hcl...• hcl bcv は hcv に対して選択的であり、細胞培養によるhcv...

2.6.1 緒言 Hepatitis CBMS-790052/BMS-650032/BMS-791325 beclabuvir

1 緒言

ベクラブビル塩酸塩［BMS-791325、以下、ベクラブビル（BCV）］は C 型肝炎ウイルス（HCV）非

構造蛋白 5B（NS5B）ポリメラーゼを阻害し、NS5B によるウイルスリボ核酸（RNA）の複製を阻害

する非核酸系 thumb site 1 阻害薬である。BCV は哺乳類のポリメラーゼを阻害せず、ヒトにおける本

薬の標的分子は知られていない。BCV は他の直接作用型抗ウイルス薬（DAA）との併用で相加又は

相乗的な相互作用を示す。今回、C 型慢性肝炎患者又は C 型代償性肝硬変患者を対象に、既承認のダ

クラタスビル塩酸塩（DCV、BMS-790052）及びアスナプレビル（ASV、BMS-650032）との固定用量

配合剤による併用療法として製造販売承認申請を行う。

BCV の化学構造式を以下に示す。

Figure 1-1 BCV の化学構造式

• HCl

BCV は HCV に対して選択的であり、細胞培養による HCV レプリコンアッセイにおいて、ジェノタ

イプ 1a 及び 1b のレプリコンに対する EC50値は 1.6～9.5 nM であった。BCV は DCV 及び ASV との併

用で相加又は相乗的な相互作用を示し、また、これらの 3 剤併用により HCV RNA の排除の増強が認

められた。BCV が他の HCV 治療薬との併用投与により C 型慢性肝炎患者に対する有用な治療法とな

り、NS5A 及び NS3 阻害薬の治療によりウイルス学的耐性を獲得した患者に対する選択肢となること

が期待される。

BCV を非臨床薬理試験、薬物動態試験及び毒性試験により総合的に評価した結果、本薬の DCV 及び

ASV との併用による臨床使用の有効性及び安全性が示された。

予定している効能又は効果（案）及び用法及び用量（案）を以下に示す。

【効能又は効果】

セログループ 1（ジェノタイプ 1）の C 型慢性肝炎又は C 型代償性肝硬変におけるウイルス血症の改

善

【用法及び用量】

通常、成人には 1 回 2 錠を 1 日 2 回食後に経口投与し、投与期間は 12 週間とする。

1

2.6.2 薬理試験の概要文 Hepatitis CBMS-790052/BMS-650032/BMS-791325 beclabuvir

Table of Contents

1 まとめ ............................................................................................................................................ 6

2 効力を裏付ける試験..................................................................................................................... 8

2.1 活性及びジェノタイプ網羅性..................................................................................................... 8

2.2 特異性及び選択性....................................................................................................................... 10

2.3 各種細胞における細胞毒性....................................................................................................... 11

2.4 代謝物の活性及び選択性........................................................................................................... 12

2.5 作用機序....................................................................................................................................... 12

2.5.1 NS5B ポリメラーゼに対する作用 ............................................................................................ 12

2.5.2 耐性 .............................................................................................................................................. 13

2.5.3 交差耐性....................................................................................................................................... 20

2.6 In vitro 併用試験 .......................................................................................................................... 23

3 副次的薬理試験........................................................................................................................... 24

4 安全性薬理試験........................................................................................................................... 24

4.1 受容体・イオンチャネル結合及び酵素アッセイ ................................................................... 24

4.2 心血管系（In vitro / In vivo）..................................................................................................... 25

4.3 中枢神経系................................................................................................................................... 27

4.4 呼吸系 .......................................................................................................................................... 28

5 薬力学的薬物相互作用............................................................................................................... 29

6 考察及び結論............................................................................................................................... 29

7 参考文献....................................................................................................................................... 31

1


List of in-text Tables

Table 2.1-1: BCV の主要な 6 種の HCV ジェノタイプに対する阻害活性（実験室株

及びC型慢性肝炎患者由来のハイブリッドレプリコン並びに単離した

NS5B ポリメラーゼ） ............................................................................................... 9

Table 2.2-1: BCV のポリメラーゼ及び核酸結合試験における特異性 ................................... 10

Table 2.2-2: 細胞培養試験における BCV の抗ウイルス活性及び選択性 .............................. 11

Table 2.3-1: 種々の組織由来細胞における BCV の細胞毒性.................................................. 11

Table 2.4-1: BCV代謝物のNS5Bポリメラーゼ及びレプリコンアッセイにおける活

性及び選択性 ........................................................................................................... 12

Table 2.5.2-1: In vitro 試験で選択された BCV の主要な耐性関連の NS5B 変異、並び

に一過性複製試験又は安定細胞株での耐性評価................................................ 14

Table 2.5.2-2: 一過性複製測定法によるその他の NS5B thumb site 1 の変異............................ 15

Table 2.5.2-3: European Hepatitis C Virus Database における BCV 耐性関連アミノ酸部

位の自然発症多型の保存率.................................................................................... 16

Table 2.5.3-1: BCV の主要な耐性変異に対する他の HCV 標的阻害薬による阻害................. 21

Table 2.5.3-2: 各種 HCV 阻害薬に特異的な耐性変異に対する BCV による阻害.................... 21

Table 2.5.3-3: Thumb site 2 標的化合物（BMS-731121）のレプリコンアッセイにおけ

る EC50値及び NS5B ポリメラーゼアッセイにおける IC50値 ........................... 23

Table 2.6-1: 併用試験の結果の要約............................................................................................ 23

Table 4.2-1: BCV 投与後の BCV 及び BMS-794712 の平均血漿中濃度 ................................. 26

2


List of in-text Figures

Figure 2.5.2-1: ジェノタイプ 1～6 レプリコンに対する BCV の resistance barrier.................... 17

Figure 2.5.2-2: DAA 併用によるジェノタイプ 1a レプリコンのコロニー形成試験 ................. 18

Figure 2.5.2-3: 単剤又は併用によるジェノタイプ1b野生型及びDCV/ASV耐性レプリ

コン細胞株コロニーの排除.................................................................................... 20

3


用語及び略号一覧

略号英語日本語

A alanine アラニン

APD50 action potential duration at 50% repolarization

50%再分極までの時間

APD90 action potential duration at 90% repolarization

90%再分極までの時間

ASV asunaprevir (BMS-650032) アスナプレビル（BMS-650032）

BCV beclabuvir ベクラブビル

BMS Bristol-Myers Squibb ブリストル・マイヤーズスクイブ社

BMS-650032 NS3 protease inhibitor, asunaprevir, ASV NS3 プロテアーゼ阻害剤、アスナプレ

ビル、ASV

BMS-790052 NS5A replication complex inhibitor, daclatasvir, DCV

NS5A 複製複合体阻害剤。ダクラタス

ビル、DCV

BMS-791325 NS5B polymerase site 1 inhibitor, beclabuvir, BCV

NS5B ポリメラーゼ site1 阻害剤、ベク

ラブビル、BCV

BVDV bovine viral diarrhea virus ウシウイルス性下痢ウイルス

CC50 50% cytotoxic concentration 50%細胞毒性濃度

DAA direct acting antiviral(s) 直接作用型抗ウイルス薬

DCV daclatasvir (BMS-790052) ダクラタスビル（BMS-790052）

DCV 3DAA combination of DCV and ASV and BCV DCV、ASV 及び BCV の併用

DMSO dimethylsulfoxide ジメチルスルホキシド

DNA deoxyribonucleic acid デオキシリボ核酸

EC50 50% effective concentration 50%有効濃度

F phenylalanine フェニルアラニン

GTP guanosine triphosphate グアノシン三リン酸

H histidine ヒスチジン

HCV hepatitis C virus C 型肝炎ウイルス

hERG human ether-a-go-go related gene ヒト ether-a-go-go 関連遺伝子

HIV human immunodeficiency virus ヒト免疫不全ウイルス

I isoleucine イソロイシン

IC50 concentration that causes 50% inhibition 50%阻害濃度

Ki inhibitory constant 阻害定数

L leucine ロイシン

LDV ledipasvir レジパスビル

4


用語及び略号一覧

略号英語日本語

M methionine メチオニン

NA not applicable 該当なし

ND not determined 実施せず

NS3 nonstructural protein 3 of HCV HCV 非構造蛋白 3

NS5A nonstructural protein 5A of HCV HCV 非構造蛋白 5A

NS5B nonstructural protein 5B of HCV HCV 非構造蛋白 5B

P proline プロリン

PDE4 phosphodiesterase 4 ホスホジエステラーゼ 4

pegIFNα pegylated interferon alfa-2b ペグインターフェロン α-2b

RBV ribavirin リバビリン

RNA ribonucleic acid リボ核酸

S serine セリン

SMV simeprevir シメプレビル

SOF sofosbuvir ソホスブビル

T threonine スレオニン

V valine バリン

5


1 まとめ

ベクラブビル塩酸塩［BMS-791325、以下、ベクラブビル（BCV）］は C 型肝炎ウイルス（HCV）非

構造蛋白 5B（NS5B）ポリメラーゼを阻害し、NS5B によるウイルスリボ核酸（RNA）の複製を阻害

する非核酸系 thumb site 1 阻害薬である。BCV は哺乳類のポリメラーゼに対して活性を示さず、ヒト

において既知の本薬の標的は存在しない。したがって、薬理学的標的に対する過剰な薬理作用による

影響はないと考えられる。BCV は他の直接作用型抗ウイルス薬（DAA）及びペグインターフェロン

α（pegIFNα）との併用で相加又は相乗的な相互作用を示す。BCV は、セログループ 1（ジェノタイ

プ 1）の C 型慢性肝炎又は C 型代償性肝硬変におけるウイルス血症の改善を適応とした DAA のダク

ラタスビル（DCV、BMS-790052）及びアスナプレビル（ASV、BMS-650032）との固定用量配合剤に

よる併用療法として開発した。

BCV の in vitro 評価として、HCV NS5B との相互作用における作用強度及び選択性について酵素を用

いたポリメラーゼアッセイを実施し、BCV の効力及び細胞毒性に関しては HCV レプリコンアッセイ

を実施した。BCV の NS5B ポリメラーゼ活性に対する 50%阻害濃度（IC50）は、HCV レプリコンア

ッセイにおける 50%有効濃度（EC50）と良好な相関を示した。

BCV は HCV NS5B ポリメラーゼに対する選択的な阻害薬であり、ジェノタイプ 1a、1b、3a 及び 5aのポリメラーゼに対する IC50値は 1.8～4.8 nM、ジェノタイプ 4a に対しては 7.6～27.1 nM、ジェノタ

イプ 6a に対しては 61.6 nM、ジェノタイプ 2a 及び 2b に対しては 164～228 nM であった。本薬は哺乳

類のデオキシリボ核酸（DNA）ポリメラーゼ α、β及び γ並びに近縁のウシウイルス性下痢ウイルス

（BVDV）のポリメラーゼに対して活性を示さなかった（IC50 = 40 µM 超）。

細胞培養による HCV レプリコンアッセイにおいて、BCV はジェノタイプ 1a 及び 1b の実験室株並び

に C 型慢性肝炎患者由来の NS5B 配列を基に作製したハイブリッドレプリコンに対し、1.6～9.5 nMの EC50値を示した。本薬はジェノタイプ 3a、4a 及び 5a のハイブリッドレプリコンに対し、0.8～18 nMの範囲の EC50値を示した。ジェノタイプ 6a に対する EC50値は 8.6～79.5 nM の範囲であり、V494Aの変異が存在する場合に低感受性（79.5 nM）であった。本変異の保存率は、European Hepatitis C Virus Database（HCV 蛋白アミノ酸配列の国際共同データベース）では 21%である。ジェノタイプ 2a 及び

2b のレプリコンに対する EC50値は 87～1000 nM 超であった。BCV は近縁の BVDV（レプリコン及び

ウイルス）を含む一連の RNA 及び DNA ウイルスに対して活性を示さなかった。また、BCV のヒト

肝組織由来細胞株 Huh-7 での治療係数は 3300 超であった。BCV の抗ウイルス活性は 40%ヒト血清の

存在下で軽度に抑制された（ジェノタイプ 1b レプリコンの EC50値が 4.4 ± 1.5 倍に増加）。

レプリコン試験の結果、N-脱メチル化代謝物の BMS-794712 は BCV と同等の活性を有したが、他の

代謝物（BMT-110547、BMT-171207 及び BMT-142478）の活性はわずかに弱かった（EC50 値が BCVの 2～15 倍）。50%細胞毒性濃度（CC50）による細胞毒性も BCV と同程度であった。NS5B ポリメラ

ーゼ試験の結果より、これらの代謝物が BCV と同等の効力を有することが示された。

BCV は NS5B ポリメラーゼの thumb site 1 に結合する。共結晶構造試験及びトリプシン消化試験によ

り、本薬の NS5B ポリメラーゼへの結合はアロステリックな結合であり、NS5B ポリメラーゼに構造

的な変化が生じることが確認された。BCV はポリメラーゼの転写開始の時間依存的及び非競合的な

6


阻害薬である。結合試験の結果より、BCV と HCV NS5B ポリメラーゼの相互作用は可逆的で二段階

の緩徐な結合であることが示された。

ジェノタイプ 1a 及び 1b のレプリコンでの耐性選択試験より、主要な耐性部位が 495 番のアミノ酸で

あることが特定された。本アミノ酸は野生型 NS5B ポリメラーゼの場合はプロリン（P）であるが、

ジェノタイプ 1a の耐性レプリコンではセリン（S）、アラニン（A）、ロイシン（L）又はスレオニン

（T）に、また、1b の場合は S、A 又は L に置換していた。これらの耐性変異体は BCV に対して野

生型の 15～64 倍の耐性を示した（EC50 = 58～378 nM）。概して、レプリコンの複製効率は耐性の程

度と逆相関しており、このことは耐性の程度が高い変異ほど高い遺伝的障害を有することを示唆して

いる。ジェノタイプ 3a では、システイン（C）494S が主要な耐性置換であり、本変異体は野生型の

約 34 倍の耐性を示した（EC50 = 170 ± 14 nM）。ジェノタイプ 4a ではバリン（V）494A 及び P495A の

耐性変異体が、それぞれ野生型の約 3.4 倍及び 25 倍の耐性を示した（EC50 = 15.5 ± 3.5 nM 及び 111 ±41 nM）。ジェノタイプ 5a では P495 のヒスチジン（H）、L 又は S への置換が生じ、P495H 変異体は野

生型の 167 倍の耐性を示した（EC50 = 670 ± 30 nM）が、P495L/S 変異体は複製しなかった。ジェノタ

イプ 6a では V494A 変異体が BCV に対して野生型の 17 倍の耐性を示した（EC50 = 179 ± 9.5 nM）。

ジェノタイプ 1a、1b、3a、4a、5a 及び 6a レプリコンの NS5B にアミノ酸置換が存在しても、ASV 及

び DCV などの他の HCV 蛋白を阻害する DAA に対する感受性は変化しなかった。試験に用いた P495の数種のアミノ酸置換では、NS5B の palmに存在するアロステリック部位に結合する非核酸系 NS5B阻害薬に対する感受性は変化しなかった。また、BCV は、ASV 及び DCV などの他の HCV 阻害薬に

特異的な耐性変異並びに異なるNS5B部位に結合する核酸系及び非核酸系阻害薬に特異的な耐性変異

に対しても活性を維持する。2 剤又は 3 剤の DAA（DCV、ASV、BCV）の併用による HCV RNA の

排除が単剤に比べて増強されることから、BCV の使用は DCV 及び ASV との併用が有効であると考

えられる。

心血管系の in vitro 及び in vivo における安全性薬理評価並びに in vivo における中枢神経系及び呼吸系

の安全性薬理評価は、主要な毒性試験に組み込み、あるいは独立した安全性薬理試験として実施した。

その結果、BCV の標的外作用は、ヒトのホスホジエステラーゼ（PDE4）に対し、臨床用量における

ヒトの最高血漿中濃度（ヒト Cmax）の 72 倍以上の濃度（遊離体として）で弱い阻害作用を示した

のみであり、標的外作用の可能性は低いと考えられた。また、心血管系に関連する作用として、軽度

なヒト ether-a-go-go 関連遺伝子（hERG）及び Na チャネルの阻害、50%再分極までの時間（APD50）

の軽微な延長及びプルキンエ線維アッセイでの最大立ち上がり速度の低下［ヒト Cmax の 367 倍（遊

離体）］、摘出ウサギ心臓で心拍数の軽度な減少及び洞結節回復時間の延長（ヒト Cmax の 39 倍）、麻

酔下ウサギでの軽度から中等度の動脈血圧上昇及び心拍数の減少（無作用量：ヒト Cmax の 5 倍）が

認められた。イヌの単回経口投与（ヒト Cmax の 43 倍）及び最長 9 ヵ月間の反復経口投与［ヒト Cmaxの最大 43 倍、ヒト血漿中濃度曲線下面積（AUC）の最大 65 倍］、BCV と DCV 又は ASV との 2 剤併

用、若しくはこれら 3 剤併用による最長 1 ヵ月間の反復経口投与毒性試験（ヒト AUC の最大 8.7 倍）

での高曝露量でも、心血管系パラメータに影響は認められなかった。これらのBCVの非臨床試験（in vitro試験：39～1100 倍、in vivo 試験：5～65 倍）の結果から、ヒトにおいて臨床用量で予測される曝露量

7


では臨床の心血管系への影響が発現する懸念がないことが示唆される。また、ヒトにおいて中枢神経

系及び呼吸系の影響が発現する可能性も低いと考えられる。

以上の BCV の薬理学的プロファイルから、本薬が HCV に選択的な抗ウイルス作用を有し、他の HCV治療薬との併用投与により、C 型慢性肝炎患者に対する有用な治療法となることが期待される。

2 効力を裏付ける試験

2.1 活性及びジェノタイプ網羅性

BCV は RNA 依存性 RNA ポリメラーゼである HCV NS5B の非核酸系阻害薬である。NS5B ポリメラ

ーゼはウイルス RNA の合成に関与しており、ウイルス複製に必須の酵素である。BCV は、ヌクレオ

シド基質と RNA テンプレートに対して非競合的に NS5B を阻害し、HCV RNA の合成開始を阻止す

る。共結晶構造解析及び耐性マッピングより、BCV が NS5B ポリメラーゼの thumb 領域（thumb site 1）に結合するアロステリックな阻害薬であることが確認された【モジュール4.2.1.1-4】【モジュール4.2.1.1-4 Addendum 02】。

BCV の活性を評価する in vitro 試験として、HCV NS5B との相互作用における強度及び選択性につい

ては酵素を用いたポリメラーゼアッセイを実施し、BCV の効力及び細胞毒性に関しては HCV レプリ

コンアッセイを実施した。BCV の NS5B ポリメラーゼ活性阻害の IC50値は、HCV レプリコンアッセ

イにおける EC50値と良好な相関を示した。BCV による NS5B ポリメラーゼ阻害の IC50値は、ジェノ

タイプ 1a、1b、3a 及び 5a では 1.8～4.8 nM、ジェノタイプ 4a では 7.6～27.1 nM、ジェノタイプ 6a で61.6 nM、また、ジェノタイプ 2a 及び 2b では 164～228 nM であった（Table 2.1-1）。細胞培養による

HCV レプリコンアッセイにおいて、BCV のジェノタイプ 1a 及び 1b の実験室株並びに C 型慢性肝炎

患者由来の NS5B 配列を基に作製したハイブリッドレプリコンに対する EC50値は、1.6～9.5 nM であ

った。また、ジェノタイプ 3a、4a 及び 5a のハイブリッドレプリコンに対する EC50値は、0.8～18 nMの範囲であった。ジェノタイプ 6a に対する EC50値は 8.6～79.5 nM の範囲であり、低い感受性を示す

値（79.5 nM）は、V494A の変異が存在する場合に認められた。本変異の保存率は、European Hepatitis C Virus Database （HCV 蛋白アミノ酸配列の国際共同データベース）1 では 21%である。ジェノタイ

プ 2a 及び 2b のレプリコンに対する EC50値は 87～1000 nM 超であった（Table 2.1-1）。BCV の抗ウイ

ルス活性は 40%ヒト血清の存在下で軽度に抑制され、ジェノタイプ 1b レプリコンアッセイでは EC50

値が 4.4 ± 1.5 倍に増加した。

8


Table 2.1-1: BCV の主要な 6 種の HCV ジェノタイプに対する阻害活性（実験室株及び C型慢性肝炎患者由来のハイブリッドレプリコン並びに単離した NS5B ポリメ

ラーゼ）

NS5Bのジェノタイプ（サ

ブタイプ背景株）

分離株（由来）レプリコン

EC50（nM）aポリメラーゼ

IC50（nM）a

1a H77c 3.2 ± 2.4 3.3 ± 1.1

(1a H77c) pt-5-22 1.6 ± 0.3 ND

(1a H77c) pt-6-14 5.3 ± 2.3 ND

(1a H77c) pt-8-3 4.3 ± 1.5 ND

(1a H77c) pt-2-1 4.5 ± 2.1 ND

1b Con1 6 ± 1.5 4.2 ± 2.1

(1b Con1) pt-7-4 3.5 ± 0.7 ND

(1b Con1) pt-10-5 9.5 ± 0.7 ND

2a JFH1 87 ± 2.8 165 ± 133

2a HC-J6 498 ± 229 228 ± 72

2b Patient consensus b ND 164 ± 39

(1b Con1) pt-H6 480 ± 327 ND

(1b Con1) pt-308 > 1000 ND

3a Patient consensus c ND 1.8 ± 0.1

(1a H77c) Inx 9 ± 2 ND

(1a H77c) pt-002 4.7 ± 1.5 ND

(1a H77c) pt-007 3.5 ± 2.1 ND

(1a H77c) pt-341 9.5 ± 3.5 ND

(1a H77c) pt-342 7.5 ± 0.7 ND

4a Database consensus d ND 19.9 ± 9.6

(1b Con1) pt-H2 6 ± 2.9 ND

(1b Con1) pt-A 3 ± 0.6 7.6 ± 1.9

(1b Con1) pt-B 18 ± 2.5 27.1 ± 13.1

5a Database consensus e ND 4.8 ± 2.4

(1b Con1) pt-h3 4.3 ± 0.6 ND

(1b Con1) pt-010 0.8 ± 0.3 ND

(1b Con1) pt-011 1.2 ± 0.7 ND

(1b Con1) pt-019 2.8 ± 1.7 ND

6a Patient consensus f ND 61.6 ± 30.3

(1b Con1) pt-752 8.6 ± 2.5 ND

(1b Con1) pt-tt003 9.7 ± 3.5 ND

(1b Con1) pt-hn001 g 79.5 ± 24.5 ND

9


a 2 回以上繰り返した平均 ± 標準偏差b 患者の血清 HC-J8 に感染させたチンパンジーの HCV から得られた共通配列（European Hepatitis C Virus

Database 1のジェノタイプ 2b 配列と 97.4%一致）c 患者の血清 S52 に感染させたチンパンジーの HCV から得られた共通配列（European Hepatitis C Virus

Database 1のジェノタイプ 3a 配列と 97.8%一致）d GenBank［米国 NCBI（National Center for Biotechnology Information）による塩基配列データベース］の

11 種の塩基配列を基に合成した塩基配列（European Hepatitis C Virus Database 1のジェノタイプ 4a 配列と

99.8%一致）e Genbank の 5 種の塩基配列を基に合成した塩基配列（European Hepatitis C Virus Database 1のジェノタイ

プ 5a 配列と 98.3%一致）f 患者血清の HCV から得られた共通配列（最新の European Hepatitis C Virus Database 1のジェノタイプ 6a

配列と 97.2%一致）g BCV に対し低い感受性を示す hn-001 のアミノ酸配列変異について 2.5.2 項で考察した

ND = 実施せず

出典：【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 01】【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 02】【モジュール 4.2.1.1-2】

2.2 特異性及び選択性

BCV のヒト及びウイルスの一連のポリメラーゼに対する作用を検討した。本薬は哺乳類の DNA ポリ

メラーゼ α、β及び γ並びに近縁の BVDV のポリメラーゼに対して活性を示さなかった。BCV はヒト

免疫不全ウイルス（HIV）の逆転写酵素及びインテグラーゼに対して活性を示さなかった。各試験で

用いた陽性対照の阻害薬は、これらの酵素を予測された IC50値（記載せず）で阻害した。高感度核酸

結合プローブを用いた競合結合試験では、BCV の DNA 又は RNA に対する非特異的な結合は認めら

れなかった（Table 2.2-1）。これらの結果から、BCV が HCV NS5B ポリメラーゼの特異的阻害薬であ

り、核酸とは相互作用を示す可能性が低いことが示された。

Table 2.2-1: BCV のポリメラーゼ及び核酸結合試験における特異性

酵素又は試験系 BCV IC50（μM）a

HCV NS5B 1b（Con1） 0.011

ウシポリメラーゼ α > 80

ヒトポリメラーゼ β > 100

ヒトポリメラーゼ γ > 100

BVDV ポリメラーゼ > 93

HIV 逆転写酵素 > 100

Klenow ポリメラーゼ > 11, 99

HIV インテグラーゼ > 40

DNA 結合 > 60

RNA 結合 > 20a 2 回以上の結果から算出

出典：【モジュール 4.2.1.1-1】

10


BCVの抗ウイルス選択性について、近縁のぺスチウイルスであるBVDVを含む様々なRNA及びDNAウイルスに対する活性の測定により評価した（Table 2.2-2）。その結果、BCV は対照のジェノタイプ

1b の HCV を除き、いずれのウイルスに対しても活性を示さなかった（IC50 = 4 µM 超）。本結果から、

BCV が HCV に対する選択的な阻害薬であることが示された。

Table 2.2-2: 細胞培養試験における BCV の抗ウイルス活性及び選択性

レプリコン／ウイルス細胞株 EC50（μM）選択指数 a

HCV レプリコン 1b（Con1） Huh-7 0.006 ± 0.002 -

BVDV レプリコン Huh-7 > 14 > 2333

BVDV MDBK 11 1833

HIV MT2 > 14 > 2333

HSV-1,2 Vero > 4 > 667

インフルエンザ MDBK > 29 > 4833

イヌパラインフルエンザウイルス Vero > 32 > 5333

ヒトライノウイルス MRC5 > 16 > 2667

コクサッキーウイルス MRC5 > 16 > 2667

ポリオウイルス MRC5 > 16 > 2667

ヒトコロナウイルス MRC5 > 16 > 2667a レプリコン又はウイルスに対する EC50値／HCV レプリコン 1b に対する EC50値

出典：【モジュール 4.2.1.1-1】

2.3 各種細胞における細胞毒性

ジェノタイプ1bレプリコンを導入した細胞であるHuh-7細胞におけるBCVの細胞毒性はCC50が20 µMであり、EC50（0.006 µM、Table 2.2-2）との比から算出した治療係数は 3300 超であった。BCV の CC50

値を種々の組織由来細胞株でも算出した。各細胞を BCVと共に最長 5日間培養した結果、本薬の CC50

値は試験に用いたすべての細胞で 14 µM 以上であった（Table 2.3-1）。

Table 2.3-1: 種々の組織由来細胞における BCV の細胞毒性

細胞株組織 CC50 (µM) a

Huh-7 肝臓 20

Vero 腎臓 29

MDBK 腎臓 30

MRC5 肺線維芽細胞 16

MT2 T リンパ球 14a 2 回の試験のうち低濃度側の数値

出典：【モジュール 4.2.1.1-1】

11


2.4 代謝物の活性及び選択性

BCV 代謝物の活性、選択性及び細胞毒性について、酵素及びレプリコンアッセイにより評価した。

これら代謝物の in vivo における分布については、薬物動態試験の概要文【モジュール 2.6.4】に記載

されている。HCV レプリコンアッセイの結果、BMS-794712（M1：N-脱メチル化代謝物）は BCV と

同等の活性を有していたが、BMT-110547（M3：N-脱メチル化代謝物）、BMT-171207（M6：N-N’脱メ

チル化代謝物）及び BMT-142478（M7：N-N’脱メチル化代謝物）は、BCV に比べてわずかに弱い活

性を有していた（EC50 値 2～15 倍）。NS5B ポリメラーゼに対する阻害試験の結果から、これらの代

謝物が BCV と同程度の活性を有することが示された（Table 2.4-1）。また、これらの代謝物は、BVDVポリメラーゼ及びHCVレプリコンアッセイで同程度の値を示し、代謝物の選択性はBCVに匹敵した。

BMS-948185（M17；BCV の N-及び O-脱メチル化体のグルクロン酸抱合体）は、NS5B ポリメラーゼ

アッセイでは BCV の約 1/60 の活性を示し、HCV レプリコンアッセイではほとんど又はまったく活性

を示さなかった。主代謝物であるBMS-794712の血漿中濃度はヒト血漿中BCVの約 25%であったが、

BMT-110547、BMT-171207、BMT-142478 及び BMS-948158 の血漿中濃度は微量であった。

Table 2.4-1: BCV 代謝物の NS5B ポリメラーゼ及びレプリコンアッセイにおける活性及び

選択性

活性

IC50、EC50又は CC50（µM）

BMS-794712(M1)

BMT-171207(M6)

BMT-110547(M3)

BMT-142478(M7)

BMS-948158(M17)

ジェノタイプ 1bNS5B ポリメラーゼ

0.001 ± 0.0001 0.0015 ± 0.0002 0.001 ± 0.0001 0.001 ± 0.0002 0.066 ± 0.003

BVDVポリメラーゼ > 10 ND ND ND > 10

ジェノタイプ 1bレプリコン

0.004 ± 0.0001 0.010 ± 0.002 0.021 ± 0.002 0.050 ± 0.003 14.1 ± 9.5

ジェノタイプ 1aレプリコン

0.002 ± 0.0003 0.004 ± 0.001 0.013 ± 0.001 0.031 ± 0.004 8.1 ± 2.2

BVDV レプリコン 17 ± 3.9 20 ± 7.3 15 ± 3.9 12 ± 3.4 NA

CC50 14 ± 2.4 36 ± 12 > 100 47 ± 8.5 > 100 (n = 1)ND = 実施せず

出典：【モジュール 4.2.1.1-3】

2.5 作用機序

2.5.1 NS5B ポリメラーゼに対する作用

BCV はポリメラーゼの転写開始を時間依存的、非競合的に阻害すると考えられる。本薬の阻害機序

について、RNA テンプレート及び基質のグアノシン三リン酸（GTP）存在下で BCV 及び NS5B を 24時間プレインキュベーションし、反応開始前に転写開始複合体が完全に形成された状態で検討した【モ

ジュール 4.2.1.1-4】【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 02】。反応の初速度は酵素と強く結合する阻害薬

で適用可能な Morrison 式に当てはめて算出した。RNA テンプレート又は GTP に対するみかけの Ki

12


（阻害定数）値の描画により、本薬のテンプレート及びGTPに対する阻害が、それぞれKi値1.1 ± 0.1 nM及び 2.6 ± 0.4 nM の非競合的様式であることが確認された。結合試験より、BCV と HCV NS5B ポリ

メラーゼの相互作用は可逆的で二段階［Kd* = Kd/(1+k3/k4)］の緩徐な結合であることが示された。

2.5.2 耐性

耐性試験において、ジェノタイプ 1a、1b、3a、4a、5a 及び 6a の HCV レプリコン細胞を、野生型レ

プリコンでの EC50値の 5～30 倍高濃度の BCV と共に培養すると、本薬に対する感受性が低下した細

胞が得られた。感受性の低下した細胞から選択された耐性変異の遺伝子型及び表現型の特徴を調べた。

耐性は特定された耐性変異をそれぞれレプリコンに導入し、その EC50 値を野生型と比較し評価した

（Table 2.5.2-1）。数種の耐性変異を有するレプリコンは、一過性複製試験における複製の程度が非常

に低かった。安定したレプリコン細胞株を選択し、これらの変異体の正確な EC50 の算出に用いた。

すべての試験では DCV 及び ASV を併用したが、BCV の耐性変異に対する効力の低下はみられなか

った。

ジェノタイプ 1 耐性レプリコン細胞の遺伝子解析の結果、NS5B の 495 番のアミノ酸残基における置

換が明らかとなった 2。野生型 NS5B ポリメラーゼの 495 番の P は、ジェノタイプ 1a の耐性細胞では

S、A、L、T に、また、ジェノタイプ 1b では S、A、L に置換していた。これら個々の置換を野生型

の遺伝子背景を有するレプリコン細胞に導入すると、BCV に対する EC50値が野生型の 15～64 倍の耐

性が生じ、耐性の程度は P495S > P495T > P495L > P495A の順であった（Table 2.5.2-1）。P495L 変異を

Con1 の遺伝子背景を有するレプリコン細胞に導入し、分離した NS5B ポリメラーゼの耐性を確認し

た（Table 2.5.2-1、脚注 C）。概してレプリコンの複製効率は耐性の程度と逆相関し、耐性が高い変異

は genetic barrier が高いことが示唆された。ジェノタイプ 1b では、499 番のアミノ酸残基の V から Aへの置換も低頻度（約 5%）で認められたが、これらの変異体は BCV に耐性を示さなかった（EC50

値は野生型の 1.6 倍）。

ジェノタイプ 3a の場合、NS5B の 494 番のアミノ酸残基は他のジェノタイプでみられる V ではなく Cである。C494S はジェノタイプ 3a のレプリコン細胞で認められる主要な耐性変異であり、発現頻度

は約 76%であった（Table 2.5.2-1）。C494S 変異体は EC50値が野生型の約 34 倍の耐性を示した。また、

ジェノタイプ 3a の細胞では P495S 変異も低頻度（約 24%）で観察された。P495S 変異体の複製は一

過性複製試験では検出できず、また、本変異を安定発現する細胞株の分離は試験を繰り返してもでき

なかった。

ジェノタイプ 4a の耐性変異は、V494 及び P495 のアミノ酸残基に発現した（Table 2.5.2-1）。P495L変異体は一過性複製試験では複製せず、また、本変異を安定発現する細胞株の分離もできなかった。

P495A変異体の複製は野生型の約30%であり、用いた細胞株において野生型の25倍の耐性を示した。

V494A 変異体では BCV の効力への軽微な影響がみられ、野生型の約 3 倍の耐性を示した。

ジェノタイプ 5a では、選択された細胞の P495 にヒスチジン（H）、L、S への置換が認められた（Table 2.5.2-1）。P495H 変異は以前には得られておらず、本変異体は BCV に対する EC50値が野生型の 167倍の顕著な耐性を示した。P495L/S 変異体の表現型は評価できなかった。V494A の耐性変異も 39 ク

13


ローン中 1 クローンに認められたが、P495 部位の変異との関連性はなかった。V494A 変異体は一過

性複製試験では複製せず、また、本変異を安定発現する細胞株の分離はできなかった。

ジェノタイプ 6a では、V494A は選択された細胞で唯一認められた耐性変異であり、本変異体は BCVに対し EC50値が野生型の 17 倍の耐性を示した。本変異は臨床分離株（hn-001）の 1 つに認められた。

この臨床分離株も、BCV に対して感受性の低下を示した（Table 2.5.2-1）。

Table 2.5.2-1: In vitro 試験で選択された BCV の主要な耐性関連の NS5B 変異、並びに一過

性複製試験又は安定細胞株での耐性評価

NS5B のジェノタイプ（クローン；サブタイプ背景株）

変異BCV

EC50 (nM)a 野生型との耐性比複製効率 b

1a（H77c）野生型 4 ± 1.1 1 1P495A 58 ± 5 15 0.6 - 0.8P495S 253 ± 36 64 0.16 - 0.18P495L 133 ± 24 32 0.25 - 0.3P495T 142 ± 34 36 0.07 - 0.14

1b（Con1）野生型 7 ± 1.4 1 1P495A 144 ± 33 20 0.38 - 0.45P495S 378 ± 58 54 0.06 - 0.07P495Lc 368 ± 111 53 0.08 - 0.14V499A 11.5 ± 0.7 1.6 0.42 - 0.55

3a（Inx; 1a H77c）野生型 5 ± 1 1 1

C494S 170 ± 14 34 細胞株 d

P495S ND ND 複製せず

4a（patient H2;1b Con1）野生型 4.5 ± 2.1 1 1V495A 15.5 ± 3.5 3.4 0.33 - 0.46P495A 111 ± 41 25 0.3 - 0.34P495L ND ND 複製せず

5a（patient h3; 1b Con1）野生型 4 ± 1 1 1

V495A ND ND 複製せず

P495H 670 ± 30 167 細胞株 d

P495L ND ND 複製せず

P495S ND ND 複製せず

6a（patient 752; 1b Con1）野生型 10.6 ± 3.5 1 1

V494A 179 ± 9.5 17 細胞株 d

ND = 測定せず

a 平均 ± 標準偏差。野生型レプリコンに対する EC50値算出試験は耐性変異を有するレプリコンの EC50値

算出試験と同時に実施した。b 一過性複製試験での野生型の複製効率との比

14


c ジェノタイプ 1b の P495L 変異体を NA5B ポリメラーゼアッセイでも評価した結果、IC50は 100 nM 超、

耐性倍率は 140 超であった。d 安定細胞株を用いて評価した。

出典：【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】【モジュール 4.2.1.1-4】【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】

BCV 単剤を単回投与した第 1 相臨床試験（AI443002 試験）のすべての BCV 投与群において、ウイル

ス RNA の急速（数時間以内）かつ持続的な減少がみられた【モジュール 4.2.1.1-5】。BCV 単剤の 100、300 及び 600 mg 投与群では、in vitro レプリコンアッセイでみられた耐性変異の増幅はみられなかっ

た。900 mg 投与群では、ジェノタイプ 1a の被験者 1 例に投与後 24 時間の 1 時点で P495L/S の耐性変

異が認められたが、その後はウイルス量の顕著な低下（3.4 log10）がみられた。これらの変異が投与

後 24 時間の 1 時点のみで検出されたことから、少なくとも投与後初期は抑制可能であったか、ある

いは投与前から微量に存在していた可能性が示唆される。P495L/S の耐性変異は投与後 24 時間以降

には検出されなかったことから、これら変異の複製能は低く、野生型ウイルスに置き換わった可能性

が示唆された。

DCV 及び ASV との併用による BCV の in vitro 選択試験で特定された、又はヒト単回投与試験で認め

られた、あるいは thumb site 1 を標的とする他の HCV NS5B 阻害薬で報告されているジェノタイプ 1の耐性変異についても、一過性複製測定法により評価した（Table 2.5.2-2）。その結果、T389I［389番の T がイソロイシン（I）に置換］変異体は BCV に対する感受性が低下せず、L392I（392 番の Lが I に置換）変異体では 1/7～1/5 に低下したが L392F［392 番の L がフェニルアラニン（F）に置換］

変異体は感受性の低下を示さなかった。A421V（421 番の A が V に置換）変異体では BCV に対する

感受性が 1/3～1 に低下し、A421V と T389I が併存した場合は 1/5～1/3 に低下した。V494A（494 番の

V が A に置換）変異体では BCV に対する感受性が 1/3～1/2 に低下したが、L497M［497 番の L がメ

チオニン（M）に置換］変異体は感受性の低下を示さなかった。野生型ジェノタイプ 1a の 499 番の

アミノ酸残基は A であり、野生型ジェノタイプ 1b では V である。499 番のアミノ酸変異体は、BCVに対する感受性が 1/2～1 に低下した。

Table 2.5.2-2: 一過性複製測定法によるその他の NS5B thumb site 1 の変異

ジェノタイプレプリコンの変異野生型との耐性比複製効率 a

1a T389I 1 1.1 - 2.6

L392I 5 - 7 0.1 - 0.4

L392F 1 1.2

A421V 1 - 3 0.3 - 0.9

V494A 2 0.1

L497M 1 0.1

A499V 1 0.5

T389I + A421V 3 - 5 0.5 - 1.2

1b L392I 7 0.2

V499A 2 0.5

15


a 一過性複製測定法による野生型の複製効率との比

出典：【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】【モジュール 4.2.1.1-5】

In vitro 試験における耐性に関連した NS5B アミノ酸部位の自然発症多型を、European Hepatitis C Virus Database 1のアミノ酸配列を用いて HCV ジェノタイプ 1～6 について検討した（Table 2.5.2-3）。P495はジェノタイプ 1～5 のすべての配列に、また、ジェノタイプ 6a では 95%に保存されていた。同様に、

L392 は、ジェノタイプ 2 以外のすべてのジェノタイプで高度（92%超）に保存されていた。ジェノ

タイプ 2a 及び 2b の 392 番のアミノ酸は I であり、それぞれ 87%及び 96%保存されていた。V494 は、

ジェノタイプ 1、4 及び 5 の配列では 100%保存されていた。ジェノタイプ 3a では V494 は存在せず

C494 変異が存在したが、BCV に対する感受性に変化はなかった（ジェノタイプ 3a の 5 例の患者分離

株の EC50値：4～10 nM）。ジェノタイプ 6a では、A494 変異が 21%に存在し、残りの 79%では V494が保存されていた。A494 はジェノタイプ 6a の患者標本 pt-hn001 の NS5B 配列に存在し、ハイブリッ

ドレプリコン培養試験における本変異体の BCV に対する感受性は、評価した他の 2 例のジェノタイ

プ 6a の患者標本の配列の感受性に比べて低かった（Table 2.1-1）。以上の耐性に関連する自然発症多

型の解析結果から、BCV の結合部位はジェノタイプ 1、3a、4a、5a 及び 6a を通して比較的保存され

ていることが示された。

Table 2.5.2-3: European Hepatitis C Virus Database における BCV 耐性関連アミノ酸部位の

自然発症多型の保存率

ジェノタイプ

（例数）

NS5B 部位でのアミノ酸残基又は多型 a

392 421 494 495 499

1a（215） L（97） A（90） V（100） P（100） A（95）

F（2.5） V（10） T（3）

P（0.5） V（1）

1b（368） L（92） A（95） V（100） P（100） V（87）

I（6） V（5） A（10）

F（2） T（3）

2a（23） I（87） V（61） A（100） P（100） A（87）

L（9） A（39） T（9）

X（4） V（4）

2b（27） I（96） V（96） A（96） P（100） A（96）

L（4） A（4） V（4） V（4）

3a（25） L（100） V（100） C（100） P（100） A（100）

4a（15） L（100） V（100） V（100） P（100） A（100）

5a（4） L（100） A（75） V（100） P（100） A（100）

V（25）

16


Table 2.5.2-3: European Hepatitis C Virus Database における BCV 耐性関連アミノ酸部位の

自然発症多型の保存率

ジェノタイプ

（例数）

NS5B 部位でのアミノ酸残基又は多型 a

392 421 494 495 499

6a（19） L（100） V（100） V（79） P（95） A（100）

A（21） L（5）a 括弧内の数字は European Hepatitis C Virus Database 1（20 年月日時点）においてそれぞれのアミ

ノ酸が保存されている配列の割合

出典：【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 02】【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】

様々な濃度の BCV の添加によりレプリコン細胞から HCV RNA が排除された。ジェノタイプ 1 のう

ち、治療が難しいサブタイプであるジェノタイプ 1a に対する BCV の resistance barrier をジェノタイ

プ 2～6 に対する resistance barrier と比較するレプリコン排除試験を実施した（Figure 2.5.2-1）。レプリ

コン細胞株を BCV又は溶媒対照としてジメチルスルホキシド（DMSO）で 5日又は 10日間処理した。

BCV の除去後、レプリコンを有する細胞を抗生物質 G418 含有の選択培地でコロニーを形成させた。

レプリコン細胞に BCV を 300 nM（BCV の第 1 相臨床試験で 100 mg を単回投与した 24 時間後の平均

トラフ濃度）添加した。300 nM の曝露により、ジェノタイプ 1 の HCV 感染患者の平均 HCV RNA が

約 1.3 log10 copy/mL 低下した 3。

Figure 2.5.2-1: ジェノタイプ 1～6 レプリコンに対する BCV の resistance barrier

出典：【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】

NS5B 阻害薬が存在しない場合（DMSO 対照群）、HCV レプリコン細胞は単一層のコロニーを形成し

た。ジェノタイプ 3a、4a 及び 5a のキメラレプリコン細胞で認められた排除は、ジェノタイプ 1a（H77c）のレプリコン細胞でみられた排除と同程度であり、HCV レプリコンの複製阻害における EC50の結果

と一致した。これらのジェノタイプではコロニーの顕著な減少が Day 5（培養開始日= Day 0）までに

17


起こり、Day 10 においても持続した減少がみられた。ジェノタイプ 2a 及び 2b のレプリコン細胞では

HCV RNA は十分に排除されず、このことは BCV のジェノタイプ 2 に対する効力が弱いことと一致

する（Table 2.1-1）。ジェノタイプ 6a 分離株 HN（自然発症多型 A494 を有する）のレプリコン細胞の

排除は、自然発症多型の V494 を有するジェノタイプ 6a 分離株 752 のレプリコン細胞の排除に比べて

弱かった。この結果は、本薬の HN 分離株に対する活性が 752 分離株の約 1/10 であることと一致す

る（Table 2.1-1）。BCV の HN 分離株に対する活性の弱い理由が 494 番のアミノ酸置換によるもので

あることを検証するため、HN 分離株の A を V に置換した（HN-A494V）。その結果、本薬のコロニ

ー排除作用はジェノタイプ 6a HN-A494V 細胞株に対して強力であり、本細胞株の BCV に対する感受

性がジェノタイプ 6a 分離株 752 と類似することが示された。

BCV と本薬に交差耐性のない HCV 阻害薬との併用は、抗ウイルス活性の向上及び単剤投与によるウ

イルス学的ブレイクスルーを抑制する。BCV、DCV 及び ASV の併用（DCV 3DAA）効果を、ジェノ

タイプ 1a の HCV レプリコンを用いて評価した（Figure 2.5.2-2）。HCV レプリコン細胞への BCV 及び

DCV、BCV 及び ASV、又は DCV 及び ASV の併用添加により、生存コロニー数は各 DAA を同様な

濃度倍率（EC50値の 30 倍）で添加した場合に比べて顕著に減少した。HCV RNA の排除において、

DCV 3DAA の HCV レプリコン細胞への添加は、同様な濃度倍率の 2 剤併用に比較して更に効果的で

あり、HCVレプリコンを完全に排除した（EC50値の 30倍濃度での 2剤併用及び DCV 3DAAの比較）。

DAA の 2 剤又は 3 剤併用でみられた HCV RNA 排除作用の増強から、BCV の使用は DCV 及び ASVとの併用が有効であると考えられた。

Figure 2.5.2-2: DAA 併用によるジェノタイプ 1a レプリコンのコロニー形成試験

各阻害薬の濃度は各々の EC50 値に基づく。各試験プレートに加えたすべての阻害薬の合計濃度を列の上

に示す。一例として、BCV 単剤の 30×は EC50値の 30 倍濃度、2 剤併用の BCV の 30×は EC50値の 15 倍濃

度、3 剤併用の BCV の 30×は EC50値の 10 倍濃度を示す。

出典：【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】

18


DCV 3DAA は、それぞれ DCV 及び ASV に耐性を示す非構造蛋白 5A（NS5A）及び非構造蛋白 3（NS3）のアミノ酸置換（それぞれ L31M-Y93H 及び D168V）を含むジェノタイプ 1b 変異レプリコン細胞の

排除にも効果を示した。単剤では、各阻害薬の臨床でのトラフ値相当濃度で NS5A 阻害薬［DCV 及

びレジパスビル（LDV）］の効力が試験した他の阻害薬に比べて顕著であった（Figure 2.5.2-3、A）。

NS5A 阻害薬は EC50値がピコモル濃度範囲で、また、血漿トラフ値を大きく下回る濃度で野生型レプ

リコン細胞を 7 日間以内に十分に排除した。しかし、DCV 及び LDV はいずれも NS5A-L31M-Y93H及び NS3-D168V の双方を有する DCV/ASV 耐性レプリコン細胞を排除できなかった（Figure 2.5.2-3、B）。DCV と ASV の 2 剤併用、DCV 3DAA 並びに DCV 3DAA とリバビリン（RBV）の併用は、野生

型レプリコン細胞を強力に排除した（Figure 2.5.2-3、C）。DCV 3DAA 及び DCV 3DAA と RBV の併用

のみが、DCV/ASV 耐性レプリコン細胞を Day 7 までに排除した（Figure 2.5.2-3、D）。これらの in vitro試験の結果から、DCV 3DAA は DCV 及び ASV の 2 剤併用治療中にウイルス学的エスケープを経験

したジェノタイプ 1b の患者に対する治療選択肢となる可能性のあることが示された。

19


Figure 2.5.2-3: 単剤又は併用によるジェノタイプ 1b野生型及び DCV/ASV耐性レプリコン細

胞株コロニーの排除

各阻害薬の濃度は、臨床における投与24時間後の血漿トラフ値に基づく：ASV = 40 nM、シメプレビル（SMV）

= 2200 nM、BCV= 500 nM、ソホスブビル（SOF）= 1100 nM、DCV = 250 nM、レジパスビル（LDV）= 120 nM、

ペグインターフェロン α（Alfa）= 15 ng/mL、リバビリン（RBV） = 2.5 μg/mL出典：【モジュール 4.2.1.1-6】

2.5.3 交差耐性

ジェノタイプ 1a 又は 1b レプリコンの一過性複製試験では、P495 のいずれの置換が存在しても ASV及び DCV に対する感受性は変化しなかった（Table 2.5.3-1）2。同様に、P495 のいずれの置換も palm site 2に結合する非核酸系NS5B阻害薬（BMS-929075）に対する感受性は変化しなかった（Table 2.5.3-1）。

20


Table 2.5.3-1: BCV の主要な耐性変異に対する他の HCV 標的阻害薬による阻害

ジェノタイプ変異

EC50（nM）

BCV NS5A 複製複合

体阻害薬

NS3 プロテアー

ゼ阻害薬

NS5B palm site 2阻害薬

1a 野生型 4 ± 1 0.008 ± 0.001 1 ± 0 10 ± 0

P495A 57 ± 17 0.009 ± 0.003 1 ± 0 6 ± 1

P495S 186 ± 44 0.009 ± 0.001 1 ± 0 4 ± 1

P495L 130 ± 9 0.008 ± 0.001 2 ± 0 6 ± 1

1b 野生型 6 ± 1 0.002 ± 0 2 ± 1 2 ± 0

P495A 82 ± 6 0.002 ± 0 1 ± 0 1 ± 0

P495S 195 ± 23 0.002 ± 0 2 ± 1 1 ± 0

P495L 316 ± 40 0.002 ± 0 2 ± 0 1 ± 0出典：【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】

一部の C 型慢性肝炎患者で投与開始前に認められる NS5A の耐性変異 L31V-Y93H を含む NS3 及び

NS5A に特異的な耐性変異体は、BCV により野生型と同様に阻害された（Table 2.5.3-2）。BCV が他の

NS5A 耐性変異体（Q30E/K/D、Y93N/H、M28A-Q30R、M28T-Q30H、Q30R-L31M、Q30H-Y93H 及び

Q30R-H58D）も野生型と同様に阻害することを示す更なる in vitro試験の結果はDCVの申請資料（DCVCTD モジュール 2.6.2、表 2.3.2-3）に記載した。

BCV は NS5B の異なる部位（thumb site 2 並びに palm site 1 及び 2）に結合する核酸系及び非核酸系阻

害薬に特異的な耐性変異に対しても阻害活性を維持している（Table 2.5.3-2）。野生型及び変異を有す

るポリメラーゼを用いた類似の試験の結果もレプリコン試験と一致し、BCV が HCV NS5B ポリメラ

ーゼのアロステリック部位を標的とする DAA により選択された耐性変異体を野生型と同様に阻害す

ることが裏付けられた。

Table 2.5.3-2: 各種 HCV 阻害薬に特異的な耐性変異に対する BCV による阻害

標的部位変異 b

BCV 耐性対照 a

EC50 (nM) 野生型との

耐性比IC50 (nM) 野生型との

耐性比

野生型との

耐性比

野生型 Con1 5.0 ± 1.0 1 0.71 ± 0.22 1 1

NS5B thumb site 1

P495S 192 ± 21 38 NA NA –

P495L 316 ± 40 63 > 100 > 140 –

NS5Bcatalytic site S282T 4 ± 1.4 0.8 NA NA 8c

NS5B thumb site 2 M423T 5.0 ± 1.0 1 1.4 ± 0.5 2 20 / 34d

21


Table 2.5.3-2: 各種 HCV 阻害薬に特異的な耐性変異に対する BCV による阻害

標的部位変異 b

BCV 耐性対照 a

EC50 (nM) 野生型との

耐性比IC50 (nM) 野生型との

耐性比

野生型との

耐性比

NS5B palm site 1e

N411S NA NA 0.9 ± 0.4 1.3 3.3

M414I NA NA 0.6 ± 0.3 0.8 0.7

M414L NA NA 0.7 ± 0.3 1 2.7

M414T 7.0 ± 3.0 1.4 1.5 ± 0.9 2.1 192 / 14

M414V NA NA 0.7 ± 0.4 1 0.7

Y448C NA NA 1.4 ± 0.2 2.0 > 192

Y448H NA NA 1.1 ± 0.1 1.6 20

G554D NA NA 2.2 ± 0.2 3.1 > 192

G554S NA NA 0.6 ± 0.3 0.9 1.9

NS5B palm site 2f

C316Y 2.0 ± 1.0 0.4 2.0 ± 1.0 2.8 72 / > 100

S365L NA NA 0.4 ± 0.06 0.6 > 187

S365T NA NA 0.6 ± 0.04 0.8 > 187

S368A NA NA 0.7 ± 0.1 1 1.7

S368T NA NA 0.6 ± 0.1 0.8 7.1

NS3g R155Q 5.3 ± 2.2 1 NA NA ≥ 10

A156V 2.4 ± 0.4 0.5 NA NA ≥ 20

D168V 3.0 ± 0.2 0.6 NA NA ≥ 250

NS5Ah Y93H 3.8 ± 0.9 0.8 NA NA ≥ 10

L31V + Y93H 2.9 ± 0.6 0.6 NA NA ≥ 3000NA = 該当なし

a 対照化合物の変異体に対する評価をレプリコンアッセイ及びNS5Bポリメラーゼアッセイの両方で実施

した場合、両方の野生型との耐性比を併記した（レプリコンアッセイ／NS5B ポリメラーゼアッセイ）b ジェノタイプ 1b の遺伝子背景を有するレプリコン（Con1）に変異を導入c catalytic site 阻害薬に対する耐性の対照値d thumb site 2 阻害薬に対する耐性の対照値e palm site 1 阻害薬に対する耐性の対照値f palm site 2 阻害薬に対する耐性の対照値g ASV に対する耐性の対照値h DCV に対する耐性の対照値

出典：【モジュール 4.2.1.1-4】【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】

共結晶構造解析において NA5B thumb site 2 に結合する対照化合物の BMS-731121 では、P495L 耐性変

異体に対する活性低下が認められた。BMS-731121は thumb site 2阻害薬 4,5,6 に特異的な耐性変異（L419及び M423）体に対しても活性低下を示した。予測された M423T の耐性変異体（レプリコンアッセ

イで20倍及びNS5Bポリメラーゼアッセイで15倍の耐性倍率）に加え、P495Lの変異体もBMS-731121

22


に対して耐性（レプリコンアッセイで 7.1 倍及び NS5B ポリメラーゼアッセイで 4.3 倍の耐性倍率）

を示した（Table 2.5.3-3）。P495L 変異体の BMS-731121 に対する耐性倍率は 4～7 倍であったが、thumb site 2の耐性変異であるM423Tの変異体はBCVに対して野生型と同様な感受性を示し（Table 2.5.3-2）、thumb site 2 阻害薬によって選択された耐性変異を有する変異体は BCV に対し野生型と同程度の感受

性を有することが示された。

Table 2.5.3-3: Thumb site 2 標的化合物（BMS-731121）のレプリコンアッセイにおける EC50

値及び NS5B ポリメラーゼアッセイにおける IC50値

NS5B の変異

（ジェノタイプ 1b）EC50 (µM) 野生型との耐性比 IC50 (µM) 野生型との耐性比

野生型 Con1 0.095 ± 0.021 1 0.016 ± 0.013 1

C316N 0.169 ± 0.016 1.8 0.008 ± 0.001 0.5

C316Y 0.181 ± 0.031 1.9 0.012 ± 0.006 0.8

M414T ND 0.015 ± 0.010 0.9

M423T 1.9 ± 0.4 20 0.242 ± 0.130 15

Y452H ND 0.014 ± 0.101 0.9

P495L 0.671 ± 0.429 7.1 0.069 ± 0.051 4.3ND = 実施せず

出典：【モジュール 4.2.1.1-4 Addendum 01】【モジュール 4.2.1.1-1 Addendum 03】

2.6 In vitro 併用試験

HCV レプリコンシステムを用いた併用試験において、BCV は DCV、ASV、NS5B 核酸系阻害薬、NS5B非核酸系阻害薬等の異なる HCV 蛋白を標的とする低分子化合物との併用で、また、IFNα及び IFNλとの併用で相加又は相乗作用を示した（Table 2.6-1）2。いずれの併用でも細胞毒性の明らかな増強は

みられなかった。

Table 2.6-1: 併用試験の結果の要約

DCV ASV DCV + ASV NS5B NUCa NS5B palmb IFNλ IFNα

相加又は

相乗相加相加

相加又は

相乗相乗相加

相加又は

相乗

a BMS-790453b HCV-796 類似体（BMS-762407）出典：【モジュール 4.2.1.1-1】【モジュール 4.2.1.1-7】

非臨床試験の結果から、BCV が HCV NS5B ポリメラーゼに対する強力で選択的な阻害薬であり、DCV及び ASV との併用により相加から相乗作用を示すことが示された。臨床試験の結果は、BCV の DCV及び ASV への追加がこれら 2 剤の併用効果を増強することを示している。これらの結果から、BCVが C 型慢性肝炎又は C 型代償性肝硬変におけるウイルス血症の改善に対する有用な併用療法の薬剤

になりうることが示された。

23


3 副次的薬理試験

適用なし

4 安全性薬理試験

ICH S7A ガイドラインで推奨される心血管系、中枢神経系及び呼吸系の評価を、主要な BCV の反復

投与毒性試験の一部として実施した。また、一連の in vitro 及び in vivo 安全性薬理試験を実施した。

In vitro 試験では BCV 及び BMS-794712 の受容体及びイオンチャネルのリガンド結合並びに酵素活性

の相対的阻害に及ぼす影響について評価した。心血管系については、hERG/IKr 電流及び心筋イオン

チャネル、ウサギプルキンエ線維の活動電位、摘出ウサギ心臓に及ぼす影響を in vitro 試験で評価し、

麻酔下ウサギ及びイヌを用いたテレメトリー試験により BCV 単回投与の心血管系パラメータに及ぼ

す影響を in vivo で評価した。BCV の曝露量はサルに比べてイヌの方が高かった。

BCV の臨床推奨用量は、75 mg の 1 日 2 回経口投与（150 mg/日）である。臨床推奨用量における定

常状態での BCV のヒト総曝露量（以下、ヒト曝露量）は、Cmax で 1.49 µg/mL、AUC で 17.4 µg∙h/mLであった（AI443014 試験）【モジュール 5.3.5.1-2】。動物の無作用量又は毒性量における BCV 曝露量

のヒト曝露量に対する比は、上記のヒト曝露量を基に算出した（動物の Cmax又は AUC ÷ ヒトの Cmax又は AUC）。In vitro 蛋白結合率は毒性試験で用いた動物種及びヒトで同程度であることから、in vivoでの曝露量との比較において、BCV 遊離体としての補正は行わなかった。In vitro の試験系は本質的

に血液中の蛋白を含まないことから、in vitro 試験における曝露量比は、in vitro 濃度 ÷ 臨床推奨用量

におけるヒトの BCV 遊離体（非結合型）の Cmax（ヒト遊離体 Cmax、0.018 µg/mL）として算出した。

ヒト遊離体 Cmax は、BCV のヒト血漿での蛋白結合率 98.8%【モジュール 2.6.4.4】及び定常状態での

Cmax（1.49 µg/mL）より算出した。

4.1 受容体・イオンチャネル結合及び酵素アッセイ

多様な受容体、酵素及びイオンチャネルのリガンドとの結合に対する BCV の阻害作用を in vitro で評

価した【モジュール 4.2.1.3-1】【モジュール 4.2.1.3-2】。37 種類の薬理学的標的（受容体、酵素、イオ

ンチャネル）のアッセイパネルを用いて BCV 及び BMS-794712 を濃度 6.6 µg/mL で評価した結果、

BCV 及び BMS-794712 の明らかな作用（50%以上の阻害）は、PDE4 酵素の阻害（それぞれ 57%及び

71%阻害）のみであった。U937 細胞（ヒトリンパ腫由来細胞）から単離したヒト PDE4 酵素を用い

たフォローアップ試験【モジュール 4.2.1.3-3】の結果、BCV の IC50 値は 1.3 µg/mL であり、本薬の

PDE4 阻害活性は弱いことが示唆された。TNF-α 産生量を評価した細胞機能アッセイでは、BCV は

PDE4 酵素の弱い阻害薬（31%）でありその IC50値は 6.6 µg/mL 超であった。これらの試験における

BCV の最低 IC50値の 1.3 µg/mL はヒト遊離体 Cmax の 72 倍以上であることから、ヒトにおける標的

外作用の可能性は低いと考えられた。PDE4 阻害は消化管毒性と関係する可能性があるが、ヒトでは

一過性の軽度な消化管症状が認められたのみであった。したがって、これらの消化管症状は、BCVの PDE4 酵素阻害作用が上記の高い曝露量比で認められた弱い作用であること、その他の PDE4 に関

連する所見（抗炎症作用や炎症誘発作用など）7,8がみられなかったことから、ヒトでの消化管症状は

24


本薬の PDE4 阻害作用によるものではないと考えられた。BMS-794712 については、単離酵素や細胞

の機能アッセイによる評価を実施しなかった。

4.2 心血管系（In vitro / In vivo）

BCV の心筋カリウムチャネル（hERG/IKr）、ナトリウムチャネル（SCN5A）及びウサギプルキンエ

線維活動電位に及ぼす影響を in vitro で検討した【モジュール 4.2.1.3-4】。イオン電流の測定は、ホー

ルセルパッチクランプ法を用いて実施し、プルキンエ線維活動電位は標準的微小電極法を用いて記録

した。組換えイオンチャネル［hERG、ナトリウム（SCN5A）］はヒト胎児腎細胞（HEK-293）に安定

発現させた。

hERG アッセイでは、BCV（1.98、6.6 及び 19.8 µg/mL）の作用を最大末尾電流の阻害測定により算出

した。SCN5A アッセイでは BCV（6.6 µg/mL）の作用を最大内向き電流の阻害測定により算出した。

ナトリウムチャネルに及ぼす BCV の頻度依存的な阻害作用を、刺激頻度 1 及び 4 Hz で評価した。ま

た、摘出ウサギプルキンエ線維の活動電位に対する BCV（1.98、6.6 及び 19.8 µg/mL）の再分極に及

ぼす影響を評価した。活動電位パラメータとして、静止膜電位、オーバーシュート、最大立ち上がり

速度、50%及び 90%再分極までの時間（それぞれ APD50及び APD90）を測定した。

BCV は心筋 hERG/IKr カリウムチャネル（IC50 = 8.2 µg/mL）及び SCN5A ナトリウムチャネル（1 及

び4 Hzでそれぞれ62.9%及び66.3%阻害）を中等度に阻害した。ウサギプルキンエ線維アッセイでは、

BCV は 6.6 及び 19.8 µg/mL の濃度で APD50を用量に依存して軽微に増加させ（それぞれ 10.1%及び

14.4%）、最大立ち上がり速度を軽微に減少させた（それぞれ 6.4%及び 7.8%）。APD90及び他の活動電

位パラメータに影響はみられなかった。

以上の結果から、BCV は hERG/IKr 及びナトリウムチャネルを中等度に阻害し、プルキンエ線維アッ

セイにおいて軽微な APD50の増加及び最大立ち上がり速度の減少を示した。これらの影響がみられた

最低濃度 6.6 µg/mL は、ヒト遊離体 Cmax の 367 倍に相当する。これらのことから、本薬がヒトの心

電図に影響を及ぼす可能性は低いと考えられ、in vivo 試験（後述）ではヒト Cmax 又は AUC を超え

る高曝露量においても心血管系への影響はみられなかった。

摘出ウサギ心臓を用いた電気生理学的試験【モジュール 4.2.1.3-5】では、BCV を大動脈の逆行性灌

流により注入し、右心房を 3.5、4、4.5 及び 5 Hz でそれぞれ 30 秒間刺激した。500 Hz における心房

電位図、心電図及び冠灌流量を継続的に記録した。洞房結節機能を洞結節回復時間及び心拍数測定に

より評価した。BCV の試験濃度は 0.7、1.98、6.6 及び 19.8 µg/mL とした。データ解析は、BCV 処置

前及び 10 分間の灌流後について行った。試験終了時に心房内及び心室内の BCV 濃度を測定した。

その結果、0.7 µg/mL 以上で、濃度に依存した心拍数の軽度な減少（4%～18%）及び洞結節回復時間

の軽微な延長（7%～22%）が認められた。In vitro で心血管系パラメータに影響がみられた濃度の 0.7～19.8 µg/mL は、ヒト遊離体 Cmax の 39 倍以上であった。試験終了時の心内の BCV 濃度は 217 µg/mLであり、ヒト遊離体 Cmax の 12056 倍であった。

プロポフォールとフェンタニルによる麻酔下のウサギを用いた in vivo の心臓電気生理学的試験【モ

ジュール 4.2.1.3-6】では、BCV を静脈内に漸増投与した。溶媒［ポリエチレングリコール 400：エタ

25


ノール：水（1:1:1）］又は BCV（1、3、10 及び 15 mg/kg）を 5 分間持続投与し、投与中に心内電位図、

体表心電図及び血圧を継続して記録した。また、心拍数、動脈血圧、洞結節回復時間及び心電図パラ

メータを各用量の持続投与前後に測定した。各用量の持続投与終了後に血液を採取して BCV 及び

BMS-794712 の血漿中濃度を測定し、15 mg/kg の投与終了 30 分後に心臓及び肝臓を採取した。

静脈内持続投与（15 mg/kg）終了直後及び投与終了 30 分後の BCV の平均血漿中濃度はそれぞれ 63.1及び 31.3 µg/mL、BMS-794712 の平均血漿中濃度はそれぞれ 0.3 µg/mL 及び 0.7 µg/mL であった。心房

中及び心室中濃度の血漿中濃度に対する比は、BCV 及び BMS-794712 のいずれもそれぞれ 0.8 未満で

あったことから、本薬の心組織への蓄積は少ないことが示唆された。本試験における BCV の最大濃

度 15 mg/kg まで BCV に関連した心電図パラメータへの影響はみられなかったが、3 mg/kg（血漿中濃

度：13.5 µg/mL）以上で一過性の動脈血圧の軽度～中等度の上昇（投与前値との比較で 9%～19%）

及び心拍数の減少（−20%～−7%）が認められた。本試験における血圧及び心拍数への影響に関する

無作用量は 1 mg/kg（血漿中濃度：7.4 µg/mL）であった。無作用量における Cmax のヒト Cmax との

比は、心電図への影響に関して 42 倍、血圧及び心拍数への影響に関して 5 倍であった。

イヌにおける単回経口投与心血管系テレメトリー試験【モジュール 4.2.1.3-7】では、テレメトリー装

置を装着した雌雄各 3 匹のイヌに溶媒［0.1 M リン酸緩衝液：ヒドロキシプロピルセルロース-SL：D-α-トコフェロールポリエチレングリコールコハク酸（93:5:2 w/w）］を投与して対照とし、その 2 日

以内に BCV を 53 mg/kg の用量で投与した。心拍数、動脈血圧（収縮期、拡張期及び平均血圧）、左

心室圧（収縮期及び拡張末期圧）、左心室圧導出パラメータ（+dp/dt、−dp/dt）、心電図パラメータ（P波持続時間、PR、RR、QRS 及び QT 間隔）、身体活動及び深部体温を、溶媒又は BCV の投与前 1 時

間及び投与後約 22 時間、継続的に測定した。心電図上の QT 間隔を、試験前の基準値から得られた

個々の QT-RR 相関を基に算出した心拍数の 80 拍／分で補正した（QTc）。更に、BCV の投与 4 時間

後（Tmax 付近）及び 24 時間後に臨床症状を観察し、BCV 及び BMS-794712 の血漿中濃度を測定し

た。

投与4時間後におけるBCV及びBMS-794712の血漿中濃度は、雌雄で概して同程度の値であった（Table 4.2-1）。

Table 4.2-1: BCV 投与後の BCV 及び BMS-794712 の平均血漿中濃度

濃度（μg/mL）

用量雄雌雌雄平均

53 mg/kg BCV BMS-794712 BCV BMS-794712 BCV BMS-794712

4 時間後 71.4 2.9 56.4 2.8 63.9 2.8

24 時間後 36.0 5.1 39.6 4.5 37.8 4.8

出典：【モジュール 4.2.1.3-7】

26


投与 4 時間後（雌雄平均血漿中濃度：63.9 µg/mL）に嘔吐が観察された。血圧（全身動脈血圧、左心

室収縮期圧及び拡張末期圧、左心室圧）、心拍数、心電図パラメータ、身体活動及び深部体温に変化

はみられなかった。

テレメトリー試験における投与 4 時間後の BCV の平均血漿中濃度（63.9 µg/mL）は、イヌの 9 ヵ月

間反復経口投与毒性試験【モジュール 2.6.6.3.2.2】の 25 mg/kg/day における平均 Cmax（63.7 µg/mL）と本質的に同等であった。したがって、テレメトリー試験における投与 4 時間後の血漿中濃度は、定

常状態の Cmax に相当する値と考えられた。イヌの心血管系テレメトリー試験における無作用量での

Cmax は、ヒト Cmax の 43 倍であった。

イヌの反復投与毒性試験【モジュール 2.6.6.3.2】でも BCV の心血管系に及ぼす影響を検討した。こ

れらの試験では、BCV を最長 9 ヵ月間、最高用量 25 mg/kg/day（ヒト曝露量と比較して Cmax で 43倍、AUC で 65 倍）を投与したイヌにおいて本薬投与に関連した心血管系への影響を示唆する変化（心

拍数及び心電図への影響、血液生化学検査値及び心臓組織の変化）は認められなかった。

更に、BCV を DCV 及び ASV と併用投与したイヌの反復併用投与毒性試験【モジュール 2.6.6.3.3.2】において、ヒト AUC の最大 8.7 倍で本薬投与に関連した心血管系への影響は認められなかった。

ヒトにおいては、健康被験者に BCV を最高 900 mg で 1 日 1 回、14 日間まで反復投与した臨床試験

（AI443003 試験）【モジュール 5.3.3.1-2】において心臓への影響を示唆する変化はみられなかった。

以上より、BCV が心血管系に影響を及ぼす可能性は低いことが示された。認められた心血管系の作

用は、ヒト遊離体 Cmax の 367 倍の濃度でみられた中等度の hERG 阻害作用及びナトリウムチャネル

阻害作用、プルキンエ線維アッセイにおける軽微な APD50の延長及び最大立ち上がり速度の減少、ヒ

ト遊離体 Cmax の 39 倍の濃度でみられたウサギ摘出心臓試験における心拍数の軽度な減少と洞結節

回復時間の軽微な延長、麻酔下ウサギにおける軽度～中等度の動脈血圧上昇及び心拍数減少（無作用

量はヒト Cmax の 5 倍）であった。本薬の高曝露量下においては、イヌの単回経口投与（ヒト Cmaxの 43 倍）及び最長 9 ヵ月間の反復経口投与（ヒト Cmax の最大 43 倍及びヒト AUC の最大 65 倍）、

イヌ又はサルの DCV、ASV 又は pegIFNα/RBV との最長 1 ヵ月間の併用投与（ヒト AUC の最大 8.7倍）のいずれにおいても心血管系パラメータに影響はみられなかった。

4.3 中枢神経系

BCV の中枢神経系に及ぼす影響を評価するための独立した安全性薬理試験は実施しなかった。有色

Long-Evans ラット及び白色 Sprague Dawley ラットに[14C] BCV を投与した試験【モジュール 4.2.2.3-4】において、本薬の脳組織及び脊髄内濃度は低濃度又は定量下限未満であった。マウスの単回経口投与

毒性試験において、非致死量の 125 mg/kg では中枢神経系に関連した変化はみられなかったが、

375 mg/kg 以上の用量では死亡例がみられ、一般症状として活動性低下、振戦、間代性痙攣、円背位

あるいは横臥位が認められた。ラットの単回経口投与トキシコキネティクス及び忍容性試験【モジュ

ール 2.6.6.2.2】では、300 mg/kg まで変化は認められなかったが、625 mg/kg で死亡、活動性低下、半

眼、立毛、腹臥位及び流涎が観察された。イヌの単回経口投与トキシコキネティクス及び忍容性試験、

ラットの 2 週間経口投与毒性試験、ラットの最長 6 ヵ月間及びイヌの最長 9 ヵ月間の主要な反復経口

27


投与毒性試験【モジュール 2.6.6.3】では、ヒト AUC の最大 79 倍の高曝露量でも神経学的な臨床症状

や神経組織の組織学的所見に BCV 投与に関連した変化は認められなかった。

また、イヌの最長 9 ヵ月間の反復経口投与毒性試験（最高用量 25 mg/kg/day）【モジュール 2.6.6.3.2】で実施した理学的検査の結果、ヒト AUC の 65 倍まで行動、運動並びに末梢神経及び中枢神経機能へ

の影響を示唆する変化はみられなかった。

BCV とASV 及び DCVをラット及びイヌに併用投与した試験【モジュール 2.6.6.3.3】においても、ヒ

ト AUC の最大 8.7 倍の曝露量で BCV投与に関連した中枢神経系の影響は認められなかった。


（AI443003 試験）【モジュール 5.3.3.1-2】において中枢神経系への影響はみられなかった。

以上より、BCV がヒトの中枢神経系に影響を及ぼす可能性は低いと考えられた。中枢神経系に関連

した所見はマウスにおいて致死量のみで発現したものであり、ラット及びイヌの反復経口投与試験で

はヒト AUC 及び Cmax のそれぞれ最大 79 倍及び 47 倍の高曝露量でも中枢神経系に関連した所見は

認められなかった。イヌ又はサルに BCV を ASV、DCV 又は pegIFNα/RBV と最長 1 ヵ月間併用投与

した試験でも、BCV の曝露量がヒト AUC の最大 8.7 倍でも中枢神経系の影響は認められなかった。

4.4 呼吸系

BCV の呼吸系に及ぼす影響を評価するための独立した安全性薬理試験は実施しなかった。マウスの

単回経口投与毒性試験【モジュール 2.6.6.2.1】において、非致死量の 125 mg/kg では呼吸系に関連し

た変化はみられなかったが、375 mg/kg 以上の用量では、死亡例に努力性呼吸が認められた。ラット

の最長 6 ヵ月間及びイヌの最長 9 ヵ月間の反復経口投与毒性試験【モジュール 2.6.6.3】では、ラット

で最高 300 mg/kg/day、イヌで最高 25 mg/kg/day の用量まで呼吸系の機能や肺の組織学的所見に BCV投与に関連した変化は認められなかった。

BCV のイヌの 1 ヵ月間反復経口投与試験【モジュール 2.6.6.3.2.1】において呼吸数、肺音（胸部聴診）

及び動脈血酸素飽和度（パルス酸素濃度計）検査を実施した結果、最高用量 25 mg/kg/day（ヒト AUCの 72 倍）まで本薬投与に関連した影響はみられなかった。

BCV とASV 及び DCVをラット及びイヌに併用投与した試験【モジュール 2.6.6.3.3】においても、ヒ

ト AUC の最大 8.7 倍の曝露量で BCV 投与に関連した呼吸系の影響は認められなかった。


（AI443003 試験）【モジュール 5.3.3.1-2】において呼吸系への影響はみられなかった。

以上より、本薬がヒトの呼吸系に影響を及ぼす可能性は低いと考えられた。ラット及びイヌの反復投

与毒性試験ではヒト AUC 及び Cmax のそれぞれ最大 79倍及び 47倍の高曝露量でも BCV投与に関連

した呼吸器系への影響は認められなかった。

28


5 薬力学的薬物相互作用

異なる HCV 蛋白を特異的に標的とする抗ウイルス薬との併用療法により、HCV 感染患者から HCVを完全に排除できる可能性がある。ウイルス遺伝子が宿主細胞に組み入れられる HIV とは異なり、

HCV は感染患者から排除可能である。しかし、HCV は世代交代が早く、RNA ポリメラーゼの校正機

構が欠如しているため、遺伝子配列の不均一性が増大する。これにより単剤投与でしばしば認められ

る耐性ウイルスのブレイクスルーが生じると考えられている。このブレイクスルーを抑制する BCVの効果について、他の抗 HCV 薬の存在下で HCV レプリコンアッセイにより検討した【モジュール

4.2.1.1-1】2。その結果、BCV と IFNα、IFNλ又は他の DAA との併用により相加又は相乗作用が認め

られた（2.6 項、Table 2.6-1）。また、コロニー排除試験において、DCV 及び ASV に BCV を追加する

ことにより耐性発現が抑制された（Figure 2.5.2-2 及び Figure 2.5.2-3）。これらの結果から、BCV が C型慢性肝炎患者に対する有用な併用療法の薬剤になりうることが示された。

6 考察及び結論

BCV は HCV NS5B ポリメラーゼを阻害し、ジェノタイプ 1a、1b、3a 及び 5a のポリメラーゼに対す

る IC50値は 1.8～4.8 nM、ジェノタイプ 4a 及 6a に対する IC50値は 7.6～61.6 nM、また、ジェノタイ

プ 2a 及び 2b に対する IC50値は 164～228 nM であった。BCV は哺乳類の DNA ポリメラーゼ α、β及び γ並びに他のウイルスポリメラーゼに対する活性を有さず、本薬が HCV NS5B を特異的に標的と

することが示された。

細胞培養による HCV レプリコンアッセイにおいて、BCV のジェノタイプ 1a 及び 1b に対する EC50

値は1.6～9.5 nM、ジェノタイプ3a、4a及び5aのハイブリッドレプリコンに対するEC50値は0.8～18 nMであった。ジェノタイプ 6a に対する EC50値は 8.6～79.5 nM の範囲であり、European Hepatitis C Virus Database1で 21%の保存率の変異（V494A）が存在する場合は低感受性を示した。ジェノタイプ 2a 及び 2b のレプリコンに対する EC50値は 87～1000 nM 超であった。以上の結果から、BCV がジェノタ

イプ 1、3a、4a 及び 5a に対して最も強力な作用を有することが示された。循環血中の主要な代謝物

である BMS-794712及びヒト胆汁及び糞中に検出された数種の微量代謝物（BMT-110547、BMT-171207及び BMT-142478）は、BCV と同程度の活性を有する。

BCV は近縁の BVDV を含む一連の RNA 及び DNA ウイルスに対して活性を示さなかった。また、ヒ

ト肝組織由来細胞株 Huh-7 での治療係数は 3300 超であった。本薬の抗ウイルス活性の蛋白結合によ

る影響はわずかであった。これらのことから、BCV が HCV を選択的に阻害することが示された。

BCV は NS5B ポリメラーゼの thumb site 1 に結合し、本酵素に構造的な変化を生じさせる。共結晶構

造試験及びトリプシン消化試験により、その変化は BCV の結合による本酵素のアロステリックな構

造変化であることが確認された。BCV はポリメラーゼの転写開始を時間依存的、非競合的に阻害す

る。結合試験の結果、BCV と HCV NS5B ポリメラーゼの相互作用は可逆的であった。これらのこと

から、BCV がポリメラーゼの不活性化により HCV を阻害すると考えられた。

29


BCV 耐性細胞の分離及び変異部位のマッピングにより、ジェノタイプ 1 における主要な耐性部位が

P495 であることが特定された。耐性変異により BCV に対し野生型の 15～64 倍（EC50値）の耐性が

生じた。概してレプリコンの複製効率は耐性の程度と逆相関し、耐性が高い変異は genetic barrier が高い（耐性を獲得しにくい）ことが示唆された。ジェノタイプ 3a の主要な耐性置換は C494S であり、

そのEC50値は野生型の約34倍の耐性を示した。ジェノタイプ4aの主要な耐性変異はV494A及びP495Aであり、それぞれの EC50値は野生型の 3.4 倍及び 25 倍の耐性を示した。ジェノタイプ 5a では P495Hが 167 倍の耐性を示した。ジェノタイプ 6a では V494A が BCV に対し 17 倍の耐性を示した。ジェノ

タイプ 1、3a、4a、5a 及び 6a で認められた主要な耐性部位（494 番及び 495 番のアミノ酸）のアミノ

酸は、European Hepatitis C Virus Database ではジェノタイプ 1～6 において高度に保存されており、P495はジェノタイプ 1～5のすべてのアミノ酸配列に、ジェノタイプ 6aでは 95%に保存されていた。また、

V494 はジェノタイプ 1、4 及び 5 のすべてのアミノ酸配列に、ジェノタイプ 6a では 79%に保存され

ていた（A494 の変異はジェノタイプ 6a の 21%に存在）。ジェノタイプ 3a に存在する C494 の変異は、

BCV に対する感受性に影響しなかった。これらのことから、BCV の結合部位はジェノタイプ 1、3a、4a、5a 及び 6a で比較的保持されていることが示された。

ジェノタイプ 1a、1b、3a、4a、5a 及び 6a レプリコンの BCV に対する耐性置換では、ASV 及び DCVの感受性には変化がみられなかった。また、BCV は ASV 及び DCV に特異的な耐性変異並びに BCVと異なる NS5B 部位に結合する核酸系及び非核酸系阻害薬に特異的な耐性変異に対しても、活性を維

持する。したがって、BCV は他の DAA による耐性変異を有するレプリコン及び野生型を同程度に阻

害すると考えられた。

IFNα、IFNλ又は他の HCV 蛋白（NS3 又は NS5A）を特異的に標的とする阻害薬との併用試験を実施

した結果、BCV は相加又は相乗作用を示した。BCV、DCV 及び ASV の 3 剤併用により HCV RNA の

排除の増強が認められた。また、臨床使用に相当する濃度の BCV を DCV 及び ASV と併用すること

により、DCV 及び ASV にそれぞれ耐性を示す NS5A（L31M-Y93H）及び NS3（D168V）のアミノ酸

置換を有するジェノタイプ 1bの変異レプリコンが排除された。これらの in vitro試験の結果から、BCVが他の HCV 治療薬との併用投与により C 型慢性肝炎患者に対する有用な治療法となること、また、

NS5A及びNS3阻害薬の治療によりウイルス学的耐性を獲得した患者に対する選択肢となることが期

待される。

心血管系の in vitro 及び in vivo 安全性薬理評価並びに中枢神経系及び呼吸系の in vivo 安全性薬理評価

は、主要な毒性試験に組み込み、あるいは独立した安全性薬理試験として実施した。BCV の単剤及

び DCV、ASV 又は pegIFNα/RBV との併用によるこれらの非臨床試験の結果、ヒトの曝露量より高曝

露量でも本薬の臨床使用上の問題が示唆される所見は認められなかった。

以上の BCV の薬理学的プロファイルから、本薬が HCV の特異的な阻害薬であり、C 型慢性肝炎患者

に対する併用療法において有用な薬剤になりうることが示された。

30


7 参考文献

1 euHCVdb: The European HCV Database: an international collaborative effort mainly dedicated to HCV protein sequences. Home page available from URL: http://euhcvdb.ibcp.fr/euHCVdb/

2 Pelosi LA, Voss S, Liu M, et al. Effect on hepatitis C virus replication of combinations of direct-acting antivirals, including NS5A inhibitor daclatasvir. Antimicrob Agents Chemother. 2012; 56:5230-9.

3 Sims KD, Lemm J, Eley T, et al. Randomized, placebo-controlled, single-ascending-dose study of BMS-791325, a hepatitis C virus (HCV) NS5B polymerase inhibitor, in HCV genotype 1 infection. Antimicrob Agents Chemother. 2014; 58:3496-3503.

4 Denis R, Poisson C, Das S, et al. New thiophene derivatives are viral replication inhibitors - useful for the treatment of flavivirus infections. WO-2006119646.

5 Biswal BK, Wang M, Cherney MM, et al. Non-nucleoside inhibitors binding to hepatitis C virus NS5B polymerase reveal a novel mechanism of inhibition. J Mol Biol. 2006; 361:33-45.

6 Howe AYM, Cheng H, Thompson I, et al. Molecular mechanism of a thumb domain hepatitis C virus nonnucleoside RNA-dependent RNA polymerase inhibitor. Antimicrob Agents Chemother. 2006; 50:4103-4113.

7 Lipworth BJ. Phosphodiesterase-4 inhibitors for asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Lancet. 2005; 365:167-175.

8 McCluskie K, Klein U, Linnevers C, et al. Phosphodiesterase type 4 inhibitors cause proinflammatory effects in vivo. J Pharmacol Exp Ther. 2006; 319:468-476.

31

2.6.3 薬理試験概要表 Hepatitis CBMS-790052/BMS-650032/BMS-791325 beclabuvir

Table of Contents

1 薬理試験：一覧表......................................................................................................................... 2

2 効力を裏付ける試験..................................................................................................................... 6

3 安全性薬理試験........................................................................................................................... 10

1


1 薬理試験：一覧表

Table 2.6.3.1: Pharmacology Overview

Type of Study Test System Method of Administration Testing Facility

Study No./Document

Control No.

Location in Dossier

Primary Pharmacodynamics

Anti-HCV NS5B polymerase activity

Activity against recombinant HCV NS5B polymerase detected by monitoring a decrease in the incorporation of radiolabeled nucleotides into RNA

In vitro Bristol-Myers Squibb

Addendum 01: 930026274

4.2.1.1-1

Anti-HCV activity in cell-based HCV replicon assays

Measurement of HCV subgenomic RNA replication in Huh-7 cells


Addendum 01:930026274

Addendum 02: 930026274930062736

4.2.1.1-14.2.1.1-2

Human serum effect on anti-HCV potency



930026274 4.2.1.1-1

Specificity for HCV NS5B polymerase

Activity against recombinant enzymes; competition binding assays


930026274 4.2.1.1-1

Selectivity for HCV in cell culture

Antiviral activities against 9 different viruses and replicons


930026274 4.2.1.1-1

Cytotoxicity Assessed in a panel of cell lines treated up to 5-days


930026274 4.2.1.1-1

Activity of BCV metabolites in NS5B polymerase and HCV replicon assays

Activity against recombinant HCV NS5B polymerase (GT-1b, Con 1) and against GT-1a and -1b replicons


930079910 4.2.1.1-3

Mode of action - inhibitor binding

Co-crystal structures In vitro Bristol-Myers Squibb

930026275 4.2.1.1-4

Mode of action - kinetics BCV in activity and binding assays with purified NS5B polymerase


Addendum 02: 930026275

4.2.1.1-4

2


Table 2.6.3.1: Pharmacology Overview (Continued)


Study No./Document

Control No.

Location in Dossier

Mode of action - resistance Resistant HCV replicons [GT-1a, -1b, -3a, -4a, -5a, -6a] were selected by growingcells in the presence of BCV at concentrations 5 to 30-fold above EC50. The genotypic basis for resistance was determined by sequence analysis of RT-PCR derived NS5B cDNA clones. Additional variants identified from in vitroselection with BCV in combination with DCV and/or ASV, or observed in the in vivo SAD study, or published for other NS5B inhibitors targeting thumb site 1 were also characterized. Mutations were introduced into a wild type NS5B background to evaluate their contribution to resistance in transient replication assays and/or in stable cell lines.


Addendum 03: 930026274930026275

Addendum 01: 930026275930047193

4.2.1.1-14.2.1.1-44.2.1.1-5

Eradication of HCV RNA Subgenomic HCV RNA replication and colony formation in Huh-7 cells


930026275Addendum 03:

930026274930087876

4.2.1.1-44.2.1.1-14.2.1.1-6

Cross-resistance with other anti-HCV agents

BCV activity assays with purified wild type and resistance associated NS5B polymerases


930026275 Addendum 01:

930026275

4.2.1.1-4

Cross-resistance with other anti-HCV agents

Cell-based HCV replicon assay in Huh-7 cells


930026275Addendum 01:

930026275Addendum 03:

930026274

4.2.1.1-44.2.1.1-1

Combination studies Cell-based HCV replicon assay in Huh-7 cells


930026274930045187

4.2.1.1-14.2.1.1-7

3




Study No./Document

Control No.

Location in Dossier

Safety Pharmacology

Receptors, enzymes, ion channels, and transporters

NA In vitro Bristol-Myers Squibb

DT07118/930025444

4.2.1.3-1


NA In vitro Bristol-Myers Squibb

DT07119/930025474

4.2.1.3-2


PDE4 enzyme isolated from U937 cells In vitro Bristol-Myers Squibb

DT07141/930025722

4.2.1.3-3


Human/peripheral blood mononuclear cells (LPS-induced TNF-α production)


DT07141/930025722

4.2.1.3-3

Cardiovascular Human/HEK 293 cells and hERG channel


DT08003/930025850

4.2.1.3-4

Cardiovascular Human/HEK 293 cells and sodium channel (SCN5A)


DT08003/930025850

4.2.1.3-4

Cardiovascular Rabbit/cardiac Purkinje fiber In vitro Bristol-Myers Squibb

DT08003/930025850

4.2.1.3-4

Cardiovascular Rabbit/isolated heart


DT07115/930025681

4.2.1.3-5

Cardiovascular Rabbit/New Zealand white

IV infusion Bristol-Myers Squibb

DT06108/930025654

4.2.1.3-6

Cardiovascular Dog/Beagle (telemetered) Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DT06143/930025849

4.2.1.3-7

CNS and Respiratory Mouse/Crl:CD1 (ICR) Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DN07053/930025838

4.2.3.1-1

CNS and Respiratory Rats/Crl:CD (SD) Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DN07049/930025873

4.2.3.2-2

4




Study No./Document

Control No.

Location in Dossier

CNS and Respiratory Rats/Crl:CD (SD) Oral (gavage) DM08022/930041847

4.2.3.2-3

CNS and Respiratory Rats/Crl:CD (SD) Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DM09003930037771

4.2.3.2-8

Cardiovascular, Neurologic, and Respiratory

Dog/Beagle Oral capsule Bristol-Myers Squibb

DN07050/930025836

4.2.3.2-4


Dog/Beagle Oral capsule DM08023/930043648

4.2.3.2-5


Dog/Beagle Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DM09002/930038063

4.2.3.2-9


Dog/Beagle Oral (gavage) Bristol-Myers Squibb

DM09009/930040309

4.2.3.2-10

5


2 効力を裏付ける試験

Table 2.6.3.2: Primary Pharmacodynamics

In VitroType of Study Test System Noteworthy Findings Testing Facility

Report Document

Control No.

Location in Dossier

Anti-HCV NS5B polymerase activity

Activity against recombinant HCV NS5B polymerase is detected by monitoring a decrease in the incorporation of radiolabeled nucleotides into RNA.

Potent non-nucleoside inhibitor of HCV NS5B polymerase, with IC50 values of 1.8 to 4.8 nM against GT-1a, -1b, -3a, and -5a; 7.6 to 61.6 nM against GT-4a and -6a; and 165 to 228 nM against GT-2a and -2b.

Bristol-Myers Squibb

Addendum 01: 930026274

4.2.1.1-1

Anti-HCV activity in cell-based HCV replicon assays


Broad genotype (GT) coverage with EC50 = 1.6 to 9.5 nM for GT-1a and -1b lab strains (H77c, Con1) and hybrid replicons constructed from patient NS5B sequences; EC50 = 0.8 to 18 nM for GT-3a, -4a, and -5a hybrid replicons from patient NS5B sequences; EC50 = 8.6 to 79.5 nM for GT-6a, with reduced susceptibility in some isolates due to the V494A polymorphism present in 21% of the population; and EC50 = 87 to > 1000 nM for GT-2.


Addendum 01: 930026274

Addendum 02: 930026274930062736

4.2.1.1-14.2.1.1-2

Human serum effect on anti-HCV potency


No significant potency change (4.4 ± 1.5 fold) for GT-1b replicon in the presence of 40% human serum.


930026274 4.2.1.1-1

Specificity for HCV NS5B polymerase

Activity against recombinant enzymes; competition binding assays.

No activity observed against mammalian polymerases-α, β, and γ; BVDV polymerase; HIV RT; Klenow polymerase; HIV integrase(IC50 > 40 µM). No binding to RNA or DNA was detected (IC50 > 20 µM).


930026274 4.2.1.1-1

Selectivity for HCV in cell culture

Antiviral activities against 9 different viruses and replicons

No significant activity against BVDV replicon (> 14 μM) and a panel of RNA and DNA viruses (BVDV, HIV, Influenza, CPIV, human Rhinovirus, Coxsackie virus, Poliovirus, HSV-1 and HSV-2) with EC50 values > 4 μM.


930026274 4.2.1.1-1

6


Table 2.6.3.2: Primary Pharmacodynamics (Continued)


Report Document

Control No.

Location in Dossier

Cytotoxicity A panel of mammalian cell lines derived from various tissues were treated up to 5-days

CC50 values ranged from 14 - 30 μM Bristol-Myers Squibb

930026274 4.2.1.1-1

Activity of BCV metabolites in NS5B polymerase and HCV replicon assays

Activity against recombinantHCV NS5B polymerase (GT-1b, Con 1) and against GT-1a and -1b replicons

BMS-794712 has activity that is equal to BCV(EC50 2 to 4 nM). Other metabolites BMT-171207, BMT-110547 and BMT-142478 have less replicon activity (EC50 values 4 to 50 nM). BMS-948158 has little or no activity in HCV replicon assays (EC50 8000 to 14000 nM). With the exception of BMS-948158, which has approximately 60-fold less intrinsic activity in NS5B polymerase assays, all metabolites tested have intrinsic activity similar to BCV.


930079910 4.2.1.1-3

Mode of action -inhibitor binding

Co-crystal structure study Co-crystal structure study showed BCV binds to the thumb domain (thumb site 1) of NS5B polymerase.


930026275 4.2.1.1-4

Mode of action -kinetics

BCV in activity and binding assays with purified NS5B polymerase

A time-dependent inhibitor of polymerase initiation. A plot of apparent Ki vs template or GTP confirmed the modality as non-competitive, with Ki values of 1.1 ± 0.1 nM and 2.6 ± 0.4 nM for template and GTP, respectively. Binding studies revealed the interaction between BCV and the HCV NS5B polymerase has a reversible, two-step, slow-binding mechanism.


Addendum 02: 930026275

4.2.1.1-4

7




Report Document

Control No.

Location in Dossier

Mode of action -resistance

Resistant HCV replicons [GT-1a, -1b, -3a, -4a, -5a, -6a] were selected by growing replicon cells in the presence of BCV at concentrations 5 to 30-fold above EC50. The genotypic basis for resistance was determined by sequence analysis of RT-PCR derived NS5B cDNA clones. Additional variants identified from in vitro selections with BCV in combination with DCV and/or ASV, or observed in the in vivo SAD study, or published for other NS5B inhibitors targeting thumb site 1 were also characterized. Mutations were introduced into a wild type NS5B background to evaluate their contribution to resistance in transient replication assays and/or in stable cell lines.

GT-1 substitutions were observed at NS5B proline (P) 495. P was replaced with serine (S)/alanine (A)/leucine (L)/threonine (T) in GT-1a; S/A/L in GT-1b. Individual substitutionsconferred 15- to 64-fold resistance (EC50 58 to 378 nM). In general, replicon replication efficiency correlated inversely with the degree of resistance, suggesting a higher genetic barrier for more resistant changes. GT-3a: 494 is cysteine (C) whereas V is present in other genotypes. C494S was the predominant substitution, conferring approximately 34-fold resistance (EC50 170 ± 14 nM). GT-4a: substitutions emerged at residues V494 and P495. V494A had minimal impact on potency (approximately 3.4-fold; EC50 15.5 ± 3.5 nM); P495A conferred 25-fold resistance (EC50 111 ± 41 nM). GT-5a: histidine (H)/L/S substitutions emerged at P495. The P495H conferred 167-fold resistance (EC50 670 ± 30 nM); the P495L/S variants did not replicate. GT-6a: V494A was the only substitution observed, conferring 17-fold resistance (EC50179 ± 9.5 nM).


Addendum 03:930026274930026275

Addendum 01: 930026275930047193

4.2.1.1-14.2.1.1-44.2.1.1-5

Eradication of HCV RNA

Subgenomic HCV RNA replication and colony formation in Huh-7 cells

BCV can specifically eradicate HCV RNA from replicon cells. Also, BCV combined with DCV and ASV can eradicate a GT-1b variant replicon containing linked NS5A (L31M-Y93H) and NS3 (D168V) amino acid substitutions conferring resistance to both DCV and ASV, respectively


930026275Addendum 03:

930026274930087876

4.2.1.1-44.2.1.1-14.2.1.1-6

8




Report Document

Control No.

Location in Dossier

Cross-resistance withother anti-HCV agents

BCV activity assays with purified wild type and resistance associated NS5B polymerases

IC50 values for BCV vs. variants that deliver resistance to thumb site 2 and palm site NS5B inhibitors were essentially the same as wild type.


930026275Addendum 01:

930026275

4.2.1.1-4

Cell-based HCV replicon assay in Huh-7 cells

No cross resistance was observed between BCV and other DAAs (inhibitors of NS5A or NS3 protease). BCV retains activity against the signature resistance variants of nucleoside and non-nucleoside inhibitors that bind to different NS5B sites (thumb site 2 and palm site 1 and 2).


930026275Addendum 01:

930026275Addendum 03:

930026274

4.2.1.1-44.2.1.1-1

Combination studies Cell-based HCV replicon assay in Huh-7 cells

BCV showed additive to synergistic effects with small molecules targeting different HCV proteins, including DCV and ASV, as well as NS5B nucleoside inhibitors, a NS5B non-nucleoside inhibitor, IFNα, RBV and IFNλ.


930026274930045187

4.2.1.1-14.2.1.1-7

Abbreviations: AA: amino acid; BMS: Bristol-Myers Squibb Co.; BVDV: bovine viral diarrhea virus; CC50: concentration of drug to kill 50% of cells; CPIV: canine parainfluenza virus; DNA: deoxyribonucleic acid; cDNA: complementary DNA; EC50: 50% effective concentration in reducing viral or replicon replication; HCV: hepatitis C virus; HIV: human immunodeficiency virus; HSV: herpes simplex virus; IC50: concentration of drug to inhibit 50% of NS5B polymerase activity; IFN: interferon; μM: micromolar; nM: nanomolar; pM: picomolar; NS3: non-structural protein 3; NS5A: non-structural protein 5A; NS5B: non-structural protein 5B; RBV: ribavirin; RNA: ribonucleic acid; RT-PCR: Reverse transcriptase polymerase chain reaction.

9


3 安全性薬理試験

Table 2.6.3.3: Safety Pharmacology

Organ Systems Evaluated

Species/Strain

Method of Administration

Doses (mg/kg)

Gender and

No. per Group

Noteworthy Findings GLP Compliance

Study No./Document

Control No.

Receptors, Enzymes, Ion Channels, and Transporters

NA In vitro 10 µM (6.6 µg/mL)

NA Inhibited activity of human PDE4 enzyme by 57%.

nonGLP DT07118/930025444

NA In vitro BMS-794712 (metabolite):

10 µM (6.5 µg/mL)

NA Inhibited activity of human PDE4 enzyme by 71%.

nonGLP DT07119/930025474

PDE4 enzyme

isolated from U937 cells

In vitro 0.64 nM -10 µM

(4.22 × 10-4 to 6.6 µg/mL)

NA Weak inhibition of PDE4 activity, IC50 1.9 µM.

nonGLP DT07141/930025722

Human/peripheral

blood mononuclear cells (LPS-

induced TNF-α production)

In vitro 4.6 nM -10 µM

(0.003 to 6.6 µg/mL)

NA Weak activity in the cellular assay with 31% inhibition at 10 µM; IC50> 10 µM.

nonGLP DT07141/930025722

Cardiovascular Human/HEK 293 cells

and hERG channel

In vitro 3, 10, 30 µM (1.98, 6.6,

19.8 µg/mL)

NA Moderate effect on hERG potassium channel currents: 13.5%, 45.0%, and 73.5% inhibition at 3, 10, and 30 µM, respectively; IC50 of 12.4 µM.

nonGLP DT08003/930025850

Human/HEK 293 cells

and sodium channel

(SCN5A)

In vitro 10 µM (6.6 µg/mL)

NA Moderate effect on cardiac sodium channel currents: 62.9% and 66.3% inhibition at 1 and 4 Hz stimulation frequency, respectively.

nonGLP DT08003/930025850

10


Table 2.6.3.3: Safety Pharmacology (Continued)


Species/Strain


Doses (mg/kg)

Gender and

No. per Group


Study No./Document

Control No.

Cardiovascular (Continued)

Rabbit/cardiac

Purkinje fiber

In vitro 3, 10, 30 µM (1.98, 6.6,

19.8 µg/mL)

NA Minimal increases in APD50 (10% and 14%) and minimal decreases in Vmax (6.4% and 7.8%) at 10 and 30 µM, respectively. No other significant effects on any parameter including APD90.

nonGLP DT08003/930025850

Rabbit/isolated heart

In vitro 1, 3, 10, 30 µM (0.7,

1.98, 6.6, 19.8 µg/mL)

NA Mild, dose-dependent decreases in heart rate (4% to 18%) and minimal increases in sinus node recovery time (7% to 22%) at ≥ 1 µM.

nonGLP DT07115/930025681

Rabbit/New Zealand

white

IV infusion 0, 1, 3, 10, and 15 mg/kg

cumulative dosing

3 M (vehicle control)

3 M (BCV)

At doses ≤ 15 mg/kg, there were no effects on ECG parameters (systemic exposures up to 95.7 µM, 63.1 µg/mL; NOEL 15 mg/kg). At doses ≥ 3 mg/kg (systemic concentrations ≥ 20.5 µM, 13.5 µg/mL), there were mild to moderate increases in arterial blood pressure (9% to 19% relative to predose) and a mild to moderate decrease in heart rate (7% to 20% relative to predose); the heart rate effects did not occur in a dose-dependent manner. The NOEL for heart rate and blood pressure changes was 1 mg/kg (systemic exposure 11.2 µM, 7.4 µg/mL).

nonGLP DT06108/930025654

11




Species/Strain


Doses (mg/kg)

Gender and

No. per Group


Study No./Document

Control No.

Cardiovascular (Continued)

Dog/Beagle

(telemetered)

Oral gavage 0 and 53 mg/kg

(single dose)/amorphous free base

3 M, 3 F 53 mg/kg: No changes in heart rate, systemic or ventricular blood pressures, or ECG parameters (P duration, PR, QRS, RR, or rate-corrected QT intervals); vomitus at 4 hours post dose. Mean 4-hour sex-combined BCV plasma concentration of 64 µg/mL (97 µM) and BMS-794712 plasma concentration of 2.8 µg/mL (4.4 µM).

nonGLP DT06143/930025849

CNS and Respiratory

Mouse/Crl:CD1

(ICR)

Oral (gavage) 0, 125, 375, 1250

(single dose)

5 M, 5 F 125 mg/kg: No respiratory or CNS effects.≥ 375 mg/kg: Decreased activity, tremors, clonic convulsions, recumbency, hunched posture, and/or labored respiration.

GLP DN07053/930025838

Rat/Crl:CD (SD)

Oral (gavage) 0, 5, 15, 50 (1 month)

15 M, 15 F ≤ 50 mg/kg: No drug-related effects on neurologic or respiratory function were observed. Cmax values ≤ 33.7 μg/mL; AUC values ≤ 436 μg∙h/mL.

GLPa DN07049/930025873

Rat/Crl:CD (SD)

Oral (gavage) 0, 5, 20, 80(6 months)

20 M, 20 F ≤ 80 mg/kg/day: No noteworthy findings. Cmax values ≤ 69.7 μg/mL; AUC values ≤ 1380 μg∙h/mL.

GLP DM08022/930041847

Rat/Crl:CD (SD)

Oral (gavage) BCV:0, 15, 30

ASV:0, 30, 60(1 month)

10 M, 10 F ≤ 30 mg/kg/day: No toxicologically significant drug-related effects. Cmax values ≤ 15.4 μg/mL; AUC values ≤ 192 μg∙h/mL.

GLP DM09003930037771

12




Species/Strain


Doses (mg/kg)

Gender and

No. per Group


Study No./Document

Control No.


Dog/Beagle

Oral capsule 0, 1, 5, 25(1 month)

5 M, 5 F ≤ 25 mg/kg: No effects on neurologic or respiratory function or ECG parameters (heart rhythms, heart rate, amplitudes [heights of P, R, T waves; negative T wave heights; and depths of ST segments], or intervals [P wave and QRS complex durations, PR and QT intervals, or corrected QT intervals]). Day 16 mean Cmax ≤ 73 µg/mL; AUC values ≤ 1250 μg∙h/mL.

GLPb DN07050/930025836

Dog/Beagle

Oral capsule 0, 1, 5, 25(9 month)

6 M, 6 F ≤ 25 mg/kg: No effects on neurologic or respiratory function or ECG parameters (heart rhythms, heart rate, amplitudes [heights of P, R, T waves; negative T wave heights; and depths of ST segments], or intervals [P wave and QRS complex durations, PR and QT intervals, or corrected QT intervals]). Week 39 mean Cmax ≤ 64 μg/mL; AUC ≤ 1135 μg∙h/mL.

GLPb DM08023/930043648

Dog/Beagle

Oral (gavage) BCV:0, 1.5, 3DCV:

0, 3, 15(1 month)

4 M, 4 F ≤ 3 mg/kg: Day 29 mean Cmax ≤ 10 μg/mL; AUC ≤ 152 μg∙h/mL

GLPc DM09002/930038063

13




Species/Strain


Doses (mg/kg)

Gender and

No. per Group


Study No./Document

Control No.

Cardiovascular, Neurologic, and Respiratory (Continued)

Dog/Beagle

Oral (gavage) BCV:0, 1.5, 3DCV:

0, 3, 15ASV:

0, 7.5, 15(1 month)

4 M, 4 F ≤3 mg/kg: Day 29 mean Cmax ≤ 5.84 μg/mL; AUC ≤ 103 μg∙h/mL

GLPd DM09009/930040309

a Study conducted in compliance with GLP regulations with the exception of analysis of liver samples for BCV and BMS-794712 concentrations which used nonvalidated methods in a nonGLP laboratory.

b Study conducted in compliance with GLP regulations with the exceptions of the analysis of liver samples for BCV and BMS-794712 concentrations which used nonvalidated methods in a nonGLP laboratory and pretest hematology samples were analyzed using validated methods but in a nonGLP laboratory.

c Study conducted in compliance with GLP regulations with the exception of analysis of liver and plasma concentrations of BCV, DCV, and BMS-794712 at necropsy.

d Study conducted in compliance with GLP regulations with the exception of analysis of BCV, DCV, ASV, and BMS-794712 in liver and liver/plasma ratios that were derived from these data and the evaluation of TK interactions.

Abbreviation: NA = Not applicable; pegIFN = pegylated interferon α-2b.All footnotes are available as table end notes.

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hcl...• hcl bcv は hcv に対して選択的であり、細胞培養によるhcv...

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