcao nuclear marcao de membrana marcao citoplasmtica


Imuno-histoqumica

Enzima, substrato e cromgeno mais utilizado: peroxidase - H2O2 - DAB (positividade marrom)

Padro de reao nuclear

membrana celular

citoplasmtico

etc...


Imuno-histoqumica

Controles da reao (interno e externo) positivo

negativo

intensidade

Controle de qualidade intra-laboratorial

externo


Receptores hormonais

Importante fator prognstico e orientador da terapia:

RE + hormonioterapia

RE - sem hormonioterapia,

quimioterapia (?)

RP + maior sobrevida,

independente do

tratamento utilizado



Quando considerar positivo?

toda imunopositividade nuclear com o anticorpo anti receptor de estrognio deve ser considerada como resultado positivo e indicativa de terapia anti estrognica para a paciente

(NIH - National Institutes of Health, EUA, 2001).

Como relatar o resultado?

informar o valor percentual das clulas neoplsicas do componente infiltrante com imuno-positividade nuclear

(CAP - Colgio Americano de Patologistas, 1999).



Receptor de estrognio (negativo) Receptor de estrognio (25-50%)

Receptor de estrognio (50-75%) Receptor de estrognio (>75%)


Receptor de estrognio


IHQ Receptor de progesterona


Oncoprotena c-erbB-2 / Her2-neu

erbB-2: proto-oncogen que codifica o receptor para o fator de crescimento epitelial (EGF-R).

Faz parte da famlia dos receptores de membrana celular.

c-erbB-2: oncogen que age atravs da superproduo de receptores de membrana para o EGF por amplificao gnica.



Fator prognstico:

positivo mau prognstico (maior proliferao e atipias

celulares, logo, encurtamento do perodo livre de metstases e

menor sobrevida)

Fator preditivo (terapia com Herceptin / Trastuzumab):

0 ou 1+ = negativo sem imunoterapia

2 + = positivo fraco caso FISH + imunoterapia

3+ = positivo forte imunoterapia



Quando considerar positivo e como relatar o resultado?

Ausncia ou menos de 10% de imunopositividade na membrana citoplasmtica das clulas tumorais

= 0 = Negativo

Imunopositividade fraca em parte da membrana citoplasmtica em mais de 10% das clulas tumorais

= 1+ = Negativo

Imunopositividade fraca a moderada em toda a membrana citoplasmtica em mais de 10% das clulas tumorais

= 2+ = Fracamente positivo

Imunopositividade intensa em toda a membrana citoplasmtica em mais de 10% das clulas tumorais

= 3+ = Fortemente positivo



A

B C

A. 1+ negativo

B. 2+ positivo

C. 3+ positivo


Protena p53

Anti-oncogene que induz a clulas apoptose ou correo de erros do DNA.

Inativao (por mutaes ou bloqueio) leva perpetuao de clulas com erros genticos e DNA instvel. Ocorre em pelo menos 50% das neoplasias humanas e em 10-15% dos cnceres de mama.


Protena p53

Fator prognstico:+ mau prognstico (instabilidade do DNA, causando novas mutaes, logo, causando maior agressividade tumoral, com encurtamento do perodo livre de metstases e menor sobrevida)

Inativao obsevada atravs de imunopositividade (acmulo intranuclear da protena inativa)

No orientador de terapia

Quando considerar positivo?toda imunopositividade nuclear deve ser considerada como resultado positivo

informar o valor percentual das clulas neoplsicas do componente infiltrante com imuno-positividade nuclear


Protena p53


Antgeno de proliferao celular Ki67

Considerado o melhor marcador de proliferao celular

Fator prognstico:> 40% mau prognstico (grande proliferao celular, causando maior crescimento tumoral, com encurtamento do perodo livre de metstases e menor sobrevida).

Ki67 < 40%

Ki67 > 40%

12 24 36 48 meses de sobrevida

100%

50%

0%


Antgeno de proliferao celular Ki67

No orientador de terapia

Quando considerar positivo?

toda imunopositividade nuclear deve ser considerada como resultado positivo

informar o valor percentual das clulas neoplsicas do componente infiltrante com imuno-positividade nuclear.


IHQ no cncer de mama

Nossa experincia: IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama, no perodo de maio de 2005 a abril de 2008 (36 meses)

Resultados: ndices de imunopositividade encontrados: RE= 66,7% (n=1535)

RP= 63,2% (n=1496)

c-erbB-2 / Her2-neu= 16,7% (n=1332)

Triplo negativo: 16,7% (n=1319)

Concluso: os resultados obtidos esto de acordo com os dados da literatura.



36%

10%

7%6%

7%

34%

Receptor de Estrognio

> 75% 50-75% 25-50% 10-25% < 10% neg

22%

11%

9%

8%13%

37%

Receptor de Progesterona

> 75% 50-75% 25-50% 10-25% < 10% neg

IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

no perodo de maio de 2005 a abril de 2008 (36 meses)



IHQ em 1557 casos consecutivos de cncer de mama,

no perodo de maio de 2005 a abril de 2008 (36 meses)

53%

9%

31%

7%

Receptores Hormonais

RE+ RP+ RE+ RP neg RE neg RP neg RE neg RP+

83%

6%11%

c-erbB-2 / Her2-neu

neg 2+ 3+



Permite a Classificao Molecular

Baseada nos padres de imuno-reatividade dos anticorpos anti receptor de estrognio, receptor de progesterona e oncoprotena c-erbB-2 Her2-neu e citoqueratinas basais (citoqueratinas 5-6, 14 e 17).



Outras aplicaes: definio de invaso

Anticorpos para camada basal mioepitelial: calponina, actina de msculo liso, citoqueratinas 5-6, citoqueratina 34 E12, p63, CD10...

Actina de musculo liso Citoqueratinas 5-6



Calponina



Outras aplicaes: definio de tipo histolgico

Anticorpo anti Caderina-E positivo nas carcinomas ductais e negativo nos carcinomas lobulares.

Ductos normais remanescentes positivos e tumor negativo= carcinoma lobular



Outras aplicaes: definio de leses pr-malignas

Anticorpos anti Citoqueratina 34bE12 e Citoqueratinas 5-6 so positivos nas leses hiperplsicas e negativos nas leses com atipias e nos carcinomas in situ.

Ducto com alterao de clulas colunares com atipia (flat epithelial atypia, DIN1A)



Outras aplicaes: definio de outros tipos de neoplasias

Angiossarcoma CD31 Angiomiofibroblastoma CD34


Patologia e o futuro ?

ihq mama

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