expresión de pd-1 y sus ligandos pd-l1 y pd-l2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al...

22
Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microambiente inmune tumoral y su relación con el hábito tabáquico en pacientes con cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) KRAS mutado. Antonio Calles 1 , Xiaoyun Liao 1 , Lynette M. Sholl 2 , Mohit Butaney 1 , Scott J. Rodig 2 , Gordon J. Freeman 1 , Christine Lydon 1 , F. Stephen Hodi 1,3,4 , Geoffrey Oxnard 1,3 , David M. Jackman 1,3 , and Pasi A.Jänne 1,3,4 1 Medical Oncology, Dana Farber Cancer Institute; 2 Department of Pathology, 3 Department of Medicine, Brigham and Women’s Hospital; 4 Harvard Medical School, Boston, MA (USA)

Upload: others

Post on 22-Apr-2020

13 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el

microambiente inmune tumoral y su relación con el

hábito tabáquico en pacientes con cáncer de pulmón no

microcítico (CPNM) KRAS mutado.

Antonio Calles1, Xiaoyun Liao1, Lynette M. Sholl2, Mohit Butaney1, Scott J.

Rodig2, Gordon J. Freeman1, Christine Lydon1, F. Stephen Hodi1,3,4, Geoffrey

Oxnard1,3, David M. Jackman1,3, and Pasi A.Jänne1,3,4

1Medical Oncology, Dana Farber Cancer Institute; 2Department of Pathology, 3Department of Medicine, Brigham and Women’s Hospital;

4Harvard Medical School, Boston, MA (USA)

Page 2: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Introducción

• El bloqueo del punto de control inmunológico

con anticuerpos dirigidos contra PD-1 o PD-L1

está siendo evaluado en ensayos clínicos en

cáncer de pulmón (CPNM): – Las respuestas clínicas parecen estar

asociadas a la expresión de PD-L1 y son

más frecuentes en fumadores.

– PD-1 tiene 2 ligandos conocidos que inhiben

al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2.

• La mutación KRAS es la más frecuente en

adenocarcinoma de pulmón: – Descrita en 30% de los fumadores y en el

10% de los no fumadores.

– No hay tratamientos específicos para

pacientes con mutaciones en KRAS.

Page 3: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Objetivo y métodos

Objetivo

Analizar el perfil de expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en cáncer de pulmón no

microcítico KRAS mutado y su relación con las características clínicas y moleculares de los

pacientes.

Page 4: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Bloque en parafina de CPNM KRAS

mutado* n = 114

Fumadores n = 84

No fumadores n = 30

IHQ PD-L1 PD-L2 PD-1

Objetivo y métodos

Métodos

•Estudio retrospectivo utilizando una base de datos institucional de casos genotipados en DFCI/BWH entre 2008-2013.

•Identificamos 514 pacientes KRAS mutados de 1818 pacientes genotipados.

• * Se obtuvo Consentimiento Informado de los pacientes bajo un protocolo aprobado por el Comité Ético Institucional.

• La presencia de tejido tumoral fue confirmada por un Patólogo.

• El genotipado de las mutaciones KRAS se realizó en un laboratorio CLIA certificado.

• Paquetes de tabaco/año = nº cigarrilos al día/20 x años de consumo.

• Definición No fumadores: < 100 cigarrilos a lo largo de su vida.

• Definición Ex-fumadores: Abandono del consumo ≥ 1 año antes del diagnóstico de CPNM.

Objetivo

Analizar el perfil de expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en cáncer de pulmón no

microcítico KRAS mutado y su relación con las características clínicas y moleculares de los

pacientes.

Page 5: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Inmunohistoquímica:

•PD-L1 (clon 9A11) – Definición de positivo: >5% células tumorales con tinción en membrana.

– Intensidad (0, negativo, 1+, débil; 2+, moderado; 3+, intenso) y % de tumor inmunorreactivo.

•PD-L2 (clon 9E5) – Definición de positivo: >10% células tumorales con tinción citoplasmática

– Intensidad (0, negativo, 1+, débil; 2+, moderado; 3+, intenso) y % de tumor inmunorreactivo.

•PD-1 (clon EH33) – Número absoluto de Linfocitos Infiltrantes Tumorales positivos contados en microscopio de 20x aumento.

– Para cada preparación, se eligieron 5 zonas representativas y se calculó la media de las 5 zonas.

Todas las tiniciones evaluadas por un Patólogo sin acceso a información clínica.

Evaluación de cada tinción al menos en duplicado en un intervalo de una semana.

Pacientes y métodos

Topalian, NEJM 2012

IHC 1+ IHC 2+ IHC 3+

PD

-L2

Page 6: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Resultados

* 114 casos seleccionados de 511 casos KRAS mutados. No hubo diferencias en las características clínicas o moleculares de los

casos seleccionados vs. los no seleccionados tanto en fumadores como en no fumadores.

Page 7: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Resultados

* 114 casos seleccionados de 511 casos KRAS mutados. No hubo diferencias en las características clínicas o moleculares de los

casos seleccionados vs. los no seleccionados tanto en fumadores como en no fumadores.

Page 8: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

No hay diferencias clínicas o moleculares según status PD-L1 o PD-L2

Page 9: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

No hay diferencias clínicas o moleculares según status PD-L1 o PD-L2

Page 10: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

P = 0.03

La expresión de PD-L1 se asocia al tabaquismo en CPNM KRAS mutado

La incidencia de expresión tumoral de PD-L1+ en la población global es del 24% (IC95%: 16-33%)

Page 11: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

La expresión de PD-L1 se asocia al tabaquismo en CPNM KRAS mutado

Page 12: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

IHC-0 IHC-1+ IHC-2+ IHC-3+

Po

rcen

taje

de p

acie

nte

s

Never Former Current

(n=3) (n=17) (n=7)

Intensidad de expresión de PD-L1

P = 0.03

(n=87)

La expresión de PD-L1 se asocia al tabaquismo en CPNM KRAS mutado

Page 13: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

IHC-0 IHC-1+ IHC-2+ IHC-3+

Po

rcen

taje

de p

acie

nte

s

Never Former Current

(n=3) (n=17) (n=7)

Intensidad de expresión de PD-L1

P = 0.03

(n=87)

La expresión de PD-L1 se asocia al tabaquismo en CPNM KRAS mutado

Page 14: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

IHC-0 IHC-1+ IHC-2+ IHC-3+ P

rop

ort

ion

of

pati

en

ts

Never Former Current

(n=17) (n=15) (n=22)

Intensidad de expresión de PD-L2

P = 0.52

12/25

24/59

18/30

13/25

35/59

12/30

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

Current smokers Former smokers Never-smokers

Pro

po

rtio

n o

f p

ati

en

ts

Positive Negative

(n=25) (n=30) (n=59)

Incidencia de expresión de PD-L2

P = 0.24

(n=60)

PD-L2 no se asocia al tabaquismo en CPNM KRAS mutado

La incidencia de expresión tumoral de PD-L2+ en la población global es del 47% (IC95%: 38-57%)

Page 15: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Heterogeneidad de PD-1 y sus ligandos en CPNM KRAS mutado

Page 16: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

PD-1

200μm

PD-L1 PD-L2

CD3

200μm 200μm

200μm

Heterogeneidad de PD-1 y sus ligandos en CPNM KRAS mutado

Page 17: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

PD-1

200μm

PD-L1 PD-L2

CD3

PD-L1- PD-L2+ PD-1+ 25%

PD-L1- PD-L2- PD-1+

25%

PD-L1- PD-L2-

PD-1- 16%

PD-L1+ PD-L2- PD-1+

10%

PD-L1- PD-L2+ PD-1- 11%

PD-L1+ PD-L2+ PD-1+

8%

PD-L1+ PD-L2+ PD-1-

3%

PD-L1+ PD-L2- PD-1-

200μm 200μm

200μm

Heterogeneidad de PD-1 y sus ligandos en CPNM KRAS mutado

Page 18: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

La expresión de PD-L1 disminuye con la antigüedad del bloque tumoral

P = 0,016

Page 19: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

La expresión de PD-L1 disminuye con la antigüedad del bloque tumoral

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

2013-2011 (n=41)

2010-2008 (n=60)

>2008 (n=13)

PD-L2

P = 0,016 P = 0,438

Page 20: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Cambios en la expresión de PD-L1, PD-L2 y PD-1 con la evolución de la enfermedad

• Análisis exploratorio en 8 pacientes con biopsias seriadas disponibles

• Pacientes heterogéneos: diferentes estadios y tratamientos recibidos

• 3 pacientes sin quimioterapia

• En 2 pacientes cambió status PD-L1/PD-L2 entre el primario y la metástasis

• 5 pacientes con quimioterapia

• En 3 pacientes cambió status PD-L1/PD-L2

• 2 progresiones cerebrales PD-L2 +, con tumores inicialmente PD-L2 negativo

Page 21: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

Conclusiones • Reportamos el uso de 3 nuevos anticuerpos con alta sensibilidad y especificidad para

PD-L1, PD-L2 y PD-1 que pueden utilizarse en la práctica clínica.

• PD-1 y sus ligandos, PD-L1 y PD-L2, tienen una expresión heterogénea en CPNM KRAS mutado:

– PD-L1 se expresa en un ≈25% de los casos y se relaciona con el hábito tabáquico.

• Mayor incidencia de expresión y de intensidad de expresión en fumadores vs. no fumadores.

• Ausencia de asociación con distintas mutaciones de KRAS (expresión no genéticamente dependiente)

– PD-L2 se expresa casi en el doble de pacientes que PD-L1, y no se asocia a la expresión de PD-L1 ni al tabaquismo.

• Implicaciones terapéuticas: Uso preferente de anti-PD1 vs. anti-PD-L1 en pacientes KRAS mutados (?)

– La presencia o ausencia de TILs activados PD-1+ no se asocia con la expresión de los ligandos PD-L1 o PD-L2.

• Efecto de inflamación en el tumor y anergia, presencia de otros ligandos, expresión constitutiva, etc.

• Subgrupo de pacientes con alta infiltración linfocitaria tumoral PD-1+ y expresión intensa de PD-L1 (correlación con mejor respuesta a terapia inmune?)

• Detectamos cambios en la expresión de PD-L1:

– Relacionados con la antigüedad del bloque tumoral.

– A lo largo de la evolución de la enfermedad en pacientes con biopsias seriadas.

– Recomendación: Utilizar muestras recientes para determinar el estado de PD-L1.

Page 22: Expresión de PD-1 y sus ligandos PD-L1 y PD-L2 en el microcítico … · 2014-10-31 · al linfocito T activado: PD-L1 y PD-L2. • La mutación KRAS es la más frecuente en adenocarcinoma

AGRADECIMIENTOS

The Jänne lab

Pasi Jänne Mohit Butaney Kristen Labbe

DFCI TOP Genomics

Christine Lydon Peter Lo Jennifer Heng Pathology @ BWH

Lynette Sholl Scott Rodig

Center for Immuno-Oncology

Stephen Hodi Gordon Freeman Xiaoyun Liao

Biostatistics HSPH

Suzanne Dahlberg

DFCI Thoracic Oncology Program

Bruce Johnson Geoffrey Oxnard David Jackman