Identificação de Enterobactérias.

Dra. Tânia Mara Ibelli VazPesquisador Científico

Instituto Adolfo Lutz - São Paulo

índice

Família EnterobacteriaceaePatogeniaIsolamento e identificação de enterobactériasAspecto das colôniasIdentificação Bioquímica ( cultura pura)Reação de VM e VPEscherichia coliSalmonellaShigellaKlebsiellaEnterobacterSerratiaCitrobacterProteus - Providencia - MorganellaFluxograma BGN OXIDASEConsiderações finais

Introdução

Definição

• Bacilos Gram negativos • AAF / Fermentadores da glicose• Oxidase negativa e catalase +• Móveis / imóveis • Cresce em meios comuns

Habitat

Plantas, solo, água, intestino do homem e animais

Família Enterobacteriaceae

Introdução

Nomenclatura e Classificação

• Métodos Fenotípicos• Moleculares novas espécies reclassificação

Classificação• Gêneros ( 42) • Espécies ( centenas )• biotipos e sorotipos

Complexos

Família Enterobacteriaceae

Classificação - patogenia

- Enteropatógenos

- Infecções nosocomiais - espécies importantes

- Outras espécies - raras em material clínico

isoladas em : meio ambiente

plantas

animais

Identificação de Enterobactérias

Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normaldo homem.

• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário

• Abcessos, pneumonia, meningites

• Infecções nosocomiais

Família EnterobacteriaceaePatogenia

Infecções intestinais

Características• normalmente na comunidade• DTA – doença transmitida por alimento • surtos / casos isolados• hospitalar

Patógenos entéricos clássicos

Salmonella sppShigella sppE.coli - categorias diarreiogênicasYersinia enterocolitica

Família EnterobacteriaceaePatogenia

Infecções extra-intestinais Comunidade Hospitalar

• Qualquer espécie• Fatores de risco:

PacienteVeículos de transmissãoAlimentos contaminados

Espécies mais comuns

Escherichia coliKlebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytocaProteus mirabilisEnterobacter sppSalmonella ( sorotipos)Serratia marcescensCitrobacter sppProvidencia spp

Família EnterobacteriaceaePatogenia

ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIASFamília Enterobacteriaceae

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN

( 18 a 24h 1 mm de diâmetro).

1- Exame macroscópico da cultura:

• Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA )

• Tempo de crescimento e tamanho da colônia

• Observar pureza da cultura

2-Exame microscópico da cultura:

• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc

Aspecto das colônias

Agar MacConkey

Aspecto das colônias

Salmonella. E.cloacaeE.coli

Salmonella.

E. coli

Aspecto das colônias

E. cloacae

Família Enterobacteriaceae

Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivos• IAL (Pessoa e Silva) • EPM-MILI• TSI

IAL

Provas complementares:

Fermentação de açúcaresLDC- ODC - ADHCiSi

Pesquisa de enzimasDNasegelatinase,lipase, NAR, ONPGase

Identificação Bioquímica

Gram Oxidase VM e VP

Série completa - 47 testes

Família Enterobacteriaceae

Reação de VM e VPFamília Enterobacteriaceae

• Enterobacter• Klebsiella• Serratia

Maioria das espécies dos outros Gêneros• Salmonella• Shigella• E.coli• Proteus• Morganella• Providencia• Citrobacter• Kluyvera

Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -

Citrato de Simmons

Escherichia coli

Glicose+/Gás+/-sacarose+/-urease-*H2S-

TDA-indol+LDC+/-Motilidade+/-

lac+CISI -

K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)

Diagnóstico Diferencial

Citrobacter amalonaticus e C. diversus( LDC-/motil.+CiSi+)

Aeromonas

Marcadores Epidemiológicos

Infec. Intestinais SorotipagemFatores de virulência

Infec. Extra-intestinaisSorotipagemMet. moleculares

Prova

Salmonella

Glicose+/gás vsac -H2S +urease-TDA - indol -LDC +Mov. +

CiSi+Lac -

Diagnóstico diferencial

Citrobacter spp ( H2S + )Proteus

glicerol

Marcadores Sorotipagem Fagotipagem Moleculares

Prova de

Fermentação

Shigella

E.coli ( LDC - / Mov.-)

LactoseCi Christ.

Acetato Trab.

Marcadores Sorotipagem Met.moleculares

Glic.+ /gás -sac -urease -TDA -H2Sindol vLDC -Mov. -

CiSi -

Lac -

Diagnóstico diferencial

CitratoSódio

Klebsiella

Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)

ADHODC

Fermentação

Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Diagnóstico diferencial

Lac+CiSi +

Enterobacter

LDC,ODC,ADHMotilidade

DNaseFermentação

EnterobacterKlebsiellaSerratia

E.cloacae

Marcadores Sorotipagem Met. moleculares

Diagnóstico diferencialLac+CiSi+

Serratia

Espécies de Serratia

LDC,ODC, malonato,

fermentação , pigmento

Marcadores: Sorotipagem Met.moleculares

Glic.+ / gás-sac. -urease -H2S -TDA -indol -LDC +Mov. +

CiSi +Lac -

DNase +Gelatinase +

Lipase +

Citrobacter

Glic.+ / gás-sac =Vurease -H2S = VTDA -indol = VLDC -Mov. +

CiSi +Lac +

Espécies de Citrobacter

ODC, indol, H2S malonato

fermentação

Glic.+/ gás -sac. -urease +TDA +H2S = Vindol = VLDC -Mov. +

CiSi +Lac +

ProteusProvidenciaEspécies H2S +BGN NF

SwarmingTDA, H2S, ODC,

gelatinase,fermentação

Proteus - Providencia - Morganella

Diagnóstico diferencial

Fluxograma

BGN BGN OxidaseOxidase

Lac + Lac -

E.coliEnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

ShigellaSalmonellaSerratiaProteusProvidenciaMorganella

Ágar Mac ConkeyÁgar Mac Conkey

IALIALIALIAL

Cit. SimmonsCit. SimmonsCit. SimmonsCit. Simmons

+

EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

EnterobacterKlebsiellaKluyveraCitrobacter

-E.coliE.coli

VP +VP +

+

SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)

SalmonellaSerratiaProteus/Prov.(V)

-ShigellaMorganellaShigellaMorganella

IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

Enterobactérias em microbiologia clínica Poucas espécies

Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas podem ocorrer(isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais)

PROBABILIDADES

• Tratar-se de uma espécie rara• Cepa contaminada • Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação)• Manipulação errada ( concentração do inóculo)• Composição e quantidade do meio ( substrato presente)• Controle de Q

IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

O que fazer?

Checar tudo:

• Pureza da cultura

• Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os meios anteriormente utilizados

•Repetir todos os testes em outro sistema de identificação ou utilizar partidas diferentes do meio.

•Encaminhar para laboratórios de referência

Considerações finais

Importância da caracterização das espécies

• Evitar falsos surtos

• Não identificação do surto

• Atenção para cepas atípicas

• Atenção para espécies raras

• Atenção para pureza das culturas