Extração dna

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    Organizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen e Jorge Oyakawa Diagramao: Regina de Siqueira BuenoOrganizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen e Jorge Oyakawa

    EXTRAO CASEIRA DE DNA MORANGO

    Selecionar 3 morangos e tirar os seus cabinhos verdes.

    Colocar os morangos dentro de um saco plstico e macer-los pressionando os morangos com os dedos at obter uma pasta quase homognea. Transferir a pasta de morango para um copo.

    Em outro copo misturar 150 ml de gua, uma colher (sopa) de detergente e uma colher (ch) de sal de cozinha. Mexer bem com o basto de vidro, porm devagar para no fazer espuma.

    Colocar cerca de 1/3 da mistura de gua, sal e detergente sobre o macerado de morango. Misturar levemente com o basto de vidro.

    Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo basto.

    Colocar uma peneira sobre um copo limpo e passar a mistura pela peneira para retirar os pedaos de morango que restaram.

    Colocar metade do lquido peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo.

    Despejar delicadamente no tubo (pela parede do mesmo), sobre a soluo, dois volumes de lcool comum. No misturar o lcool com a soluo. Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA comear a precipitar na interfase.

    Passo opcional. Usar um palito de vidro, plstico ou madeira para enrolar as molculas de DNA. Gire o palito na interface entre a soluo e o lcool.

    SAL

    DETERGENTE

    150 mlGUA

    Incubar por 30 minutos

    Aguardar 3 minutos

    lcool

    Organizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen Diagramao: Regina de Siqueira BuenoOrganizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen

    EXTRAO CASEIRA DE DNA MORANGO EXTRAO CASEIRA DE DNA MORANGO EXTRAO CASEIRA DE DNA MORANGO EXTRAO CASEIRA DE DNA MORANGOOrganizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen

    Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA comear a precipitar

  • ETAPAS PREPARATRIAS:

    Antes da aula:

    Providenciar morangos maduros. Polpa de morango congelado tambm pode ser usada.Comprar lcool comercial comum 98% (sem gel).

    Material suficiente para 3 grupos de at 10 estudantes.

    Morangos maduros 3 sacos plsticos para macerao dos morangos 3 colheres de sopa 3 colheres de ch 9 copos de vidro transparente 3 recipientes contendo sal de cozinha 3 frasco com detergente (sem cor) de lavar loua. 3 frasco com lcool comercial 98% 3 provetas ou 3 frasco contendo 150 mL de gua 3 peneiras ou coadores de ch 6 tubos de ensaio grandes 3 bastes de vidro, plstico ou madeira 3 protocolos com os procedimentos

    Observaes:

    aconselhvel realizar a prtica, antes da aula, para ajustar as quantidades relativas de tecidos a partir dos quais o DNA ser extrado e a relao entre os volumes do macerado e do lcool. aconselhvel usar gua quente na mistura com sal e detergente (cerca de 65 oC), uma vez que o tempo de incubao est reduzido.Outras frutas podem ser usadas aplicando-se o mesmo protocolo: tomate bem maduro (meio tomate por extrao) ou banana (meia banana por extrao). Cata los de cebola sem a casca tambm apresentam bom resultado. Se usar cebola pique-a em pedaos bem pequenos em vez de macera-la (meia cebola por extrao).Durante o perodo da incubao, o professor pode conduzir uma discusso sobre a localizao do DNA no ncleo, a composio da membrana plasmtica e a ao do detergente sobre a membrana.Antes da aula prtica importante que os alunos j tenham os seguintes conceitos:

    O DNA est no ncleo da clulao As membranas celulares so formadas por uma dupla camada lipdica.o

    Se voc professor e deseja aplicar esse protocolo em sala de aula siga as seguintes etapas preparatrias:

    2

    Providenciar morangos maduros. Polpa de morango congelado

    Se voc professor e deseja aplicar esse protocolo em sala de aula

  • ETAPAS PREPARATRIAS:

    ANEXO 1

    Sugestes de atividades correlatas

    Durante o perodo de incubao discutir o protocolo com os estudantes usando uma gura de uma clula vegetal e solicitar a eles que apontem as membranas da clula e do ncleo que estariam sendo rompidas pela ao do detergente. Neste momento, rever a composio qumica das membranas celulares. Rever o conceito de protena e no que estas diferem das enzimas capazes de acelerar as reaes qumicas que ocorrem durante o metabolismo celular.

    Aplicar, com os alunos o jogo Cara a cara com a clula, disponvel em www.genoma.ib.usp.br/educacao/materiais_didaticos.php. Chamar a ateno dos alunos sobre a localizao do DNA nos diferentes tipos de clula.

    Rever, com os alunos os diferentes tratamentos capazes de promover a lise mecnica ou qumica da clula para a liberao do seu contedo. Comentar sobre o tratamento utilizado no procedimento apresentado e compar-lo com tratamentos com enzimas ou mesmo autlise espontnea ou induzida.

    Solicitar aos alunos que tragam para a sala de aula fotos ou guras de um ambiente qualquer. Na foto pedir que marquem com um X os locais em que o DNA encontra-se contido dentro do ncleo de uma clula. Resgatar alguns dos trabalhos realizados e discutir com toda a classe a correo ou no dos itens assinalados.

    Sugesto de questes para serem respondidas pelos grupos de estudantes aps (ou durante) a realizao da extrao de DNA.

    1. Por que necessrio macerar o morango?2. Em que etapa do procedimento ocorre o rompimento das membranas das clulas do

    morango? Explique.3. Qual a funo do sal de cozinha?4. Qual o papel do lcool?5. Por que voc no pode ver a dupla hlice do DNA extrado?6. Considerando os procedimentos da extrao do DNA genmico, voc espera obt-lo sem

    quebras mecnicas e/ou qumicas?

    Respostas para as questes:

    1. O morango precisa ser macerado para que os produtos qumicos utilizados para a extrao cheguem mais facilmente em todas as suas clulas.

    2. Na etapa 4. Os detergentes so normalmente empregados para dissolver gorduras ou lipdios. Como a membrana celular tem em sua composio qumica uma grande quantidade de lipdios, sob a ao do detergente, estes se tornam solveis e so extrados junto com as protenas que tambm fazem parte das membranas.

    3. O sal de cozinha ou NaCl (cloreto de sdio) fornece ons que so necessrios para a fase de precipitao do DNA (veja complementao na resposta seguinte).

    4. O DNA extrado das clulas do morango encontra-se na fase aquosa da mistura, ou seja, dissolvido na gua. Na presena de lcool e de concentraes relativamente altas de Na+ (fornecidas pelo sal de cozinha) o DNA sai de soluo, isto , ele precipitado. O precipitado aparece na superfcie da soluo, isto , na interface entre a mistura aquosa e o etanol.

    5. A molcula de DNA pode ser extremamente longa, mas seu dimetro de apenas 2 nanmetros, visvel apenas em microscopia eletrnica. Assim sendo, o que se v aps a precipitao um emaranhado formado por milhares de molculas de DNA.

    6. O DNA genmico formado por molculas muito longas (lembre-se que cada cromossomo formado por uma nica molcula de DNA). Por exemplo, o maior cromossomo humano possui 263 milhes de pares de bases. Assim sendo, praticamente impossvel extrair o DNA sem que inmeras quebras mecnicas ocorram durante os procedimentos de extrao.

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