IDENTIFICAÇÃO DE CEPAS DE ESCHERICHIA COLIENTEROPATOGÊNICAS EM AMOSTRAS DE FEZES, POR

REAÇÃO DE IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA

Ieda Maria Longo *Octavio Ricci Jr. *Carlos Augusto Pereira *

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LONGO, I. M. et al. Identificação de cepas de Escherichia coli enteropatogênicasem amostras de fezes, por reação de imunofluorescência direta. Rev. Saúdepúbl., S. Paulo, 14:199-204, 1980.

RESUMO: Foi realizado diagnóstico etiológico de casos de diarréia agudaem 121 pacientes internados na Clínica Pediátrica do Hospital da Santa Casade São Paulo, Brasil. Foram utilizados os métodos bacteriológico clássico ede reação de imunofluorescência direta para a identificação de cepas de Esche-richia coli enteropatogênicas: para estudo da sensibilidade das cepas de Esche-richia coli isoladas, a diferentes antibióticos, foi usado o método de Concen-tração Inibitória Minima (CIM). Dos 56 casos positivos, 89,3% correspondiama diferentes sorotipos enteropatogênicos de Escherichia coli, quando utilizadaa técnica de imunofluorescência direta. O método bacteriológico clássico revelouainda, nos 121 casos examinados, 4 cepas de Salmonella e 2 de Shigella. Noestudo da CIM verificou-se maior sensibilidade das cepas de Escherichia colienteropatogênicas estudadas à Gentamicina e Amikacina, do que aos outrosantibióticos.

UNITERMOS: Escherichia coli. Reação de imunofluorescência direta. Técnicasbacteriológicas.

* Do Departahento de Microbiologia e Imunologia da Faculdade de Ciências Médicas da SantaCasa de São Paulo (FCMSCSP) — Rua Dr. Cezário Motta Júnior, 112 — 01221 — São Paulo,SP — Brasil.

I N T R O D U Ç Ã O

Em trabalhos publicados nos últimosanos, vários autores 3,7,8 mostraram a apli-cação do método de imunofluorescênciadireta na pesquisa de cepas de Escherichiacoli enteropatogênicas, obtendo resultadossatisfatórios do ponto de vista de especi-ficidade, maior sensibilidade que a copro-cultura e bons resultados quanto à facili-dade e rapidez de execução da técnica.Estes últimos fatores são importantes, tantopelo número de exames solicitados, como

pelo rápido diagnóstico e isolamente pre-coce do paciente 4.

O presente estudo visa a verificação daetiologia de casos de diarréia aguda, naClínica Pediátrica do Hospital da SantaCasa de São Paulo, e a determinação dasensibilidade a antimicrobianos, de cepasde Escherichia coli dos sorotipos tidos co-mo enteropatogênicos. O estudo da sensi-bilidade das cepas não enteropatogênicasde Escherichia coli foi realizado em traba-lho anterior 5.

MATERIAL E MÉTODOS

— Pacientes — Foram colhidas amostrasde fezes de 121 crianças com até 3 anosde idade, internadas na Clínica Pediá-trica do Hospital da Santa Casa deSão Paulo, apresentando quadro dediarréia aguda.

— Colheita do material — Foram utiliza-dos, para colheita de fezes, "swabs"devidamente acondicionados em tubosde ensaio esterilizados por autoclavação.

— Reação de imunofluorescência direta pa-ra pesquisa de Escherichia coli entero-patogênica (RIFD). — Foi realizada se-gundo técnica já anteriormente padro-nizada e descrita3. Utilizamos sorosconjugados com fluoresceina anti-Esche-richia coli enteropatogênicas, preparadospelo laboratório Difco, que são forne-cidos comercialmente. Estes soros sãoagrupados em 3 "pools" contendo anti-corpos anai-Escherichia coli dos seguin-tes sorotipos1;

— Isolamento e identificação bacteriológica— Foi feita semeadura do material obti-do em duas placas de Petri, uma commeio de MacConkey(MC) e outra comcom meio SS; procedeu-se à identifica-ção bioquímica, a partir do meio deMC de no máximo 12 colônias lactosepositivas, servindo o meio SS para aidentificação de outros agentes etioló-gicos. As colônias de Escherichia coliisoladas foram testadas novamente porimunofluorescência, visando, deste for-ma, a confirmação da RIFD.

— Determinação da concentração inibitóriamínima (CIM) — As cepas de Escheri-chia coli isoladas foram mantidas emmeio "Stock" (Difco), por um períodode 2 meses, sendo posteriormente testa-das frente a 5 antimicrobianos, a saber:Kanamicina, Cloranfenicol, Neomicina,Gentamicina e Amikacina. Essas cepasdo estoque foram posteriormente repi-cadas em caldo nutriente e a partir destedeterminou-se a CIM segundo técnica deSteers e Graves 6, por meio de diluiçõesseriadas em placa com os antimicro-bianos incluídos no meio de cultura(Agar Müller Hinton). As concentra-ções usadas dos diferentes antimicrobia-nos foram: 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.56,0.78 mcg/ml de meio de cultura.

RESULTADOS

Nas Tabelas l e 2 estão expressos osresultados obtidos pela RIFD e aquelesobtidos pelo método bacteriológico clássico.

Na Tabela 3 e na Fig. l pode-se veri-ficar os resultados da determinação daC1M, em 45 cepas de Escherichia coli ente-ropatogênicas estudadas, frente aos seguin-tes antimicrobianos: Kanamicina, Cloranfe-nicol, Neomicina, Gentamicina e Amikacina.

DISCUSSÃO E CONCLUSÕES

Dos 121 casos estudados de diarréiainfantil, obtivemos 56 casos positivos paradeterminado agente etiológico, o que repre-senta uma positividade de 46,3%. Destetotal de 56 pacientes, foi identificada aEscherichia coli enteropatogênica em 50 ca-sos, Salmonella em 4 casos e Shigella em2 casos, o que concorda com os dados daliteratura 2,4. Comparando o método bacte-riológico clássico com a RIFD, na identifi-cação de Escherichia coli, a correlação entreos dois foi boa, dado que só houve 2casos de discordância.

Observamos uma predominância de cepasde Escherichia coli enteropatogênicas dossorotipos que constituem o "pool" A; doispacientes apresentaram cepas correspon-dentes aos sorotipos incluídos no "pool" Be "pool" C.

Considera-se assim, recomendável o em-prego, em rotina de laboratório, do examede imunofluorescência direta, para a identi-ficação de Escherichia coli enteropatogêni-ca 3,7,8, já que esta reação permite obterresultados preciosos num curto espaço detempo. Esta característica é importantenão só em termos de número de exameslaboratoriais, mas também bastante útilquando se considera a necessidade do isola-mento dos pacientes portadores de Esche-richia coli enteropatogênica, visando evitarque a infecção se dissemine por contágio.

De acordo com os resultados do estudoda CIM por nós obtidos, podemos observarque as cepas de Escherichia coli entero-patogênicas estudadas mostraram-se sensí-veis principalmente à Gentamicina e Ami-kacina e, em menor proporção, à Neomi-cina, Cloranfenicol e Kanamicina. Segundoestes resultados e os obtidos em trabalhoanterior6, concluímos não haver diferençassignificativas quanto à sensibilidade a estesantimicrobianos entre as cepas de Escheri-chia coli consideradas enteropatogênicas eas consideradas não-enteropatogênicas.

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LONGO, I. M. et al. [Identification of strains of Escherichia coli in stool samplesby direct fluorescent antibody tests] Rev. Saúde públ., S. Paulo, 14:199-204, 1980.

ABSTRACT: A study of 121 patients with acute diarrhea was made at thePediatric Clinic of the Santa Casa de S. Paulo (the S. Paulo Charity Hospital).Etiological diagnosis of 121 cases was carried out through the classical bacteri-ological method and direct fluorescent antibody tests for the identification ofE. coli. The antibiotic sensitivity of these bacteria to different antimicrobialswas determined by the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) method.Fifty-six positive cases were found; 89.3% of which corresponded to differentserotypes of enter o pathogenic E. coli (89.3%), when the direct fluorescent anti-body test was used. The classic bacteriological method bared four Salmo-nella strains and two Shigella. The MIC showed the E. coli to be more sensi-tive to Gentamicin and Amikacin than to other antibiotics.

UNITERMS: Escherichia coli. Fluorescent antibody technic. Bacteriologicaltechnics.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. DIFCO Laboratories: fluorescent antibodyreagents and procedures. Detroit,Mich., 1972. (Difco supplementary lite-rature, 123).

2. LOBOS, H. et al. Bacteriologia de la diar-rea aguda del lactante hospitalizado.Pediatria, 8:280-6, 1965.

3. MARSDEN, H. .& HIDE, W. A. Immuno-fluorescence in the diagnosis of ente-ropatogenic Escherichia coli infections.Lancet, 1:189-91, 1965.

4. MELENDEZ, M. et al. Diagnóstico de Es-cherichia coli enteropatógenas emdiarreas infantiles por el método deimunofluorescencia. Bol. Inst. bact.Chile, 15:138-49, 1973.

5. MIMICA, I. M. et al. Estudo da sensibili-dade de Escherichia coli a diferentesantimicrobianos. Ciênc. méd., S. Paulo,9(2):38-45, 1976.

6. STEERS, E. ,& GRAVES, B. S. An inoculareplicating apparatus for routine tes-ting of bacterial susceptibility toantibiotics. Antibiot. & Chemother., 9:307-11, 1959.

7. THOMASON, B. M. et al. Rapid presump-tive identification of enteropatogenicEscherichia coli in faecal smears bymeans of fluorescent antibody. 2. Useof various types of swabs for collec-tion and preservation of faecal spe-cimens. Bull. Wld Hlth Org., 25:153-8,1961.

8. VASQUEZ, D. A. Aplicación de técnicas deanticuerpos fluorescentes a la deter-minación de coproanticuerpos induci-dos por Escherichia coli. Rev. lat.-amer. Microbiol, 8:111-8, 1966.

Recebido para publicação em 04/07/1979Aprovado para publicação em 01/02/1980