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Extração e determinação de metilxantinas em extratos de guaraná por CLAE-DAD. F. N. dos SANTOS 1 , H. MEDRADO 1 , J. M. DAVID 1 , P. R. R. MESQUITA 1 , R. A. F. SANTOS 1 , L. S. LIMA 1 e J. P. DAVID 2 1 Instituto de Química, ²Faculdade de Farmácia - Universidade Federal da Bahia Palavras Chave: metilxantinas, extratos vegetais, guaraná, CLAE. Introdução: O guaraná (Paullinia cupana KUNTH ex H.B.K., sapidaceae) é muito utilizado no preparo de bebidas energéticas naturais e refrigerantes devido às suas propriedades estimulantes sobre o sistema cardiovascular e o sistema nervoso central, atribuídas às metilxantinas presentes no extrato de guaraná (de Moraes, M. de L. L., Analytica, vol. 05, 44, 2003). Sendo assim, nesse trabalho foi desenvolvido um método rápido para extração e determinação por CLAE-DAD do teor de cafeína, teobromina e teofilina em extratos comerciais de guaraná. Parte experimental: A extração de metilxantinas das amostras de xarope de guaraná foi realizada levando-se à ebulição 50 mL de extrato de guaraná por 30 min. Após aquecimento, o extrato foi filtrado e neutralizado com solução de hidróxido de amônio (50%) e extraído com 3 porções de clorofórmio:isopropanol (3:1 v/v). Em seguida, a fase orgânica foi seca com Na 2 SO 4 anidro e evaporada em evaporador rotário. O mesmo procedimento foi aplicado às misturas padrões de metilxantinas (cafeína, teobromina e teofilina). As frações obtidas foram submetidas à análise por CLAE-DAD. Empregou-se uma coluna C18 SHIMADZU, de 150x2 mm, 5 μm, em sistema isocrático formado por H 2 O:MeCN (50:50) com fluxo de 22,5 mL/min. Resultados/Discussão: A Figura 1 mostra um cromatograma CLAE-DAD da separação dos padrões de teobromina, teofilina e cafeína. A Figura 2 apresenta um cromatograma CLAE-DAD dos padrões das metilxantinas no extrato de guaraná mostrando que as impurezas da matriz não interferem na separação das metilxantinas. As Figuras de mérito do método proposto para quantificação das metilxantinas são mostradas na Tabela 1. Foram analisadas seis amostras de xarope de guaraná comerciais sendo detectada a teobromina e a teofilina em três amostras e cafeína em todas as amostras. O teor de teofilina em duas amostras foi de 5,88±0,20 e 12,68±0,24 μg mL -1 (n = 3) e o teor de cafeína variou de 2,18±0,45 a 31,25±0,51 μg mL -1 (n = 3). Conclusão: Nesse trabalho foi desenvolvido um método de análise de metilxantinas por CLAE- DAD rápido, livre de interferentes e com desempenho analítico adequado para quantificação de metilxantinas em extratos de guaraná. Financiamento: Pronex/FAPESB/CNPq, UFBA Agradecimentos: UFBA Figura 1. Cromatograma CLAE-DAD de teobromina Figura 2. Cromatograma CLAE-DAD de impureza (2,43 min), teofilina (3,95 min) e cafeína (7,90 min). da matriz (2,30 min), teobromina (3,0 min), teofilina (5,0 min) e cafeína (8,3 min). Tabela 1. Figuras de mérito do método proposto para quantificação das metilxantinas. Faixa de concentração investigada (1,0 50,0 μg mL -1 ). Metilxantinas Curva analítica R 2 LD (μg mL -1 ) LQ (μg mL -1 ) Teobromina Y=0,249x+0,1296 0,9975 0,40 1,0 Teofilina Y=0,201x+0,0633 0,9975 1,57 5,0 Cafeína Y=0,154x+0,0825 0,9980 0,62 1,0

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Page 1: Extração e determinação de metilxantinas em extratos ...€¦ · preparo de bebidas energéticas naturais e refrigerantes devido às suas propriedades estimulantes sobre o sistema

Extração e determinação de metilxantinas em extratos de guaraná por CLAE-DAD.

F. N. dos SANTOS1, H. MEDRADO1, J. M. DAVID1, P. R. R. MESQUITA1, R. A. F. SANTOS1, L. S.

LIMA1 e J. P. DAVID2

1Instituto de Química, ²Faculdade de Farmácia - Universidade Federal da Bahia Palavras Chave: metilxantinas, extratos vegetais, guaraná, CLAE.

Introdução: O guaraná (Paullinia cupana KUNTH ex H.B.K., sapidaceae) é muito utilizado no preparo de bebidas energéticas naturais e refrigerantes devido às suas propriedades estimulantes sobre o sistema cardiovascular e o sistema nervoso central, atribuídas às metilxantinas presentes no extrato de guaraná (de Moraes, M. de L. L., Analytica, vol. 05, 44, 2003). Sendo assim, nesse trabalho foi desenvolvido um método rápido para extração e determinação por CLAE-DAD do teor de cafeína, teobromina e teofilina em extratos comerciais de guaraná. Parte experimental: A extração de metilxantinas das amostras de xarope de guaraná foi realizada levando-se à ebulição 50 mL de extrato de guaraná por 30 min. Após aquecimento, o extrato foi filtrado e neutralizado com solução de hidróxido de amônio (50%) e extraído com 3 porções de clorofórmio:isopropanol (3:1 v/v). Em seguida, a fase orgânica foi seca com Na2SO4 anidro e evaporada em evaporador rotário. O mesmo procedimento foi aplicado às misturas padrões de metilxantinas (cafeína, teobromina e teofilina). As frações obtidas foram submetidas à análise por CLAE-DAD. Empregou-se uma coluna C18 SHIMADZU, de 150x2 mm, 5 μm, em sistema isocrático formado por H2O:MeCN (50:50) com fluxo de 22,5 mL/min. Resultados/Discussão: A Figura 1 mostra um cromatograma CLAE-DAD da separação dos padrões de teobromina, teofilina e cafeína. A Figura 2 apresenta um cromatograma CLAE-DAD dos padrões das metilxantinas no extrato de guaraná mostrando que as impurezas da matriz não interferem na separação das metilxantinas. As Figuras de mérito do método proposto para quantificação das metilxantinas são mostradas na Tabela 1. Foram analisadas seis amostras de xarope de guaraná comerciais sendo detectada a teobromina e a teofilina em três amostras e cafeína em todas as amostras. O teor de teofilina em duas amostras foi de 5,88±0,20 e 12,68±0,24 µg mL-1 (n = 3) e o teor de cafeína variou de 2,18±0,45 a 31,25±0,51 µg mL-1 (n = 3). Conclusão: Nesse trabalho foi desenvolvido um método de análise de metilxantinas por CLAE-DAD rápido, livre de interferentes e com desempenho analítico adequado para quantificação de metilxantinas em extratos de guaraná. Financiamento: Pronex/FAPESB/CNPq, UFBA Agradecimentos: UFBA

Figura 1. Cromatograma CLAE-DAD de teobromina Figura 2. Cromatograma CLAE-DAD de impureza (2,43 min), teofilina (3,95 min) e cafeína (7,90 min). da matriz (2,30 min), teobromina (3,0 min), teofilina (5,0 min) e cafeína (8,3 min). Tabela 1. Figuras de mérito do método proposto para quantificação das metilxantinas. Faixa de concentração investigada (1,0 – 50,0 µg mL

-1).

Metilxantinas Curva analítica R

2 LD (µg mL

-1) LQ (µg mL

-1)

Teobromina Y=0,249x+0,1296 0,9975 0,40 1,0

Teofilina Y=0,201x+0,0633 0,9975 1,57 5,0

Cafeína Y=0,154x+0,0825 0,9980 0,62 1,0