estudo comparativo da anÁlise macroscopica e … · estudo comparativo macroscópico dos defeitos...
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Universidade Federal de Pernambuco
Centro de Ciecircncias da Sauacutede
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Cirurgia
Paulo Cezar Vidal C de Albuquerque
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE MACROSCOPICA E
HISTOLOacuteGICA DOS DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS
EM COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL
DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
Tese submetida ao Colegiado de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal de Pernambuco como parte dos
requisitos para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Doutor em
Cirurgia
Orientador Interno
Prof Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Prof Associado do Depto de Cirurgia CCS UFPE
Orientador Externo
Prof Saulo Monteiro dos Santos
Prof Adjunto do Depto De Cirurgia CCS UFPE
Linha de Pesquisa
Biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
RECIFE - PE
2011
Albuquerque Paulo Cezar Vidal C de
Estudo comparativo da anaacutelise macroscoacutepica e histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar Paulo Cezar Vidal C de Albuquerque ndash Recife O Autor 2011
72 folhas il fig 30 cm
Orientador Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Tese (doutorado) ndash Universidade Federal de
Pernambuco CCS Cirurgia 2011
Inclui bibliografia e anexos
1 Biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar 2 Osteocondral -
Defeitos 3 Cartilagem articular - Terapia 4
Trauma articular I Aguiar Joseacute Lamartine de
Andrade IITiacutetulo
UFPE
6173 CDD (20ed) CCS2011-78
Universidade Federal de Pernambuco
REITOR
Prof Amaro Henrique Pessoa Lins
VICE-REITOR
Prof Gilson Edmar Gonccedilalves e Silva
PROacute-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E POacuteS-GRADUACcedilAtildeO
Prof Aniacutesio Brasileiro de Freitas Dourado
CENTRO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE
DIRETOR Prof Joseacute Thadeu Pinheiro
HOSPITAL DAS CLIacuteNICAS
DIRETOR SUPERINTENDENTE Prof George da Silva Telles
DEPARTAMENTO DE CIRURGIA
CHEFE
Prof Salvador Vilar Correia Lima
PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM CIRURGIA
NIacuteVEL MESTRADO E DOUTORADO
COORDENADOR
Prof Carlos Teixeira Brandt
VICE-COORDENADOR
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
CORPO DOCENTE
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
Prof Carlos Teixeira Brandt
Prof Claacuteudio Moura Lacerda de Melo
Prof Edmundo Machado Ferraz
Prof Fernando Ribeiro de Moraes Neto
Prof Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar
Prof Salvador Vilar Correia Lima
Prof Siacutelvio Caldas Neto
Normatizaccedilatildeo Adotada
Esta Tese estaacute de acordo com
Referecircncias adaptado do International Committee of Medical Journals Editors (Vancouver)
disponiacutevel no endereccedilo eletrocircnico httpwwwicmjeorg
Universidade Federal de Pernambuco ndash Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo Estrutura de
apresentaccedilatildeo de dissertaccedilatildeo e tese sob forma de artigos cientiacuteficos conforme proposta dos
Programas de Poacutes-Graduaccedilatildeo do Centro de Ciecircncias da Sauacutede (CCS) da Universidade Federal
de Pernambuco ndash Recife Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo 2004
Dedicatoacuteria
Ao meu pai Humberto Paulo Carneiro de Albuquerque (in memoriam) principal
responsaacutevel pela minha formaccedilatildeo pessoal e profissional Dele recebi a heranccedila da forccedila do
trabalho da perseveranccedila do desenvolvimento do senso criacutetico do questionamento e da
instigaccedilatildeo para a ciecircncia da vida
Agrave minha matildee Janyce Vidal Carneiro de Albuquerque que tanto se dedicou agrave
minha formaccedilatildeo pessoal e intelectual
Agrave minha esposa Maria Luacutecia companheira que sempre me apoiou valorizou o
meu esforccedilo e mais uma vez praticando todo seu amor e carinho foi capaz de suportar as
interminaacuteveis horas de privaccedilatildeo do conviacutevio familiar durante a construccedilatildeo deste trabalho
Agraves minhas filhas Clarissa e Paula Eduarda frutos de nosso amor e a continuaccedilatildeo
das nossas vidas
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
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4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Albuquerque PCVC
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
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[Epub ahead of print]
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bioreabsorviacutevel (PLLAPHBV) para uso na recuperaccedilatildeo de fraturas oacutesseas Poli Cienc Tecnol 2008
18312-9
14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-383
15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
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24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
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Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
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27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
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28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
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29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
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30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Albuquerque Paulo Cezar Vidal C de
Estudo comparativo da anaacutelise macroscoacutepica e histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar Paulo Cezar Vidal C de Albuquerque ndash Recife O Autor 2011
72 folhas il fig 30 cm
Orientador Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Tese (doutorado) ndash Universidade Federal de
Pernambuco CCS Cirurgia 2011
Inclui bibliografia e anexos
1 Biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar 2 Osteocondral -
Defeitos 3 Cartilagem articular - Terapia 4
Trauma articular I Aguiar Joseacute Lamartine de
Andrade IITiacutetulo
UFPE
6173 CDD (20ed) CCS2011-78
Universidade Federal de Pernambuco
REITOR
Prof Amaro Henrique Pessoa Lins
VICE-REITOR
Prof Gilson Edmar Gonccedilalves e Silva
PROacute-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E POacuteS-GRADUACcedilAtildeO
Prof Aniacutesio Brasileiro de Freitas Dourado
CENTRO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE
DIRETOR Prof Joseacute Thadeu Pinheiro
HOSPITAL DAS CLIacuteNICAS
DIRETOR SUPERINTENDENTE Prof George da Silva Telles
DEPARTAMENTO DE CIRURGIA
CHEFE
Prof Salvador Vilar Correia Lima
PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM CIRURGIA
NIacuteVEL MESTRADO E DOUTORADO
COORDENADOR
Prof Carlos Teixeira Brandt
VICE-COORDENADOR
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
CORPO DOCENTE
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
Prof Carlos Teixeira Brandt
Prof Claacuteudio Moura Lacerda de Melo
Prof Edmundo Machado Ferraz
Prof Fernando Ribeiro de Moraes Neto
Prof Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar
Prof Salvador Vilar Correia Lima
Prof Siacutelvio Caldas Neto
Normatizaccedilatildeo Adotada
Esta Tese estaacute de acordo com
Referecircncias adaptado do International Committee of Medical Journals Editors (Vancouver)
disponiacutevel no endereccedilo eletrocircnico httpwwwicmjeorg
Universidade Federal de Pernambuco ndash Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo Estrutura de
apresentaccedilatildeo de dissertaccedilatildeo e tese sob forma de artigos cientiacuteficos conforme proposta dos
Programas de Poacutes-Graduaccedilatildeo do Centro de Ciecircncias da Sauacutede (CCS) da Universidade Federal
de Pernambuco ndash Recife Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo 2004
Dedicatoacuteria
Ao meu pai Humberto Paulo Carneiro de Albuquerque (in memoriam) principal
responsaacutevel pela minha formaccedilatildeo pessoal e profissional Dele recebi a heranccedila da forccedila do
trabalho da perseveranccedila do desenvolvimento do senso criacutetico do questionamento e da
instigaccedilatildeo para a ciecircncia da vida
Agrave minha matildee Janyce Vidal Carneiro de Albuquerque que tanto se dedicou agrave
minha formaccedilatildeo pessoal e intelectual
Agrave minha esposa Maria Luacutecia companheira que sempre me apoiou valorizou o
meu esforccedilo e mais uma vez praticando todo seu amor e carinho foi capaz de suportar as
interminaacuteveis horas de privaccedilatildeo do conviacutevio familiar durante a construccedilatildeo deste trabalho
Agraves minhas filhas Clarissa e Paula Eduarda frutos de nosso amor e a continuaccedilatildeo
das nossas vidas
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Universidade Federal de Pernambuco
REITOR
Prof Amaro Henrique Pessoa Lins
VICE-REITOR
Prof Gilson Edmar Gonccedilalves e Silva
PROacute-REITOR PARA ASSUNTOS DE PESQUISA E POacuteS-GRADUACcedilAtildeO
Prof Aniacutesio Brasileiro de Freitas Dourado
CENTRO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE
DIRETOR Prof Joseacute Thadeu Pinheiro
HOSPITAL DAS CLIacuteNICAS
DIRETOR SUPERINTENDENTE Prof George da Silva Telles
DEPARTAMENTO DE CIRURGIA
CHEFE
Prof Salvador Vilar Correia Lima
PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM CIRURGIA
NIacuteVEL MESTRADO E DOUTORADO
COORDENADOR
Prof Carlos Teixeira Brandt
VICE-COORDENADOR
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
CORPO DOCENTE
Prof Aacutelvaro Antocircnio Bandeira Ferraz
Prof Carlos Teixeira Brandt
Prof Claacuteudio Moura Lacerda de Melo
Prof Edmundo Machado Ferraz
Prof Fernando Ribeiro de Moraes Neto
Prof Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar
Prof Salvador Vilar Correia Lima
Prof Siacutelvio Caldas Neto
Normatizaccedilatildeo Adotada
Esta Tese estaacute de acordo com
Referecircncias adaptado do International Committee of Medical Journals Editors (Vancouver)
disponiacutevel no endereccedilo eletrocircnico httpwwwicmjeorg
Universidade Federal de Pernambuco ndash Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo Estrutura de
apresentaccedilatildeo de dissertaccedilatildeo e tese sob forma de artigos cientiacuteficos conforme proposta dos
Programas de Poacutes-Graduaccedilatildeo do Centro de Ciecircncias da Sauacutede (CCS) da Universidade Federal
de Pernambuco ndash Recife Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo 2004
Dedicatoacuteria
Ao meu pai Humberto Paulo Carneiro de Albuquerque (in memoriam) principal
responsaacutevel pela minha formaccedilatildeo pessoal e profissional Dele recebi a heranccedila da forccedila do
trabalho da perseveranccedila do desenvolvimento do senso criacutetico do questionamento e da
instigaccedilatildeo para a ciecircncia da vida
Agrave minha matildee Janyce Vidal Carneiro de Albuquerque que tanto se dedicou agrave
minha formaccedilatildeo pessoal e intelectual
Agrave minha esposa Maria Luacutecia companheira que sempre me apoiou valorizou o
meu esforccedilo e mais uma vez praticando todo seu amor e carinho foi capaz de suportar as
interminaacuteveis horas de privaccedilatildeo do conviacutevio familiar durante a construccedilatildeo deste trabalho
Agraves minhas filhas Clarissa e Paula Eduarda frutos de nosso amor e a continuaccedilatildeo
das nossas vidas
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
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4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
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ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
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51137ndash58
12 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
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14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
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15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
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biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Normatizaccedilatildeo Adotada
Esta Tese estaacute de acordo com
Referecircncias adaptado do International Committee of Medical Journals Editors (Vancouver)
disponiacutevel no endereccedilo eletrocircnico httpwwwicmjeorg
Universidade Federal de Pernambuco ndash Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo Estrutura de
apresentaccedilatildeo de dissertaccedilatildeo e tese sob forma de artigos cientiacuteficos conforme proposta dos
Programas de Poacutes-Graduaccedilatildeo do Centro de Ciecircncias da Sauacutede (CCS) da Universidade Federal
de Pernambuco ndash Recife Serviccedilo de Biblioteca e Documentaccedilatildeo 2004
Dedicatoacuteria
Ao meu pai Humberto Paulo Carneiro de Albuquerque (in memoriam) principal
responsaacutevel pela minha formaccedilatildeo pessoal e profissional Dele recebi a heranccedila da forccedila do
trabalho da perseveranccedila do desenvolvimento do senso criacutetico do questionamento e da
instigaccedilatildeo para a ciecircncia da vida
Agrave minha matildee Janyce Vidal Carneiro de Albuquerque que tanto se dedicou agrave
minha formaccedilatildeo pessoal e intelectual
Agrave minha esposa Maria Luacutecia companheira que sempre me apoiou valorizou o
meu esforccedilo e mais uma vez praticando todo seu amor e carinho foi capaz de suportar as
interminaacuteveis horas de privaccedilatildeo do conviacutevio familiar durante a construccedilatildeo deste trabalho
Agraves minhas filhas Clarissa e Paula Eduarda frutos de nosso amor e a continuaccedilatildeo
das nossas vidas
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 200218730-734
3 Lu L Currier BL Yaszemski MJ Synthetic bone substitutes Cur Op Orthop 200011383-90
4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
5 Zabeu JLA Mercadante MT Substitutos oacutesseos comparados ao enxerto oacutesseo autoacutelogo em cirurgia
ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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67
Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Dedicatoacuteria
Ao meu pai Humberto Paulo Carneiro de Albuquerque (in memoriam) principal
responsaacutevel pela minha formaccedilatildeo pessoal e profissional Dele recebi a heranccedila da forccedila do
trabalho da perseveranccedila do desenvolvimento do senso criacutetico do questionamento e da
instigaccedilatildeo para a ciecircncia da vida
Agrave minha matildee Janyce Vidal Carneiro de Albuquerque que tanto se dedicou agrave
minha formaccedilatildeo pessoal e intelectual
Agrave minha esposa Maria Luacutecia companheira que sempre me apoiou valorizou o
meu esforccedilo e mais uma vez praticando todo seu amor e carinho foi capaz de suportar as
interminaacuteveis horas de privaccedilatildeo do conviacutevio familiar durante a construccedilatildeo deste trabalho
Agraves minhas filhas Clarissa e Paula Eduarda frutos de nosso amor e a continuaccedilatildeo
das nossas vidas
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
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Produzido a Partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
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16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
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Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
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cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Artigo Original 3
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ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Agradecimentos
A DEUS agradeccedilo por todos os benefiacutecios que me tem concedido
Ao Professor Dr Joseacute Lamartine de Andrade Aguiar Orientador e Coordenador do Grupo
de Pesquisa com Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar pelo exemplo de uma vida dedicada agrave
Ciecircncia
Ao Professor Dr Carlos Teixeira Brandt Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em
Cirurgia que acolheu o presente projeto de pesquisa possibilitando o crescimento da
Ortopedia nessa Escola
Ao Professor Dr Saulo Monteiro dos Santos amigo e mestre pela orientaccedilatildeo apoio e
dedicaccedilatildeo para realizaccedilatildeo desta tese
Aos Professores de Patologia Dr Roberto Joseacute Vieira de Mello Dr Nicodemus Pontes
Filho e Dra Mariana Luacutecia Gomes Costa por toda a experiecircncia empregada em mais
um trabalho em prol da Ciecircncia Meacutedica
Agrave Maacutercia e Meacutercia pela dedicaccedilatildeo e formataccedilatildeo deste trabalho
Ao Professor da Universidade Federal de Sergipe Alessandro Henrique Santos pelas
anaacutelises estatiacutesticas
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 200218730-734
3 Lu L Currier BL Yaszemski MJ Synthetic bone substitutes Cur Op Orthop 200011383-90
4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
5 Zabeu JLA Mercadante MT Substitutos oacutesseos comparados ao enxerto oacutesseo autoacutelogo em cirurgia
ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
6 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
7 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
8 Potter H Foo L Magnetic Resonance Imaging of Articular Cartilage Trauma Degeneration and Repair
Am J Sports Med 2006 34661-77
9 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
10 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7
11 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
12 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
13 Brendamari R Romero A Soto O Varorna O May 2004 Applications of Engineering Mechanics in
Medicine GED ndash University of Puerto Rico Mayaguez Beedle MP Kennedy 14 JF Melo FAD
LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from sugarcane molasses by a Zooglea sp
Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a Partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
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9 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
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10 Steigman SA Fauza DO editors Autologous approaches to tissue engineering In StemBook [Internet]
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11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
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12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
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13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
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14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
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15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
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66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
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varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
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20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
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23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
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24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
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25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
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26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
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27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
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30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
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32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
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33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
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34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
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35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
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39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
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43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
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45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Sumaacuterio
1 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa 14
10 GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR 15
11 Consideraccedilotildees iniciais 15
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
13 Referecircncias
16
17
3 ARTIGO ORIGINAL 1 19
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
20
Resumo 21
Abstract 22
Introduccedilatildeo 23
Meacutetodos 24
Teacutecnica Ciruacutergica 24
Avaliaccedilatildeo Macroscoacutepica 26
Meacutetodos Estatiacutesticos 26
Resultados 27
Discussatildeo 33
Conclusatildeo 34
Referecircncias 34
4 ARTIGO ORIGINAL 2 37
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos Defeitos
Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel
de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
38
Resumo 39
Abstract 40
Introduccedilatildeo 41
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Meacutetodos
Teacutecnica ciruacutergica
42
42
Resultados 44
Discussatildeo 45
Conclusatildeo
Referecircncias
46
46
5 ARTIGO ORIGINAL 3 49
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accedilucar
50
Resumo 51
Abstract 52
Introduccedilatildeo 53
Meacutetodos 53
Teacutecnica Ciruacutergica 54
Anaacutelise Histoloacutegica 54
Anaacutelise Morfomeacutetrica 54
Anaacutelise Estatiacutestica 55
Resultados 55
Discussatildeo 61
Conclusatildeo 63
Referecircncias 63
ANEXOS 66
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos
produzidos avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
67
Anexo B
Ofiacutecio de Aprovaccedilatildeo da Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal ndash CEEA 68
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
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14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
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15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
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16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
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17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
Anexo C
Resumo Intitulado ldquoGel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar no Processo de
Reparaccedilatildeo dos Defeitos Osteocondrais em Joelho de Coelhosrdquo Acta Ciruacutergica
Brasileira Anais do Congresso Brasileiro de Cirurgiotildees ndash Rio de Janeiro 05-
090utubro2009
69
Anexo D
Certificados de Trabalhos Apresentados em Congressos 70
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 200218730-734
3 Lu L Currier BL Yaszemski MJ Synthetic bone substitutes Cur Op Orthop 200011383-90
4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
5 Zabeu JLA Mercadante MT Substitutos oacutesseos comparados ao enxerto oacutesseo autoacutelogo em cirurgia
ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
6 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
7 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
8 Potter H Foo L Magnetic Resonance Imaging of Articular Cartilage Trauma Degeneration and Repair
Am J Sports Med 2006 34661-77
9 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
10 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7
11 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
12 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
13 Brendamari R Romero A Soto O Varorna O May 2004 Applications of Engineering Mechanics in
Medicine GED ndash University of Puerto Rico Mayaguez Beedle MP Kennedy 14 JF Melo FAD
LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from sugarcane molasses by a Zooglea sp
Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a Partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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37 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
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Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
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40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
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COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
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trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
xi
Godoi ETAM
LISTA DE TABELAS Detecccedilatildeo precoce de aterosclerose por ultrassonografia Doppler em indiviacuteduos infectados
Lista de Siglas e Abreviaturas
BPCA Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
CEEA Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
GBPCA
BPSCG
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Biopolymer Sugar Cane Gel
NIH Instituto Nacional de Sauacutede
PCL Poli-3-Caprolactone
PDS Polidiaxonona
PGA Aacutecido Poliglicoacutelico
PHEMA Poli-2-Hidroximetil-Metacrilato
PLA Aacutecido Polilaacutetico
PLAG Aacutecido Polilaacutetico-co-Glicoacutelico
PMMA Polimetilmetacrilato
PHB
e-PTFE
PP
OTAS
ACI
MACI
JE
JD
HE
Polihidroxibutirato
Politetrafluoroetileno Expandido
Polipropileno
Transplante Osteocondral Outoacutelogo
Implantaccedilatildeo de Condroacutecitos Autoacutelogos
Implantaccedilatildeo de Matriz Autoacuteloga de Condroacutecitos
Joelho Esquerdo
Joelho Direito
Hidroxihapatita
UFPE
UFRPE
Universidade Federal de Pernambuco
Universidade Federal Rural de Pernambuco
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 200218730-734
3 Lu L Currier BL Yaszemski MJ Synthetic bone substitutes Cur Op Orthop 200011383-90
4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
5 Zabeu JLA Mercadante MT Substitutos oacutesseos comparados ao enxerto oacutesseo autoacutelogo em cirurgia
ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
6 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
7 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
8 Potter H Foo L Magnetic Resonance Imaging of Articular Cartilage Trauma Degeneration and Repair
Am J Sports Med 2006 34661-77
9 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
10 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7
11 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
12 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
13 Brendamari R Romero A Soto O Varorna O May 2004 Applications of Engineering Mechanics in
Medicine GED ndash University of Puerto Rico Mayaguez Beedle MP Kennedy 14 JF Melo FAD
LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from sugarcane molasses by a Zooglea sp
Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a Partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
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11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
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12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
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13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
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14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
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15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
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18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
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20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
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21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
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23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
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24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
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25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
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26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
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27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
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28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
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29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
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30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
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31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
xii
Albuquerque PCVC
Lista de Tabelas
ARTIGO 1
Tabela 1 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
27
Tabela 2 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
28
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais
sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
29
Tabela 4 Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os
animais sacrificados em todos os grupos
30
ARTIGO 2
Tabela 1
Tabela 2
Tabela 3
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos
cocircndilos medial e lateral no periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos
dois grupos
44
45
45
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
1 Jackson DW Simon TM Aberman HM Symptomatic articular cartilage degeneration the impact in the
new millennium Clin Orthop Relat Res 2001 (391 Suppl)S14-25
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 200218730-734
3 Lu L Currier BL Yaszemski MJ Synthetic bone substitutes Cur Op Orthop 200011383-90
4 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em condilo femural de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
5 Zabeu JLA Mercadante MT Substitutos oacutesseos comparados ao enxerto oacutesseo autoacutelogo em cirurgia
ortopeacutedica ndash Revisatildeo sistemaacutetica da literatura Rev Bras Ortop 2008 4359-68
6 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
7 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
8 Potter H Foo L Magnetic Resonance Imaging of Articular Cartilage Trauma Degeneration and Repair
Am J Sports Med 2006 34661-77
9 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
10 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7
11 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
12 Spector M Biomaterials-based tissue engineering and regenerative medicine solutions to musculoskeletal
problems Swiss Med Wkly 2006 136293-301
13 Brendamari R Romero A Soto O Varorna O May 2004 Applications of Engineering Mechanics in
Medicine GED ndash University of Puerto Rico Mayaguez Beedle MP Kennedy 14 JF Melo FAD
LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from sugarcane molasses by a Zooglea sp
Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
14 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a Partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
15 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp
em melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
16 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
16 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An
Fac Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
xiii
Albuquerque PCVC
ARTIGO 3
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos 55
grupos estudo e testes de comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
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20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
14
Albuquerque PCVC
Lista de Figuras
ARTIGO ORIGINAL 1
Estudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos
em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica Ciruacutergica Defeitos Osteocondrais Provocados nos
Cocircndilos Femorais dos Coelhos
25
Figura 2 Fotografias dos Cocircndilos Femorais Medial e Lateral dos Coelhos
nos Grupos Estudo e Controle nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
32
ARTIGO ORIGINAL 2
Estudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos Em Cocircndilos Femorais de Coelhos
Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1 Teacutecnica digital para mensuraccedilatildeo da aacuterea do tecido cicatricial
encontrado apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
43
Figura 2 Lupa Estereoscoacutepica Nikon SM2800reg 43
ARTIGO ORIGINAL 3
Estudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de
Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
Figura 1
Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo 90
dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
56
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
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20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
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23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
15
Albuquerque PCVC
Figura 2 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
90 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
57
Figura 3 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
58
Figura 4 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
120 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
59
Figura 5 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo estudo
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
60
Figura 6 Fotomicrografia das lacircminas obtidas dos animais do grupo controle
180 dias apoacutes a produccedilatildeo dos defeitos
61
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
16
Albuquerque PCVC
Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
17
Albuquerque PCVC
10 Gel do biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
11 Consideraccedilotildees Iniciais
Defeitos osteocondrais satildeo doenccedilas incapacitantes e afetam milhotildees de pessoas no
mundo Na verdade elas respondem pela metade de todas as enfermidades crocircnicas em
pessoas acima de 50 anos de idade nos paiacuteses desenvolvidos Em decorrecircncia do aumento da
populaccedilatildeo mundial da expectiva de vida e dos traumas no aparelho muacutesculo-esqueleacutetico eacute
previsto que a porcentagem das pessoas que iratildeo sofrer doenccedilas oacutesseas dobraraacute ateacute o ano de
2020 Trata-se de um grande problema na sauacutede puacuteblica mundial pois tais doenccedilas provocam
grande incapacidade em parte da populaccedilatildeo economicamente ativa(12)
O tecido oacutesseo eacute continuamente reparado e remodelado de acordo com a funccedilatildeo dos
osteoblastos e osteoclastos sendo capaz de se regenerar apoacutes sofrer danos Poreacutem quando
essas lesotildees causam grandes defeitos o osso eacute incapaz de reparaacute-los havendo formaccedilatildeo de
tecido fibroso e perda da sua funccedilatildeo mecacircnica(3)
Em algumas circunstacircncias quando o
processo de reparaccedilatildeo oacutessea natildeo eacute suficiente para recompor a perda o enxerto oacutesseo autoacutelogo
eacute a opccedilatildeo mais frequentemente empregada(3-6)
A cura de um defeito da cartilagem eacute um
problema mais complexo devido agrave sua baixa atividade mitoacutetica e ausecircncia de vasos(1-6)
No iniacutecio da deacutecada de 70 houve vaacuterias tentativas para reparaccedilatildeo de grandes defeitos
principalmente quando o tecido oacutesseo disponiacutevel era insuficiente Desenvolveram-se os
primeiros compostos sinteacuteticos substitutos do osso com a utilizaccedilatildeo do carbonato de caacutelcio e
hidroxiapatita(47)
A partir da deacutecada de 60 diversos poliacutemeros foram desenvolvidos com destaque para
o aacutecido poliglicoacutelico (PGA) aacutecido polilaacutectico (PLA) e poliparaioxanona (PDS) e passaram a
ser aplicados na fixaccedilatildeo de fraturas reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais meniscos discos
intervertebrais A seguir os biopoliacutemeros passaram a ser empregados por serem mais
compatiacuteveis com os tecidos vivos(7-13)
Recentemente foi desenvolvido um biopoliacutemero derivado da cana-de-accediluacutecar na
estaccedilatildeo experimental de Carpina Divisatildeo de Induacutestria da Universidade Federal de
Pernambuco Esse biopoliacutemero eacute um heteropolissacariacutedeo extracelular obtido atraveacutes da
siacutentese bacteriana da Zoogloea sp a partir do melaccedilo da cana-de-accediluacutecar que vem sendo
aplicado experimentalmente na confecccedilatildeo de implantes bioloacutegicos em vaacuterios tecidos do
corpo como via urinaacuteria membrana timpacircnica globo ocular aponeurose e dura-maacuteter(14-25)
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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17 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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18 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
18
Albuquerque PCVC
12 Apresentaccedilatildeo da Pesquisa
A nossa pesquisa foi desenvolvida em trecircs artigos originais
Artigo Original ndash 1
ldquoEstudo Comparativo Macroscoacutepico dos Defeitos Osteocondrais Produzidos em
Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico do aspecto macroscoacutepico da
superfiacutecie coloraccedilatildeo continuidade consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o Gel de Biopoliacutemero da Cana-
de-Accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o grupo controle
Artigo Original ndash 2
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise da Mensuraccedilatildeo da Aacuterea Cicatrizada dos
Defeitos Osteocondrais Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com
Gel de Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico utilizando o programa de computaccedilatildeo
graacutefica Image J 13 para Windows com fins de mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas da
cartilagem articular dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Artigo Original ndash 3
ldquoEstudo Comparativo da Anaacutelise Histoloacutegica dos Defeitos Osteocondrais
Produzidos em Cocircndilos Femorais de Coelhos Preenchidos com Gel de Biopoliacutemero da
Cana-de-Accediluacutecarrdquo
Consiste em um estudo experimental e analiacutetico da histologia do tecido osteocondral
apoacutes preenchimento com o GBPCA nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparados com o
grupo controle
Os procedimentos foram efetuados sob supervisatildeo veterinaacuteria e aprovados pela
Comissatildeo de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da
Universidade Federal de Pernambuco (CEEA-UFPE) e seguiu o coacutedigo de eacutetica de
experimentaccedilatildeo para animais do Conselho Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e
do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo em Animais
19
Albuquerque PCVC
REFEREcircNCIAS
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19 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
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23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
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Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
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Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
19
Albuquerque PCVC
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20 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubovaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
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Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
20
Albuquerque PCVC
22 Villar FO Utilizaccedilatildeo do biopolimero da cana-de-accediluacutecar na tuacutenica albunigea estudo experimental em catildees
In 30ordm Congresso Brasileiro de Urologia 2005 Brasiacutelia Annals International Brazilian Journal Urology
v30p 126-1262005
23 Silveira RK Eficaacutecia da membrana de celulose produzida pela Zoogloea SP na forma multiperfurada
comparada a forma compacta e a membrana sinteacutetica de politetrafluoretileno expandido na correccedilatildeo
cirurgia de falha muacutesculo-aponeuroacutetica aguda induzida em ratos Tese de Doutorado Departamento de
Cirurgia UFPE 2009
24 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
25 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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37 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
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Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
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40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
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COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
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trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
21
Albuquerque PCVC
Artigo Original 1
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
22
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO MACROSCOacutePICO DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM FEcircMURES
DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF MACROSCOPIC ANALYSIS OF THE OSTEOCONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
WITH BIOPOLYMER CANE-SUGAR GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
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ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
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INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
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MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
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Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
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Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
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RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
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Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
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Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
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Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
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Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
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DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
23
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e continuidade do tecido de
reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com
o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias e comparar com o grupo
controle sem o gel de bipoliacutemero Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho
locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32mm de diacircmetro por
4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em dois grupo ndash Estudo
joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar
Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e fotografia com cacircmara Nikon Coopix
5400reg acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon SM2800
reg para estudo da superfiacutecie coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo Resultados Foram analisados pelo teste do qui-quadrado
Natildeo houve diferenccedilas significativas na avaliaccedilatildeo dos paracircmetros estudados entre os grupos estudo e
controle Conclusatildeo O aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo consistecircncia
continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais preenchidos com o
gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo se mostrou semelhante ao tecido encontrado
no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo controle
Descritores ndash Trauma Articular CartilagemTerapia Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-
Accediluacutecar
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
24
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To study the healing surface color consistency and continuity of the repair tissue after
production of osteochondral defects in rabbit femoral condyles filled with gel biopolymer of cane
sugar in periods of 90 120 and 180 days compared with a control group without the gel biopolymer
Methods We studied 16 rabbits young adult New Zealand white 6 and 7 months old weighing
between 2 and 25 kg without changes in the locomotor system In all the animals a defect was made
32 mm in diameter and 4 mm deep in the femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups ndash Study right knee medial and lateral condyles implantation of
BPSCG Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash analyzed 90
120 and 180 days after surgery At these times after sacrifice the anatomical parts were resected and
placed in Bouins solution for macroscopic analysis The gross appearance of the defects was
evaluated using a Nikon CS 2800reg stereomicroscope and photographed with a Nikon Coopix 5400reg
camera according to the surface color consistency continuity and healing Results The results were
evaluated by the chi-square test There were no significant difference in macroscopic assessment of
wound healing between the study and control groups Conclusion With regard to the surface color
consistency continuity and healing of defects the macroscopic tissue repaired with BPSCG was
equivalent to that of the control group
Keywords ndash Articular Trauma Chondral Cartilage Biopolymer Sugar Cane Gel
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
25
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Os defeitos osteocondrais frequentemente evoluem para doenccedila articular degenerativa
caracterizada por dor rigidez e perda da mobilidade articular Essa enfermidade estaacute entre as
causas mais comuns de incapacidade entre a populaccedilatildeo de meia idade e idosos A cartilagem
articular por ser desprovida de vascularizaccedilatildeo e limitado potencial de cicatrizaccedilatildeo faz do seu
tratamento um verdadeiro desafio para os ortopedistas(1-4)
O processo de cicatrizaccedilatildeo da cartilagem natildeo obedece agrave fase natural de necrose
inflamaccedilatildeo e reparaccedilatildeo O tecido condral quando lesionado natildeo forma hematoma nem
coaacutegulo e natildeo produz fibrina que servem de arcabouccedilo ao novo tecido de reparaccedilatildeo A
ausecircncia da fase de vascularizaccedilatildeo limita o aporte de ceacutelulas para resposta inflamatoacuteria ao
trauma(13-8)
Considerando a reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais destacam-se como tratamentos o
desbridamento da cartilagem lesada as perfuraccedilotildees da placa oacutessea subcondral as
microfraturas o transplante de tecido condral ou osteocondral Utiliza-se como meacutetodo
bioloacutegico o implante de ceacutelulas cultivadas potencialmente condrogecircnicas ceacutelulas
mesenquimais e condroacutecitos autoacutelogos cultivados e transplante aloacutegeno osteocondral este
uacuteltimo retirado de cadaacutever(369-17)
teacutecnicas complexas e de alto custo dificuldades que levam
agrave procura de alternativas(13-17)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar (BPCA) tem sido empregado por um grupo de
pesquisa da Universidade Federal de Pernambuco em diversos sistemas corporais de modelos
animais com baixa toxicidade e excelente biocompatibilidade aleacutem do baixo custo de
produccedilatildeo caracteriacutesticas que indicam grande competitividade do produto em relaccedilatildeo aos
similares sinteacuteticos importados(17-23)
O objetivo desta pesquisa foi estudar a cicatrizaccedilatildeo superfiacutecie coloraccedilatildeo
continuidade e consistecircncia do tecido de reparaccedilatildeo apoacutes produccedilatildeo de defeitos osteocondrais
em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
(GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle sem o
GBPCA
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
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Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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50
Albuquerque PCVC
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34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
26
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior anaacutelise macroscoacutepica (Figura
1)
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
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67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
27
Albuquerque PCVC
Figura 1 ndash A) Incisatildeo operatoacuteria B) Luxaccedilatildeo da patela C D e E) Produccedilatildeo de defeitos com trefina F) Preenchimento
dos defeitos com GBPCA G e H) Aproximaccedilatildeo do tecido celular subcutacircneo sutura da pele e curativo
A B
C D
E F
G H
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
28
Albuquerque PCVC
Avaliaccedilatildeo macroscoacutepica
A inspeccedilatildeo macroscoacutepica proposta por Ribeiro et al(7)
foi o criteacuterio de avaliaccedilatildeo
empregado para o estudo comparativo dos defeitos osteocondrais produzidos nos joelhos dos
coelhos observando-se como paracircmetros a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito
Superfiacutecie da articulaccedilatildeo ndash classificada como plana desnivelada e irregular
Coloraccedilatildeo ndash classificada como transluacutecida quando existia a cor natural da
cartilagem opaca quando a cor era natural poreacutem sem brilho e descolorada
quando a cor natildeo era natural
Consistecircncia do reparo ndash classificada como firme ou amolecida
Continuidade ndash considerada nivelaccedilatildeo e integraccedilatildeo do reparo com a cartilagem
adjacente Classificada como menor de 50 nenhuma integraccedilatildeo entre 50 e 75
integraccedilatildeo parcial do defeito e acima de 75 integraccedilatildeo total do defeito com a
superfiacutecie da cartilagem
Cicatrizaccedilatildeo do defeito ndash diz respeito ao preenchimento de toda a lesatildeo por tecido
cicatricial podendo ser classificada em total quando o defeito estava
completamente cicatrizado e parcial divididos em quatro categorias maior ou
igual a 75 menor de 75 e maior ou igual a 50 menor de 50 e maior ou
igual a 25 menor de 25 ateacute 0
Para inspeccedilatildeo e classificaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais utilizou-se lupa
estereoscoacutepica Nikon SM2800reg acoplada agrave maacutequina fotograacutefica Nikon Coolpix 5400
reg
disponibilizada pelo Departamento de Morfologia do Laboratoacuterio Ageu Magalhatildees ndash Recife ndash
PE
Meacutetodos estatiacutesticos
Na anaacutelise estatiacutestica foram obtidas as frequecircncias absolutas e relativas das categorias
analisadas e empregado o teste do qui-quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade das
distribuiccedilotildees entre os dois grupos Os dados encontrados foram agrupados na planilha Excel e
analisados no programa estatiacutestico Graph Pad Prism na versatildeo 40 sendo considerado o niacutevel
de significacircncia de 5 plt005
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
29
Albuquerque PCVC
RESULTADOS
Os resultados das variaacuteveis dependentes encontradas nos diferentes grupos de animais
estatildeo nas tabelas 1 2 3 e 4
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 90 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificaccedilatildeo da homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos
estudo e controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=01767 p=02636 p=1000 p=02899
p=01342 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=03998 p=07881 p=1000 p=03012
p=1000 respectivamente (Tabela 1)
Tabela 1 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 90 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 678131922
Grupos
Estudo Controle
Paracircmetros Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 4 667 5 833 1 167 3 500
Desnivelada 2 333 1 167 4 666 2 333
Irregular 0 00 0 00 1 167 1 167
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 1 167 2 333 2 333
Opaca 2 333 1 167 2 333 1 167
Descolorada 4 667 4 666 2 333 3 500
Consistecircncia
Firme 6 1000 6 1000 6 1000 6 1000
Natildeo firme 0 00 0 00 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 333 3 500 1 167 2 333
Parcial (le50 ge75) 4 667 3 500 3 500 2 333
Total (lt75) 0 00 0 00 2 333 2 333
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 500 2 333 1 167 3 500
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 167 2 333 1 167 1 167
lt75 ge50 0 00 1 167 3 499 2 333
lt50 ge25 0 00 0 00 1 167 0 00
lt25 a 0 2 333 1 167 0 00 0 00
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
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Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
30
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 120 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo a avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves
variaacuteveis de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
produziu os seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=05238
p=01429 respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=1000 p=1000 p=04444
p=1000 respectivamente (Tabela 2)
Tabela 2 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 120 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 12345
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros lateral medial lateral Medial
n N n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 3 600 3 600 3 600
Desnivelada 2 400 2 400 2 400 2 400
Irregular 0 00 0 00 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 400 2 400 2 400 2 400
Opaca 0 00 0 00 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 3 600 3 600 3 600 3 600
Consistecircncia
Firme 5 1000 5 1000 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 0 0 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 3 600 0 00 1 200 2 400
Parcial (le50 ge75) 2 400 5 1000 4 800 3 600
Total (lt75) 0 00 0 00 0 00 0 00
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 1 200 1 200 2 400
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 0 00 2 400 2 400 1 200
lt75 ge50 0 00 1 200 2 400 1 200
lt50 ge25 0 00 1 200 0 00 1 200
lt25 a 0 2 400 0 00 0 00 0 00
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
31
Albuquerque PCVC
Para os coelhos sacrificados no periacuteodo de 180 dias a aplicaccedilatildeo do teste do qui-
quadrado para verificar a homogeneidade de distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e
controle segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis
de superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=1000 p=03678 p=1000 p=03678 p=1000
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=02635 p=04444 p=1000 p=02635 p=01667
respectivamente (Tabela 3)
Tabela 3 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito nos animais sacrificados 180 dias apoacutes a cirurgia
Coelhos 2326273032
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n n n
Superfiacutecie
Plana 3 600 2 400 4 800 4 800
Desnivelada 2 400 1 200 1 200 1 200
Irregular 0 00 2 400 0 00 0 00
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 0 00 0 00 1 200 0 00
Opaca 1 200 2 400 0 00 0 00
Descoloraccedilatildeo 4 800 3 600 4 800 5 1000
Consistecircncia
Firme 5 1000 4 800 5 1000 5 1000
Natildeo firme 0 00 1 200 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 2 400 2 400 4 800 4 800
Parcial (le50 ge75) 2 400 2 400 1 200 0 00
Total (lt75) 1 200 1 200 0 00 1 200
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 3 600 2 400 4 800 4 800
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 1 200 0 00 0 00 0 00
lt75 ge50 1 200 0 00 0 00 0 00
lt50 ge25 0 00 0 00 1 200 1 200
lt25 a 0 0 00 3 600 0 00 0 00
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
32
Albuquerque PCVC
Para todos os trecircs grupos analisados a aplicaccedilatildeo do teste do qui-quadrado para
verificar a homogeneidade da distribuiccedilatildeo das frequecircncias dos grupos estudo e controle
segundo avaliaccedilatildeo qualitativa dos cocircndilos lateral e medial com relaccedilatildeo agraves variaacuteveis de
superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito produziu os
seguintes resultados cocircndilo lateral ndash p=0722 p=0430 p=1000 p=1000 p=00518
respectivamente e cocircndilo medial ndash p=1000 p=0551 p=1000 p=0279 p=0190
respectivamente (Tabela 4)
Tabela 4 ndash Distribuiccedilatildeo da frequecircncia das variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade
cicatrizaccedilatildeo do defeito em todos os animais sacrificados em todos os grupos
Total de 16 amostras 90120180 dias
Grupos
Estudo Controle
Cocircndilos (joelho direito) Cocircndilos (joelho esquerdo)
Paracircmetros Lateral medial lateral Medial
n n N n
Superfiacutecie
Plana 10 625 10 625 8 500 10 625
Desnivelada 6 375 4 250 7 438 5 313
Irregular 0 00 2 125 1 62 1 62
Coloraccedilatildeo
Transluacutecida 2 125 3 188 5 313 4 250
Opaca 3 188 3 188 2 125 1 62
Descoloraccedilatildeo 11 688 10 624 9 563 11 688
Consistecircncia
Firme 16 1000 15 938 16 1000 16 100
Natildeo firme 0 00 1 62 0 00 0 00
Continuidade
Nenhuma (lt50) 7 438 5 313 6 375 8 500
Parcial (le50 ge75) 8 500 10 623 8 500 5 313
Total (lt75) 1 62 1 62 2 125 3 188
Cicatrizaccedilatildeo do defeito
Total 9 563 5 313 6 375 9 563
Parcial 0 00 0 00 0 00 0 00
lt100 ge75 2 125 4 250 3 188 2 125
lt75 ge50 1 62 2 125 5 313 3 188
lt50 ge25 0 00 1 63 2 125 2 125
lt25 a 0 4 250 4 250 0 00 0 00
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
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37 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
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38 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
39 Lima SVC Aguiar JLA Castro CMMB Vilar FO Carvalho B Souza Jr E et al Reepithelialized bowel
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40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
33
Albuquerque PCVC
O resultado do teste estatiacutestico empregado para verificar a diferenccedila entre as
frequumlecircncias encontradas nos diferentes grupos natildeo rejeitou a hipoacutetese de nulidade entre as
variaacuteveis
Joelhos direito (Grupo Estudo) e joelho esquerdo (Grupo Controle) em um coelho de
cada periacuteodo (figura 2)
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
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37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
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47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
34
Albuquerque PCVC
Figura 2 ndash Fotografia dos joelhos direito grupo estudo (ACE) e esquerdo grupo controle (BD e F)A e
B) apoacutes 90 dias C e D) apoacutes 120 dias E e F) apoacutes 180 dias de cirurgia
A B
C D
E F
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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10 abril 2003 INPE p 313-5
30 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
31 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
produzido a partir de cana de accediluacutecar para cicatrizaccedilatildeo cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
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37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
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38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
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39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
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40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
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41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
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46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
35
Albuquerque PCVC
DISCUSSAtildeO
No modelo empregado o coelho foi escolhido como animal de experimentaccedilatildeo por ser
a espeacutecie mais comumente utilizada para reparaccedilatildeo dos defeitos osteocondrais(17)
A utilizaccedilatildeo de trefina para produccedilatildeo dos defeitos foi escolhida por natildeo provocar
lesotildees nos condroacutecitos frequentemente observadas com o uso de brocas de perfuraccedilatildeo(13-17)
Quanto agrave dimensatildeo do defeito produzido optamos pelo diacircmetro 32 x 40mm em animais de
2 a 3 kg por ser compatiacutevel com o tamanho dos joelhos dos coelhos(13-17)
Entre as teacutecnicas ciruacutergicas ateacute entatildeo empregadas na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais ainda natildeo foi encontrada uma comprovadamente eficiente(6131624-26)
Isto se
deve principalmente agraves dificuldades encontradas para substituiccedilatildeo da cartilagem hialina que
ainda natildeo eacute reproduzida artificialmente
As teacutecnicas de estimulaccedilatildeo do tecido osteocondral tais como perfuraccedilotildees abrasotildees
desbridamentos e micro-fraturas promovem uma proliferaccedilatildeo excessiva de fibroblastos que
resulta na formaccedilatildeo de um tecido denominado de fibrocartilagem com menor resistecircncia que
a cartilagem hialina original(10-15)
O transplante de tecidos para a cobertura de defeitos osteocondrais como perioacutesteo e
pericocircndrio ricos em ceacutelulas mesenquimais tambeacutem natildeo induz a diferenciaccedilatildeo dessas ceacutelulas
em condroacutecitos(17162426)
O transplante de ceacutelulas cartilaginosas e mesenquimais nos
diferentes estaacutegios de diferenciaccedilatildeo foi estudado em vaacuterios modelos poreacutem na anaacutelise
histoloacutegica natildeo foi constatada a presenccedila de cartilagem hialina Embora os resultados iniciais
tenham sido animadores outros estudos satildeo necessaacuterios para confirmaccedilatildeo da presenccedila ou natildeo
da cartilagem(179121624-33)
As teacutecnicas de transplante osteocondral realizadas atraveacutes da retirada de blocos
osteocondrais de aacutereas doadoras autoacuteloga ou heteroacuteloga natildeo regeneram a cartilagem(12162427-
33) e satildeo utilizadas principalmente em lesotildees traumaacuteticas com resultados satisfatoacuterios
(28-33)
Jaacute foi descrita a utilizaccedilatildeo de materiais artificiais para preenchimento dos defeitos
osteocondrais como o aacutecido poliglicoacutelico cola de fibrina gel de colaacutegeno e blocos de
carbono entretanto constatou-se grande reaccedilatildeo inflamatoacuteria O uso desse tipo de material
quando associado ao cultivo de ceacutelulas mesenquimais para aumentar o seu potencial de
crescimento parece ser o futuro de novos avanccedilos(178122432-35)
O Biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar jaacute foi utilizado experimentalmente como substituto de outros tecidos como dispositivo
de suporte para incontinecircncia urinaacuteria(36)
substituto de proacuteteses vasculares(2337)
coadjuvante
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
36
Albuquerque PCVC
na cicatrizaccedilatildeo das feridas(20)
substituto de membrana timpacircnica(22)
na reparaccedilatildeo da dura-
maacuteter(38)
e no tecido vesical(39)
Com base nos resultados desses estudos aplicou-se o BPCA
na forma de gel no preenchimento de defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos
O teste do qui-quadrado foi utilizado por se tratar de varaacuteveis qualitativas para
comparaccedilatildeo entre os grupos(40)
Constatou-se que os resultados da pesquisa quando
comparados os grupos estudo e controle apresentaram uma distribuiccedilatildeo homogecircnea entre as
variaacuteveis superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia e cicatrizaccedilatildeo do defeito natildeo rejeitando-se a
hipoacutetese inicial de nulidade O mesmo foi observado por Ribeiro et al(7)
que empregaram o
mesmo modelo experimental reparando os defeitos produzidos com enxertos retirados do
outro joelho e tambeacutem natildeo observaram diferenccedilas na qualidade macroscoacutepica entre os
grupos
Apesar dos resultados quanto ao uso do GBPCA para o preenchimento dos defeitos
osteocondrais natildeo demonstrarem diferenccedilas significativas entre as variaacuteveis estudadas
observou-se uma maior distribuiccedilatildeo da frequecircncia da superfiacutecie plana nos animais do grupo
estudo que segundo Amiel et al(1)
eacute uma caracteriacutestica importante para que o reparo
osteocondral seja considerado biologicamente aceitaacutevel
Tal fato natildeo ficou totalmente
comprovado em decorrecircncia do baixo nuacutemero de coelhos estudados
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que o aspecto macroscoacutepico da superfiacutecie articular coloraccedilatildeo
consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do tecido encontrado sobre os defeitos osteocondrais
preenchidos com o gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar no grupo estudo mostrou-se
semelhante ao tecido encontrado no processo de reparaccedilatildeo natural ocorrido no grupo
controle
REFEREcircNCIAS
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39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
37
Albuquerque PCVC
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segment for bladder augmentation a pilot study in an animal model In XXVIII Congresso de la
Confederacion Americana de Urologia - CAU 2006 2006 Recife Inter Braz J Urol 200632(suppl1)89
40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
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Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
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Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
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Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
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Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
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alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
38
Albuquerque PCVC
27 Horas U Pelinkovic D Herr G Aignet T Schnettler R Autologous chondrocyte implantation and
osteochondral cylinder transplantation in cartilage repair of the knee joint A prospective comparative trial
J Bone Joint Surg Am 2003 85-A(2)185-192
28 Dozin B Malpeli M Cancedda R et al Comparative evaluation of autologous chondrocyte implantation
and mosaicplasty A multicentered randomized clinical trial Clin J Sport Med 200515(4)220-6
29 Goomer RS Amiel D Repair of articular cartilage defects by ex-vivo gene therapy Curr Opin Orthop
200011(5)378-82
30 Cain EL Clancy WG Treatment algorithm for osteochondral injuries of the knee Clin Sports Med
200120(2)321-42
31 Lieberman JR Daluiski A Einhorn TA The role of growth factors in the repair of bone Biology and
clinical applications J Bone Joint Surg Am 2002 84-A(6)1032ndash44
32 Melo F Contribuiccedilatildeo ao estudo cineacutetico da produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares por Zoogloea sp em
melaccedilo de cana-de-accediluacutecar [Mestrado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2003
33 Hayashi K Kubo T Doi K Tabata Y Akagawa Y Development of new drug delivery system for implant
bone augmentation using a basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex Dent Mater J
2007(2692)170-7
34 Iamaguti LS Brandatildeo CVS Minto BW Mamprim MJ Ranzani JJT Gomes DC Utilizaccedilatildeo de membrana
biossinteacutetica de celulose na trocleoplastia experimental em catildees Avaliaccedilatildeo cliacutenica radiograacutefica e
macroscoacutepica Vet Zootec 200815(1)160-8
35 Akagawa Y Kubo T Koretake K Hayashi K Doi K Matsura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 200953(1)41ndash7
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
37 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
38 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
39 Lima SVC Aguiar JLA Castro CMMB Vilar FO Carvalho B Souza Jr E et al Reepithelialized bowel
segment for bladder augmentation a pilot study in an animal model In XXVIII Congresso de la
Confederacion Americana de Urologia - CAU 2006 2006 Recife Inter Braz J Urol 200632(suppl1)89
40 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
1 Inouye CM Fagundes DJ Faloppa F Novo NF Juliano Y Figueiredo AS et al Estudo morfoloacutegico da
articulaccedilatildeo do joelho de coelhos apoacutes a reparaccedilatildeo de um defeito osteocondral Acta Cir Bras 2002
17403-9
2 Hjelle K Solheim E Strand T Muri R Brittberg M Articular cartilage defects in 1000 knee arthroscopies
Arthroscopy 2002 18730-4
49
Albuquerque PCVC
3 Kim TK Sharma B Williams CG Ruffner MA Malik A Mcfarland EG Elisseeff JH Experimental model
for cartilage tissue engineering to regenerate the zonal organization of articular cartilage Osteoarthritis
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
39
Albuquerque PCVC
Artigo Original 2
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
40
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE DA MENSURACcedilAtildeO
DA AacuteREA CICATRIZADA DOS DEFEITOS
OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM COcircNDILOS
FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM GEL DE
BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF ANALYSIS OF MEASUREMENT OF THE AREA HEALED OF
THE OSTEOCHONDRAL DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED
BIOPOLYMER OF SUGAR-CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm Cidade Universitaacuteria ndash CEP 50670-420
Recife-PE Tel (81) 2126-8518 e-mailpaulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
41
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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50
Albuquerque PCVC
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34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
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Albuquerque PCVC
Anexo B
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Albuquerque PCVC
Anexo C
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Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
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Albuquerque PCVC
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Albuquerque PCVC
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivo Estudar a mensuraccedilatildeo da aacuterea dos defeitos osteocondrais cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com gel de
biopoliacutemero da cana-de-accedilucar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16
coelhos brancos da linhagem Nova Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e
25 kg sem alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um
defeito de 32mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram
divididos em dois grupo ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel
de biopoliacutemero de cana-de-accedilucar Controle joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral submetidos agrave
cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio
procedeu-se a ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e
fotografia com cacircmara Nikon Coopix 5400reg Nos defeitos produzidos foi identificada e mensurada a
aacuterea cicatrizada nos dois cocircndilos femorais nos grupos estudo e controle atraveacutes do programa Image-
Jreg versatildeo 13 para Windows Resultados Os dados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica aplicando-
se o teste natildeo parameacutetrico Mann-Whitney Natildeo foram verificadas diferenccedilas significantes entre as
meacutedias nos grupos estudo e controle Conclusatildeo As dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos do
grupo estudo foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
Descritores Cartilagem Defeito Osteocondral Biopoliacutemero da Cana-de-Accediluacutecar
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
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Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
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Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
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Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
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Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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50
Albuquerque PCVC
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29 Andrade RR Kirchner FF Mensuraccedilotildees com cacircmeras digitais Anais XI SBSR Belo Horizonte Brasil 05 -
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produzido a partir de cana de accediluacutecar para cicatrizaccedilatildeo cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
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33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
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angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
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32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
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Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
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RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
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Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
42
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective The purpose of the study was to measure in comparson with the control group the size of
healed osteocartilaginous tissue after filling the osteochondral defects in the knees of the rabbits with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) at 90120 and 180 days Methods Sixteen (16) young adult New
Zealand rabbits 6 and 7 months old weighing between 2 and 25 kg without changes in the
locomotor system were studied In all the animals a defect 32 mm in diameter and 4 mm in depth was
made in the femoral condyle of the right and left knees The animals were divided into two groups - the
treated right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG and untreated left knee
medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash with follow-up at 90 120 and 180 days At
these times after sacrifice the anatomical specimens were resected and placed in Bouins solution for
digital photographic documentation using a Nikon Coopixreg 5400 camera In the lesions produced the
lesion that was completely or partially healed was identified The area of defects that was considered
healed was measured in both knees in the two groups using the Image-Jreg program version 13 for
Windows Results The results were submitted to the nonparametric Mann Whitney test There were no
significant differences between the means of the groups treated with BPSCG and the control group
Conclusion The dimensions of the scarred areas of the defects of the study group were similar to
those in the control group healed naturally
Keywords Cartilage Osteochondral Biopolymer Sugar Cane Gel
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
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47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
43
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
O emprego de diferentes poliacutemeros para o preenchimento de defeitos osteocondrais na
ortopedia tem histoacuterico recente Esta nova aacuterea da pesquisa de biomateriais tem por finalidade
o desenvolvimento de implantes dotados de propriedades biocompatiacuteveis com o tecido
oacutesseo(1-7)
A reparaccedilatildeo do tecido oacutesseo eacute complexa e ainda natildeo foi totalmente elucidada(8-11)
Independentemente da causa a cicatrizaccedilatildeo desses defeitos segue uma sequecircncia de eventos
que pode ser dividida em trecircs fases de acordo com as mudanccedilas morfoloacutegicas fase
inflamatoacuteria fase de reparaccedilatildeo e fase de remodelaccedilatildeo(8-16)
Na fase inflamatoacuteria haacute formaccedilatildeo e
reorganizaccedilatildeo do hematoma liberaccedilatildeo de fatores de crescimento plaquetaacuterio e ceacutelulas
progenitoras provenientes do proacuteprio tecido oacutesseo e sangue perifeacuterico Essas ceacutelulas na fase
de reparaccedilatildeo vatildeo formar o tecido oacutesseo primaacuterio por um processo semelhante agrave ossificaccedilatildeo
endocondral ou intramembranosa(14 15)
Posteriormente esse tecido imaturo sofre remodelaccedilatildeo
auxiliada pelos osteoclastos ateacute formar o osso maduro ou lamelar Esta fase pode durar meses
ou anos ateacute que o osso neoformado atraveacutes de forccedilas mecacircnicas adquira as caracteriacutesticas
estruturais e fisioloacutegicas anteriores ao defeito(81316)
A cicatrizaccedilatildeo osteocondral guiada por biopoliacutemeros promove proteccedilatildeo contra a
invasatildeo de tecidos natildeo osteogecircnicos competidores Eacute com essa finalidade que os defeitos satildeo
preenchidos por matrizes orgacircnicas ou inorgacircnicas que seratildeo lentamente reabsorvidas e
substituiacutedas por tecido neoformado(891317-20)
O objetivo do estudo foi mensurar as aacutereas dos defeitos cicatrizados produzidos em
cocircndilos femorais de coelhos apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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31 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
produzido a partir de cana de accediluacutecar para cicatrizaccedilatildeo cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
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46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
44
Albuquerque PCVC
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) A seguir procedeu-se agrave
ressecccedilatildeo das peccedilas anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior
documentaccedilatildeo fotograacutefica
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
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34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
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32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
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37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
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46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
45
Albuquerque PCVC
Foi utilizado o programa de computaccedilatildeo graacutefica Imaje-Jreg versatildeo 13 para Windows
para mensurar a aacuterea cicatrizada sendo as imagens fotografadas com maacutequina digital Nikon
Coolpixreg 5400 acoplada agrave lupa estereoscoacutepica Nikon
reg SM2800 (Figura 1 e 2)
Figura 1 ndash A B) Mensuraccedilatildeo da aacuterea pelo Programa Image J em documentaccedilatildeo fotograacutefica dos cocircndilos
femorais C)Lupa Nikon SM 2800
Figura 2 ndash Lupa estereoscoacutepica Nikonreg SM2800
A B
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
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34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
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trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
46
Albuquerque PCVC
Para calibraccedilatildeo dos dados da computaccedilatildeo graacutefica foi usado o programa Image-Jreg
versatildeo 13 para Windows adotando-se como paracircmetro a distacircncia intercondilar mensurada
em centiacutemetros O tamanho da aacuterea cicatrizada foi mensurado e comparado com o grupo
controle Considerou-se o defeito totalmente reparado quando as caracteriacutesticas
macroscoacutepicas eram uniformes
A anaacutelise estatiacutestica dos resultados constitui na utilizaccedilatildeo do teste natildeo parameacutetrico de
Mann-Whitney Foi aceito o niacutevel de significacircncia p lt 005 para rejeiccedilatildeo da hipoacutetese de
nulidade
RESULTADOS
A mensuraccedilatildeo em centiacutemetros quando comparada agraves aacutereas cicatrizadas dos cocircndilos
femorais tanto no grupo estudo quanto no grupo controle natildeo mostrou diferenccedilas
significativas (Tabelas 123)
Tabela 1 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 90 dias nos 06 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
90
6 00820 00290 00800 00480
7 00560 00600 00630 00630
8 00560 00410 00590 00390
13 00710 00790 00500 00800
19 00140 00580 00460 00160
22 00670 00670 00560 00820
Meacutedia 005767 00557 005900 00547
Desvio padratildeo 00235 00180 00120 00255
p ndash valor medial 0699
p ndash valor lateral 0937
Mann-Whitney
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
1 Inouye CM Fagundes DJ Faloppa F Novo NF Juliano Y Figueiredo AS et al Estudo morfoloacutegico da
articulaccedilatildeo do joelho de coelhos apoacutes a reparaccedilatildeo de um defeito osteocondral Acta Cir Bras 2002
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49
Albuquerque PCVC
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7 Kreuz PC Muumlller S Ossendorf C Kaps C Erggelet C Treatment of focal degenerative cartilage defects
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24 Kawamura S Wakitani S Kimura T Maeda A Caplan AI Shino K and Ochi T Articular cartilage
repair Rabbit experiments with a collagen gel-biomatrix and chondrocytes cultured in it Acta Orthop
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50
Albuquerque PCVC
25 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando poli
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26 Erggelet C Sittinger M Lahm A The arthroscopic implantation of autologous chondrocytes for the
treatment of full-thickness cartilage defects of the knee joint Arthroscopy 2003 19108minus10
27 Lind M Larsen A Clausen C Osther K Everland H Cartilage repair with chondrocytes in fibrin hydrogel
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28 Pereira AC Amadei SU Silveira VA Balducci I Faig-Leite H Estudo comparativo da porcentagem das
aacutereas cortical trabecular e do canal medular do fecircmur de ratos hipertensos(SRH) e normotensos Ciecircncia
Odontol Bras 2007 10 64-9
29 Andrade RR Kirchner FF Mensuraccedilotildees com cacircmeras digitais Anais XI SBSR Belo Horizonte Brasil 05 -
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30 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
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31 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
produzido a partir de cana de accediluacutecar para cicatrizaccedilatildeo cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
47
Albuquerque PCVC
Tabela 2 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 120 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
120
1 00790 00790 00790 00790
2 00800 00790 00790 00810
3 00360 00490 00800 00800
4 00800 00620 00450 00350
5 00490 00510 00250 00390
Meacutedia 00648 00640 00616 00628
Desvio padratildeo 00209 00146 00253 00236
pndash valor medial 0690
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
Tabela 3 ndash Mensuraccedilatildeo das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais nos cocircndilos medial e lateral no
periacuteodo de 180 dias nos 05 coelhos dos dois grupos
Aacutereas cicatrizadas
Grupo Estudo Grupo Controle
Periacuteodo Animal Medial Lateral Medial Lateral
180
30 00580 00670 00680 00640
32 00720 00520 00450 00560
27 00620 00650 00800 00530
26 00570 00380 00740 00700
23 00560 00740 00670 00480
Meacutedia 00610 00592 00668 00582
Desvio padratildeo 00065 00143 00132 00088
p ndash valor medial 0310
p ndash valor lateral 0841
Mann-Whitney
DISCUSSAtildeO
Os biomateriais tecircm sua aplicaccedilatildeo na ortopedia haacute mais de 60 anos e foram
classificados em trecircs distintas geraccedilotildees a primeira materiais bioinertes a segunda materiais
bioativos e biodegradaacuteveis e a terceira estimuladores especiacuteficos da resposta celular(61617)
Os materiais de segunda geraccedilatildeo como os poliacutemeros PLA e PGA foram utilizados
in vivo para reparaccedilatildeo de defeitos osteocondrais como suportes de sustentaccedilatildeo de ceacutelulas
matrizes e mostraram aumento da velocidade de preenchimento dos defeitos com tecido de
melhor qualidade(721-232527)
Na presente pesquisa o GBPCA foi utilizado na reparaccedilatildeo dos defeitos
osteocondrais com a finalidade de preenchimento e fornecimento de substrato para a
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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Albuquerque PCVC
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50
Albuquerque PCVC
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28 Pereira AC Amadei SU Silveira VA Balducci I Faig-Leite H Estudo comparativo da porcentagem das
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29 Andrade RR Kirchner FF Mensuraccedilotildees com cacircmeras digitais Anais XI SBSR Belo Horizonte Brasil 05 -
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32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
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32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
48
Albuquerque PCVC
cicatrizaccedilatildeo superficial da cartilagem articular Observou-se a aacuterea de crescimento de tecido
neoformado sobre o GBPCA com dimensotildees semelhantes em ambos os grupos estudo e
controle
A mensuraccedilatildeo de pequenas aacutereas de tecidos utilizando estereomicroscoacutepio
fotografias e o programa Image Jreg
foi realizada por Pereira et al(28)
em estudos com fecircmures
de ratos demonstrando resultados em variaacuteveis quantitativas comparando objetivamente os
dois grupos estudados o que motivou o emprego deste meacutetodo em nossa pesquisa pelo fato
de possibilitar comparaccedilatildeo objetiva entre as aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
O emprego de meacutetodos fotogrameacutetricos com uso de cacircmeras digitais na mensuraccedilatildeo
de aacutereas foi utilizado por outros autores(29)
Os resultados encontrados utilizando o GBPCA no preenchimento dos defeitos
osteocondrais demonstraram que o tamanho da aacuterea cicatrizada eacute semelhante nos dois grupos
o que tambeacutem foi comprovado nas caracteriacutesticas macroscoacutepicas qualitativas observadas por
Ribeiro et al(8)
quando utilizaram enxertos osteocondrais para reparaccedilatildeo de defeitos
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos
O GBPCA utilizado foi de baixa densidade fato esse que provavelmente permitiu a
sua natildeo incorporaccedilatildeo total dentro dos defeitos osteocondrais Essa linha de pensamento deve-
se aos resultados obtidos noutros trabalhos em que este material foi utilizado na forma densa
para reparaccedilatildeo de defeitos em vasos arteriais membranas bexiga urinaacuteria e dura maacuteter(30-33)
Na anaacutelise estatiacutestica dos resultados utilizou-se o teste estatiacutestico Mann-Whitney por
ser adequado para o tamanho de nossa amostra e a distribuiccedilatildeo dos dados obtidos
CONCLUSAtildeO
Pode-se concluir que as dimensotildees das aacutereas cicatrizadas dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero da cana-de-
accediluacutecar foram semelhantes as do grupo controle cicatrizadas naturalmente
REFEREcircNCIAS
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51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
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13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
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15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
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66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
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Albuquerque PCVC
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37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
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46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
49
Albuquerque PCVC
3 Kim TK Sharma B Williams CG Ruffner MA Malik A Mcfarland EG Elisseeff JH Experimental model
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Albuquerque PCVC
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33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
50
Albuquerque PCVC
25 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando poli
(aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femural de coelhos Poliacutemeros
200414176-80
26 Erggelet C Sittinger M Lahm A The arthroscopic implantation of autologous chondrocytes for the
treatment of full-thickness cartilage defects of the knee joint Arthroscopy 2003 19108minus10
27 Lind M Larsen A Clausen C Osther K Everland H Cartilage repair with chondrocytes in fibrin hydrogel
and MPEG polylactide scaffold an in vivo study in goats Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc 2008
16690-4
28 Pereira AC Amadei SU Silveira VA Balducci I Faig-Leite H Estudo comparativo da porcentagem das
aacutereas cortical trabecular e do canal medular do fecircmur de ratos hipertensos(SRH) e normotensos Ciecircncia
Odontol Bras 2007 10 64-9
29 Andrade RR Kirchner FF Mensuraccedilotildees com cacircmeras digitais Anais XI SBSR Belo Horizonte Brasil 05 -
10 abril 2003 INPE p 313-5
30 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-83
31 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
produzido a partir de cana de accediluacutecar para cicatrizaccedilatildeo cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 171-7
32 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar
An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
33 Lima F Lima J Hirakawa P Medeiros Juacutenior D Lima F Aguiar J Resposta inflamatoacuteria a membranas de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e telas de polipropileno re-implantadas no peritocircneo parietal de ratos An Fac
Med Univ Fed Pernamb 2005 5037-40
34 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
35 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 2277-81
36 Lucena RG Utilizaccedilatildeo do biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como novo material para sling pubo vaginal
anaacutelise estereoloacutegica [Tese Doutorado] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2007
32 Marques S Um novo substituto vascular estudo experimental com biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar [Concurso para
Professor Titular] Recife Universidade Federal de Pernambuco 2006
33 Lima FMT Membrana de biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar como substituto de dura-maacuteter em ratos Wistar
Tese Doutorado Recife Universidade Federal de Pernambuco 2008
34 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
51
Albuquerque PCVC
Artigo Original 3
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
52
Albuquerque PCVC
ESTUDO COMPARATIVO DA ANAacuteLISE HISTOLOacuteGICA DOS
DEFEITOS OSTEOCONDRAIS PRODUZIDOS EM
COcircNDILOS FEMORAIS DE COELHOS PREENCHIDOS COM
GEL DE BIOPOLIacuteMERO DA CANA-DE-ACcedilUacuteCAR
COMPARATIVE STUDY OF HISTOLOGICAL ANALYSIS OF THE OSTEOCHONDRAL
DEFECTS PRODUCED IN FEMORAL CONDYLES FILLED BIOPOLYMER OF SUGAR -
CANE GEL IN RABBITS
Paulo Cezar Vidal Carneiro de Albuquerque1 Saulo Monteiro dos Santos
1 Joseacute
Lamartine de Andrade Aguiar1 Nicodemus Pontes Filho
2 Joseacute Roberto Vieira de Mello
2
Mariana Luacutecia Correia Ramos Costa2 Clarissa Miranda Carneiro de Albuquerque
Olbertz3 Tarciana Mendonccedila de S Almeida
3 Alessandro Henrique da Silva Santos
4
Joacil Carlos da Silva5
1 - Professor do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal de Pernambuco
2 - Professor do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Pernambuco
3 - Estudante de Medicina da Universidade Federal de Pernambuco
4 - Professor do Departamento de Estatiacutestica e Ciecircncias Atuariais da Universidade Federal de
Sergipe
5 - Meacutedico Neurocirurgiatildeo do Hospital das Cliacutenicas da Universidade Federal de Pernambuco
Trabalho realizado no Nuacutecleo de Cirurgia Experimental do Departamento de Cirurgia da
Universidade Federal de Pernambuco
Correspondecircncia Av Prof Moraes Recircgo snordm ndash Cidade Universitaacuteria CEP 50670-420 -
Recife-PE - Tel (81) 2126-8518 e-mail paulovidal_hotmailcom
Potencial Conflito de Interesses
Declaramos inexistecircncia de conflito de interesses neste artigo
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Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
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Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
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Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
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Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
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Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
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Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
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linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
53
Albuquerque PCVC
RESUMO
Objetivos Estudar a resposta histoloacutegica dos defeitos osteocondrais produzidos em cocircndilos femorais
de coelhos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias apoacutes preenchimento com o gel de biopoliacutemero da
cana-de-accediluacutecar comparando com o grupo controle Meacutetodos Foram estudados 16 coelhos brancos da
linhagem Nova Zelacircndia adutos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem
alteraccedilotildees no aparelho locomotor Apoacutes anestesia geral foi produzido com trefina um defeito de 32
mm de diacircmetro por 4mm de profundidade em cada cocircndilo femoral Os animais foram divididos em
dois grupos ndash Estudo joelho direito cocircndilos medial e lateral preenchimento com gel Controle
joelho esquerdo os cocircndilos medial e lateral submetidos agrave cicatrizaccedilatildeo natural e analisados nos
periacuteodos de 90 120 e 180 dias da cirurgia Apoacutes o sacrifiacutecio procedeu-se agrave ressecccedilatildeo das peccedilas
anatocircmicas seguindo-se a imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin e de cortes histoloacutegicos corados com
hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e a anaacutelise com microscoacutepio oacuteptico 100x e 400x
Resultados Em todos os periacuteodos do grupo estudo foi encontrada uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria
granulomatosa mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo controle houve uma cicatrizaccedilatildeo
precoce produzida por fibroblastos A anaacutelise morfomeacutetrica para a contagem das ceacutelulas gigantes
aplicando-se o teste de Kruskal-Wallis para a comparaccedilatildeo das meacutedias obtidas natildeo demonstrou
resultados estatisticamente significantes Conclusatildeo O gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
utilizado para preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no grupo
controle foi encontrada uma reaccedilatildeo cicatricial mediada por fibroblastos
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
54
Albuquerque PCVC
ABSTRACT
Objective To assess the histological response of the osteochondral tissue compared with a control
group at 90 120 and 180 days after repair of wounds produced in the knees of rabbits filled with
biopolymer sugar cane gel (BPSCG) Methods We studied 16 New Zeland rabbits young adults
healthy between and 7 months old weighing between 2 and 25 kg In all the animals a lesion 32 mm
in diameter and 4 mm was induced in each femoral condyle of the right and left knees The animals
were divided into two groups Study right knee medial and lateral condyles implantation of BPSCG
Control left knee medial and lateral condyles submitted to natural healing ndash and analyzed 90 120
and 180 days after surgery On these times after sacrifice the anatomical specimens were resected
placed in Bouins solution stained with hematoxylin-eosin and Masson trichrome and analysed in
optical microscope with a magnification of 100x to 400x Results The overall result shows an
inflammatory reaction of phagocytosis mediated by giant cells in both groups The morphometric
analysis was used for counting the number of the giant cells in the different groups The Kruskal-
Wallis test was used to compare the means of all groups treated with no statistically differences in the
control groups and healing mediated by collagen and fibroblasts was observed Conclusion
Biopolymer gel of cane sugar used to fill osteochondral defects produced in the femoral condyles of
rabbits caused an inflammatory reaction mediated by giant cells whereas in the control group found
a healing reaction mediated by fibroblasts
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
55
Albuquerque PCVC
INTRODUCcedilAtildeO
Dentre os diversos biomateriais uma grande importacircncia tem sido dada aos
biopoliacutemeros que de acordo com a Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila satildeo considerados
materiais polimeacutericos classificados estruturalmente como polissacariacutedeos polieacutesteres ou
poliamidas A mateacuteria-prima principal para a sua manufatura eacute uma fonte de carbono
renovaacutevel geralmente um carboidrato derivado da cana-de-accediluacutecar milho batata trigo ou
beterraba(1-13)
Foi obtido um polissacariacutedeo extracelular pela fermentaccedilatildeo do melaccedilo da cana-de-
accediluacutecar por meio do microorganismo Zoogloea sp na Estaccedilatildeo Experimental de Carpina da
Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) Esse microorganismo foi identificado
no Departamento de Antibioacuteticos da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) O
biopoliacutemero sintetizado por esta bacteacuteria apresenta caracteriacutesticas fiacutesicas como pureza
elasticidade e flexibilidade(14-21)
O biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar na forma gel eacute hidrofiacutelico com boa
biocompatibilidade o que viabiliza sua aplicaccedilatildeo para preenchimento de defeitos
osteocondrais(414-21)
Esse GBPCA estaacute sendo estudado e aplicado pelo Nuacutecleo de Cirurgia Experimental
da UFPE em vaacuterios ensaios como Urologia Neurologia Cirurgia Vascular e Oftalmologia(18-
21)
O objetivo do presente estudo foi analisar a histologia dos defeitos osteocondrais
produzidos em cocircndilos femorais de coelhos preenchidos com gel de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar (GBPCA) em periacuteodos de 90 120 e 180 dias comparando com o grupo controle
MEacuteTODOS
Para o estudo proposto foram utilizados 16 coelhos brancos da linhagem Nova
Zelacircndia adultos jovens com 6 e 7 meses de idade e peso entre 2 e 25 kg sem alteraccedilotildees no
aparelho locomotor Os coelhos foram procedentes do criatoacuterio da Associaccedilatildeo dos
Cunicultores de Pernambuco mantidos em gaiolas metaacutelicas especiacuteficas (um animal por
gaiola) agrave temperatura ambiente no Bioteacuterio do Nuacutecleo de Cirurgia Experimental da
Universidade Federal de Pernambuco Os animais foram alimentados com raccedilatildeo padratildeo
peletizada e aacutegua ad libitum sob supervisatildeo veterinaacuteria e de acordo com a Comissatildeo de Eacutetica
em Experimentaccedilatildeo Animal do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas da Universidade Federal de
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
56
Albuquerque PCVC
Pernambuco (CEEA-UFPE) e o coacutedigo de eacutetica de experimentaccedilatildeo para animais do Conselho
Internacional da Organizaccedilatildeo da Ciecircncia Meacutedica e do Coleacutegio Brasileiro de Experimentaccedilatildeo
em Animais
Teacutecnica ciruacutergica
Os coelhos foram submetidos agrave anestesia geral com cloridrato de ketamina a 5 na
dose de 50 mgkg de peso associada ao hidrato de cloral a 10 na dose de 05 mlkg de peso
complementada com anestesia local xilocaiacutena 5 ml a 2 diluiacuteda em 9 ml de aacutegua destilada
Apoacutes tricotomia da aacuterea ciruacutergica anti-sepsia com soluccedilatildeo iodada aposiccedilatildeo de campo
operatoacuterio fenestrado incisatildeo para-patelar medial artrotomia para melhor visualizaccedilatildeo foi
provocada luxaccedilatildeo lateral da patela Com o joelho fletido foram produzidos com trefina
metaacutelica defeitos osteocondrais de 32mm de diacircmetro e 40mm de profundidade em cada
cocircndilo femoral
Os animais foram divididos em dois grupos grupo estudo joelho direito cocircndilos
medial e lateral os defeitos produzidos foram preenchidos com GBPCA e grupo controle
joelho esquerdo cocircndilos medial e lateral os defeitos produzidos foram deixados sem
preenchimento Os animais foram seguidos com observaccedilatildeo cliacutenica e sem restriccedilotildees de
mobilizaccedilatildeo Natildeo foi diagnosticado nenhum quadro de infecccedilatildeo
Os coelhos foram sacrificados apoacutes o ato ciruacutergico nos periacuteodos de 90 dias (seis
coelhos) 120 dias (cinco coelhos) e 180 dias (cinco coelhos) seguindo-se a ressecccedilatildeo das
peccedilas anatocircmicas e imersatildeo em soluccedilatildeo de Bouin para posterior processamento histoloacutegico
Anaacutelise Histoloacutegica
Foram feitos cortes com microacutetomo ao longo do eixo sagital do fecircmur distal de 4 a 7
microm sendo corados com hematoxilina-eosina e tricrocircmio de Masson e utilizado o microscoacutepio
oacuteptico Optonreg com aumento de 100x e 400x para anaacutelise qualitativa e quantitativa da
celularidade nos cortes histoloacutegicos correspondentes a cada animal de ambos os grupos
estudo e controle
Anaacutelise Morfomeacutetrica
Para cada lacircmina analisada foram estudados 5 campos aleatoacuterios com aumento de
400x no total de 20 campos por grupo estudado As fotografias foram obtidas atraveacutes de uma
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
57
Albuquerque PCVC
cacircmera fotograacutefica Moticam 1000reg
acoplada ao microscoacutepio oacuteptico Optonreg
e armazenadas no
software analisador de imagens - Motic Images Plusreg
Apoacutes a obtenccedilatildeo das fotografias foi realizado o estudo morfomeacutetrico avaliando-se a
densidade de ceacutelulas gigantes em cada campo seguido da contagem automaacutetica atraveacutes do
aplicativo Mesurin_Proreg
A densidade foi definida como o nuacutemero de ceacutelulas por aacuterea em
micromsup2 As meacutedias das densidades de cada corte histoloacutegico foram tomadas para estudo
estatiacutestico tipo comparativo
Anaacutelise Estatiacutestica
Para a anaacutelise estatiacutestica foi quantificado o nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes em
cada campo microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
dos animais do grupo estudo Calculou-se a meacutedia mediana e desvio padratildeo e aplicou-se o
teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis para comparaccedilatildeo entre as meacutedias encontradas nos
periacuteodos referidos A anaacutelise estatiacutestica do material foi realizada considerando o niacutevel de
significacircncia de 5 plt005
RESULTADOS
O resultado da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes em cada campo
microscoacutepico dos cortes histoloacutegicos obtidos nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias dos animais
dos grupos estudo encontra-se na Tabela 1
Tabela 1 Resultados da contagem do nuacutemero de ceacutelulas gigantes presentes nos grupos estudo e testes de
comparaccedilatildeo de meacutedia nos periacuteodos de 90 120 e 180 dias
Periacuteodos (dias) Miacutenimo Maacuteximo Meacutedia Mediana Desvio
Padratildeo IC (95) valor de p
90 2 10 565 600 213 465 ndash 665
0771 120 1 10 575 650 279 444 ndash 706
180 0 10 505 450 268 379 ndash 631
Total 0 10 548 550 253 483 ndash 614 -
Valor de p do Teste de Kruskal-Wallis
A anaacutelise histoloacutegica foi realizada por meacutetodo qualitativo sendo avaliadas as
variaacuteveis relacionadas agrave natureza do tecido de reparaccedilatildeo
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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67
Albuquerque PCVC
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68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
58
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 90 dias
Na Figura 1 encontra-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho
contornando o GBPCA Os elementos celulares predominantes foram monoacutecitosmacroacutefagos
linfoacutecitos ceacutelulas gigantes inflamatoacuterias e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta
composiccedilatildeo celular observou-se ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho vistas em
contato com o GBPCA implantado
Figura 1 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Biopoliacutemero e ceacutelulas gigantes Observar presenccedila de maior quantidade do GBPCA no
compartimento extra-celular
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
A B
C D
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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66
Albuquerque PCVC
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67
Albuquerque PCVC
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47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
59
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 90 dias
Na Figura 2 observa-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento completo da
lesatildeo sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 2 ndash Fotomicografia de corte histoloacutegico do grupo controle 90 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Fibrose cicatricial Observar proliferaccedilatildeo de fibroblastos no defeito produzido
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose
cicatricial
Fibrose cicatricial
A B
C D
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
httpwww2datasusgovbrDATASUSindexphparea=02
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66
Albuquerque PCVC
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67
Albuquerque PCVC
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37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
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39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
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40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
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41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
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46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
60
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 120 dias
Na Figura 3 observa-se reaccedilatildeo inflamatoacuteria crocircnica tipo corpo estranho contornando
o GBPCA Os elementos celulares predominantes satildeo monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos
ceacutelulas gigantes e em menor proporccedilatildeo neutroacutefilos Aleacutem desta composiccedilatildeo celular presenccedila
de GBPCA fagocitado por ceacutelulas gigantes
Figura 3 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar ceacutelulas gigantes com GBPCA no seu interior
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
A B
C D
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
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2 Portal de Biomateriais Histoacuteria dos biomateriais 2008 Available from
httpwwwbiomateriaiscombrtelasartigosartigosaspid_artigo=56ampid_assunto=1
3 Williams DF editor Definitions in biomaterials proceedings of a consensus conference of the European
Society for Biomaterials Chester England Elsevier 1987
4 Malmonge SM Zavaglia CAC Hidrogeacuteis de Poliheivia para reparo de defeitos da cartilagem articular
Siacutentese e caracterizaccedilatildeo mecacircnica Poliacutemeros Ciecircncia e Tecnologia 2004 14176-80
5 Anderson JM Rodrigues A Chang DT Foreign body reaction to biomaterials Semin Immnuol 2008 20-
86-100
6 Lu L Currier BL Yaszembski J Synthetic bone substitutes Curr Opin Orthop 2000 11383-90
7 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineering Curr Opin Orthop 2000
15347-54
8 Hench L amp Polak J Third generation biomedical materials Science 2002 295 1014ndash1017
9 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
10 Steigman SA Fauza DO editors Autologous approaches to tissue engineering In StemBook [Internet]
Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008 Aug 31
11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7 (Epub ahead of print)
12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
bone contact in experimental knee articular cartilage defects in a bovine model Arthroscopy 2010 Oct 8
[Epub ahead of print]
13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
bioreabsorviacutevel (PLLAPHBV) para uso na recuperaccedilatildeo de fraturas oacutesseas Poli Cienc Tecnol 2008
18312-9
14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-383
15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
cells for bone tissue engineering Stem Cells Int 2010 215625
24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
the 65th
Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
61
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 120 dias
Na Figura 4 encontra-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos e fechamento do defeito
sem presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas de processo inflamatoacuterio
Figura 4 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 120 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido
Tecido oacutesseo
Cartilagem
Fibrose
cicatricial
Tecido oacutesseo
Tecido oacutesseo Fibrose
cicatricial
A B
C D
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
httpwww2datasusgovbrDATASUSindexphparea=02
2 Portal de Biomateriais Histoacuteria dos biomateriais 2008 Available from
httpwwwbiomateriaiscombrtelasartigosartigosaspid_artigo=56ampid_assunto=1
3 Williams DF editor Definitions in biomaterials proceedings of a consensus conference of the European
Society for Biomaterials Chester England Elsevier 1987
4 Malmonge SM Zavaglia CAC Hidrogeacuteis de Poliheivia para reparo de defeitos da cartilagem articular
Siacutentese e caracterizaccedilatildeo mecacircnica Poliacutemeros Ciecircncia e Tecnologia 2004 14176-80
5 Anderson JM Rodrigues A Chang DT Foreign body reaction to biomaterials Semin Immnuol 2008 20-
86-100
6 Lu L Currier BL Yaszembski J Synthetic bone substitutes Curr Opin Orthop 2000 11383-90
7 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineering Curr Opin Orthop 2000
15347-54
8 Hench L amp Polak J Third generation biomedical materials Science 2002 295 1014ndash1017
9 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
10 Steigman SA Fauza DO editors Autologous approaches to tissue engineering In StemBook [Internet]
Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008 Aug 31
11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7 (Epub ahead of print)
12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
bone contact in experimental knee articular cartilage defects in a bovine model Arthroscopy 2010 Oct 8
[Epub ahead of print]
13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
bioreabsorviacutevel (PLLAPHBV) para uso na recuperaccedilatildeo de fraturas oacutesseas Poli Cienc Tecnol 2008
18312-9
14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-383
15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
cells for bone tissue engineering Stem Cells Int 2010 215625
24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
the 65th
Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
62
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo estudo apoacutes 180 dias
Na Figura 5 observa-se presenccedila de ceacutelulas gigantes reaccedilatildeo tipo corpo estranho
com o GBPCA implantado As ceacutelulas gigantes repousam sobre a estrutura fibrovascular
caracterizando um granuloma
Figura 5 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo estudo 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos defeitos
A B C e D) Observar presenccedila do GBPCA no interior das ceacutelulas gigantes e formaccedilatildeo de um granuloma
Biopoliacutemero
Ceacutelulas
gigantes
Granuloma Granuloma
Granuloma
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
Biopoliacutemero
C
D
A
B
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
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12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
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13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
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15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
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66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
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67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
63
Albuquerque PCVC
Resultados das anaacutelises histoloacutegicas do grupo controle apoacutes 180 dias
Na Figura 6 nota-se reaccedilatildeo fibrosa intensa com vasos caracterizando uma reaccedilatildeo
cicatricial com fechamento completo da lesatildeo produzida
Figura 6 ndash Fotomicografias de corte histoloacutegico do grupo controle 180 dias apoacutes a realizaccedilatildeo dos
defeitos A B C e D) Observar fibrose cicatricial no defeito produzido tecido oacutesseo e cartilagem
articular
DISCUSSAtildeO
Estudos recentes em tecidos osteocondrais demonstram reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada
por ceacutelulas gigantes decorrentes do uso de biopoliacutemero no preenchimento dos defeitos por
esse material verificando-se a resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo e a formaccedilatildeo de um tecido de
granulaccedilatildeo no qual se identifica macroacutefago fibroblasto e neovascularizaccedilatildeo (2141-45)
No estudo em questatildeo o biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar eacute classificado como um
biomaterial natural derivado de uma bacteacuteria Os resultados natildeo demonstraram presenccedila de
Tecido oacutesseo
Cartilagem articular
Fibrose cicatricial Fibrose cicatricial
Tecido oacutesseo
A B
C D
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
httpwww2datasusgovbrDATASUSindexphparea=02
2 Portal de Biomateriais Histoacuteria dos biomateriais 2008 Available from
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3 Williams DF editor Definitions in biomaterials proceedings of a consensus conference of the European
Society for Biomaterials Chester England Elsevier 1987
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Siacutentese e caracterizaccedilatildeo mecacircnica Poliacutemeros Ciecircncia e Tecnologia 2004 14176-80
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osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7 (Epub ahead of print)
12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
bone contact in experimental knee articular cartilage defects in a bovine model Arthroscopy 2010 Oct 8
[Epub ahead of print]
13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
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15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
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66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
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varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
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20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
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21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
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22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
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23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
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27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
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28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
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30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
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33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
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34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
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osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
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43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
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45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
64
Albuquerque PCVC
linfoacutecitos T (reaccedilatildeo imunoloacutegica) e tambeacutem natildeo apresentaram destruiccedilatildeo celular mesmo
tendo apresentado reaccedilatildeo mediada por ceacutelulas gigantes
Essa reaccedilatildeo inflamatoacuteria eacute frequentemente encontrada no tecido oacutesseo e
cartilagionoso onde existem concentraccedilatildeo de ceacutelulas progenitoras monoacutecitos macroacutefagos e
ceacutelulas gigantes principalmente quando do uso de biopoliacutemeros sinteacuteticos e naturais A
cicatrizaccedilatildeo demonstrou formaccedilatildeo de um tecido de granulaccedilatildeo neovascularizado que
corresponde agrave fase final do processo(5102641-45)
A evoluccedilatildeo vai depender se o biopoliacutemero
implantado iraacute atuar apenas como corpo estranho ou iraacute atuar tambeacutem como material
imunogecircnico No primeiro caso haveraacute formaccedilatildeo de uma caacutepsula fibrosa contornando o
material isolando-o do organismo No segundo haveraacute intensificaccedilatildeo da reaccedilatildeo inflamatoacuteria
e rejeiccedilatildeo do material
Na anaacutelise dos resultados encontrados ocorreu a formaccedilatildeo de granulomas tipo corpo
estranho nos periacuteodos de 120 e 180 dias Tal persistecircncia leva-se a crer que existe um pico de
reaccedilatildeo inflamatoacuteria com posterior decliacutenio apoacutes a cicatrizaccedilatildeo do defeito uma vez que nas
preparaccedilotildees histoloacutegicas natildeo mostraram halo imunogecircnico na vizinhanccedila Aleacutem do mais uma
reaccedilatildeo inflamatoacuteria aguda associada agrave presenccedila de um biopoliacutemero implantado eacute
desencadeada em qualquer situaccedilatildeo que exija cicatrizaccedilatildeo(41-45)
Constatou-se que a maior meacutedia do nuacutemero de ceacutelulas gigantes foi observada no
grupo estudo de 120 dias (575) e a menor no de 180 dias (505) Aleacutem disso a maior mediana
tambeacutem foi encontrada no grupo estudo de 120 dias O maior desvio padratildeo foi observado no
grupo de 120 dias indicando que este eacute o que possui maior dispersatildeo no nuacutemero de ceacutelulas
gigantes Mesmo apoacutes observar essas diferenccedilas nas meacutedias do nuacutemero de ceacutelulas gigantes
nos trecircs periacuteodos estudados o teste de comparaccedilatildeo de meacutedias natildeo se apresentou significante
O teste estatiacutestico de Kruskal-Wallis eacute adequado para amostras pequenas e quando a
distribuiccedilatildeo da variaacutevel em estudo natildeo segue o padratildeo da normalidade(46)
Esse teste
demonstrou que natildeo houve diferenccedila no nuacutemero de ceacutelulas gigantes encontrados nos periacuteodos
de 90 120 e 180 dias sugerindo uma natildeo progressatildeo do processo inflamatoacuterio
O emprego de biomateriais tais como os poliacutemeros biodegradaacuteveis e os
bioabsorviacuteveis tem papel crescente no arsenal terapecircutico meacutedico Alguns criteacuterios devem ser
obedecidos para implantar um biomaterial no corpo humano Entre eles serem atoacutexicos
velocidade adequada de absorccedilatildeo baixa resposta imunoloacutegica carcinogecircnica e
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
httpwww2datasusgovbrDATASUSindexphparea=02
2 Portal de Biomateriais Histoacuteria dos biomateriais 2008 Available from
httpwwwbiomateriaiscombrtelasartigosartigosaspid_artigo=56ampid_assunto=1
3 Williams DF editor Definitions in biomaterials proceedings of a consensus conference of the European
Society for Biomaterials Chester England Elsevier 1987
4 Malmonge SM Zavaglia CAC Hidrogeacuteis de Poliheivia para reparo de defeitos da cartilagem articular
Siacutentese e caracterizaccedilatildeo mecacircnica Poliacutemeros Ciecircncia e Tecnologia 2004 14176-80
5 Anderson JM Rodrigues A Chang DT Foreign body reaction to biomaterials Semin Immnuol 2008 20-
86-100
6 Lu L Currier BL Yaszembski J Synthetic bone substitutes Curr Opin Orthop 2000 11383-90
7 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineering Curr Opin Orthop 2000
15347-54
8 Hench L amp Polak J Third generation biomedical materials Science 2002 295 1014ndash1017
9 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
10 Steigman SA Fauza DO editors Autologous approaches to tissue engineering In StemBook [Internet]
Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008 Aug 31
11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7 (Epub ahead of print)
12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
bone contact in experimental knee articular cartilage defects in a bovine model Arthroscopy 2010 Oct 8
[Epub ahead of print]
13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
bioreabsorviacutevel (PLLAPHBV) para uso na recuperaccedilatildeo de fraturas oacutesseas Poli Cienc Tecnol 2008
18312-9
14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-383
15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
cells for bone tissue engineering Stem Cells Int 2010 215625
24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
the 65th
Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
65
Albuquerque PCVC
trombogecircnica(47)
Ateacute entatildeo considera-se que natildeo existe um material totalmente satisfatoacuterio
para o preenchimento de defeitos osteocondrais
CONCLUSAtildeO
O presente estudo mostrou que a aplicaccedilatildeo do gel de biopoliacutemero da cana-de-accediluacutecar
no preenchimento dos defeitos osteocondrais produzidos nos cocircndilos femorais de coelhos
provocou no grupo estudo uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria mediada por ceacutelulas gigantes enquanto no
grupo controle onde o defeito natildeo foi preenchido e deixado agrave cicatrizaccedilatildeo natural ocorreu
reaccedilatildeo tipo fibrose cicatricial sem a presenccedila de ceacutelulas caracteriacutesticas do processo
inflamatoacuterio
REFEREcircNCIAS
1 Ministeacuterio da Sauacutede Departamento de Informaacutetica do SUS 2008 Available from
httpwww2datasusgovbrDATASUSindexphparea=02
2 Portal de Biomateriais Histoacuteria dos biomateriais 2008 Available from
httpwwwbiomateriaiscombrtelasartigosartigosaspid_artigo=56ampid_assunto=1
3 Williams DF editor Definitions in biomaterials proceedings of a consensus conference of the European
Society for Biomaterials Chester England Elsevier 1987
4 Malmonge SM Zavaglia CAC Hidrogeacuteis de Poliheivia para reparo de defeitos da cartilagem articular
Siacutentese e caracterizaccedilatildeo mecacircnica Poliacutemeros Ciecircncia e Tecnologia 2004 14176-80
5 Anderson JM Rodrigues A Chang DT Foreign body reaction to biomaterials Semin Immnuol 2008 20-
86-100
6 Lu L Currier BL Yaszembski J Synthetic bone substitutes Curr Opin Orthop 2000 11383-90
7 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineering Curr Opin Orthop 2000
15347-54
8 Hench L amp Polak J Third generation biomedical materials Science 2002 295 1014ndash1017
9 Navarro M Michiardi A Castanotilde O Planell JA Biomaterials in orthopaedics J R Soc Interface 2008
51137ndash58
10 Steigman SA Fauza DO editors Autologous approaches to tissue engineering In StemBook [Internet]
Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008 Aug 31
11 Johnson LL Verioti C Gelber J Spector M DLima D Pittsley A The pathology of the end-stage
osteoarthritic lesion of the knee Potential role in cartilage repair Knee 2010 Oct 7 (Epub ahead of print)
12 Flanigan DC Harris JD Brockmeier PM Siston RA The effects of lesion size and location on subchondral
bone contact in experimental knee articular cartilage defects in a bovine model Arthroscopy 2010 Oct 8
[Epub ahead of print]
13 Ferreira BM Steffen AM Cardoso TP Alberto-Rincon MC Duek EAR Haste intramedular polimeacuterica
bioreabsorviacutevel (PLLAPHBV) para uso na recuperaccedilatildeo de fraturas oacutesseas Poli Cienc Tecnol 2008
18312-9
14 Beedle MP Kennedy JF Melo FAD LloydLL Medeiros VA Cellulosic exopolysaccharide produced from
sugarcane molasses by a Zooglea sp Carbohydrate Polymers 2000 42375-383
15 Aguiar J Lins E Marques S Coelho A Rossiter R Melo R Sugarcane biopolymer patch in femoral artery
angioplasty in dogs Acta Cir Bras 2007 22(Supl 1)77-81
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
cells for bone tissue engineering Stem Cells Int 2010 215625
24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
the 65th
Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
66
Albuquerque PCVC
16 Marques SRB Lins EM Aguiar JLA Albuquerque MCS Rossiter RO Montenegro LT Vieira RJ Um
novo substituto vascular arterioplastia femoral em catildees com remendo de membrana de bipoliacutemero de cana-
de-accediluacutecar ndash avaliaccedilatildeo hemodinacircmica e histoloacutegica J Vasc Bras 2007 6309-15
17 Akagawa Y Kubo T Karetake K Hayashi K Doi K Matsuura A et al Initial bone regeneration around
fenestrated implants in Beagle dogs using basic fibroblast growth factorndashgelatin hydrogel complex with
varying biodegradation rates J Prosthodont Res 2009 5341ndash7
18 Coelho MCOC Carrazoni PG Monteiro VLC Melo FAD Mota R Tenoacuterio Filho F Biopoliacutemero
Produzido a partir de Cana de Accediluacutecar para Cicatrizaccedilatildeo Cutacircnea Acta Cirur Bras 2002 17 1-7
19 Van de Velde K and Kiekens P Effect of material and process parameters on the mechanical properties of
unidirectional and multidirectional flax polypropylene composites Comp Struc 2003 62 p 443- 8
20 Castro C Aguiar J Melo F Silva W Marques E Silva D Citotoxicidade de biopoliacutemero de cana-de-
accediluacutecar An Fac Med Univ Fed Pernamb 2004 49119-23
21 Silva D Aguiar J Marques A Coelho A Rolim Filho E Miringoplastia com enxerto livre de membrana de
biopoliacutemero de cana-de-accediluacutecar e fascia autoacuteloga em Chinchilla laniger An Fac Med Univ Fed Pernamb
2006 5145-51
22 Tran RT Thevenot P Zhang Y Gyawali D Tang L Yang J Scaffold Sheet Design Strategy for Soft
Tissue Engineering Nat Mater 201031375-89
23 Chatterjea A Meijer G van Blitterswijk C de Boer J Clinical application of human mesenchymal stromal
cells for bone tissue engineering Stem Cells Int 2010 215625
24 Amiel D Coutts D Abel M Stewart W Harwood F Akeson WH Jolla LA Rib Perichondrial Graft for
Repair of Full-Thickess Articular-Cartilage Defects J Bone Joint Surg 1985 67-A911-20
25 Peterson L Autologous chondrocyte transplantation 2-10 year follow-up in 219 patients Proceedings of
the 65th
Annual Meeting of the American Academy of Orthopaedic Surgeons New Orleans Am Acad
Orthop Surg 1998
26 Martin-Hernandez C Cebamanos-Celma J Molina-Ros A Ballester-Jimenez JJ Ballester-Soleda J
Regenerated cartilage produced by autogenous periosteal grafts a histologic and mechanical study in
rabbits under the influence of continuous passive motion Arthroscopy 2010 2676-83
27 Willerth SM Sakiyama-Elbert SE Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues
and cell delivery StemBook [Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Jul 9
28 Calderon L Collin E Velasco-Bayon D Murphy M OHalloran D Pandit A Type II collagen-hyaluronan
hydrogel - a step towards a scaffold for intervertebral disc tissue engineering Eur Cell Mater 2010
20134-48
29 Anbio Associaccedilatildeo Nacional de Biosseguranccedila Disponiacutevel em ltwwwanbioorgbrgt Acesso em 04 dez
2010
30 Kuo CK Marturano JE Tuan RS Novel strategies in tendon and ligament tissue engineering Advanced
biomaterials and regeneration motifs Sports Med Arthrosc Rehabil Ther Technol 2010 220
31 Czaja W Krystynowicz A Bieleckia S Malcolm RB J Biomaterials 2006 27145-51
32 Brittberg M Autologous chondrocyte implantation - Technique and long-term follow-up Injury 2008
3940-49
33 Kulkarni RK Moore EG Hegyeli AF Leonard F Biodegradable poly(lactic acid) polymers J Biomed
Mater Res 1971 5169-81
34 Schipani E Kronenberg HM Adult mesenchymal stem cells StemBook [Internet] Cambridge (MA)
Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 31
35 Eshghi S Schaffer DV Engineering microenvironments to control stem cell fate and function StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2008 Sep 11
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
67
Albuquerque PCVC
36 Menon LG Shi VJ Carroll RS Mesenchymal stromal cells as a drug delivery system StemBook
[Internet] Cambridge (MA) Harvard Stem Cell Institute 2008-2009 Jan 15
37 Sakata MM Alberto-Rincon MC Duek EAR Estudo da interaccedilatildeo poliacutemerocartilagemosso utilizando
poli (aacutecido laacutetico-co-aacutecido glicoacutelico) e poli (p-dioxanona) em cocircndilo femoral de coelhos Poliacutemeros 2004
14176-80
38 Ikeda R Fujioka H Nagura I Kokubu T Toyokawa N Inui A Makino T Kaneko H Doita M Kurosaka
M The effect of porosity and mechanical property of a synthetic polymer scaffold on repair of
osteochondral defects Int Orthop 2009 33821-8
39 Glowacki J Mizuno S Biomaterials in cartilage and bone tissue engineeering Curr Opln Orthop 2004
15347-45
40 Carlo EC Borges APB Pompermayer LG Martinez MM Eleoteacuterio RB Nehme RC Morato GO
Compoacutesito para fabricaccedilatildeo de implantes reabsorviacuteveis para osteossiacutentese avaliaccedilatildeo da biocompatibilidade
em coelhos Cienc Rural 2009 39135-40
41 Sassioto MCP Cardoso Filho N Facco GG Sodreacutes ST Neves N Purisco SU et al Efeito da Casearia
sylvestris no reparo oacutesseo com matriz oacutessea bovina desvitalizada em ratos Acta Cir Bras 2004 19637-41
42 Mendes PRS Bins-Ely J Lima EAS Vasconcellos ZAA dAcampora AJ Neves RE Histological study on
acute inflammatory reaction to polyurethane-coated silicone implants in rats Acta Cir Bras 2008 2393-
101
43 Anderson M J Foreign Body reation to biomaterial Semin Immunol2008 20 86-100
44 Fowler DE 3rd Hart JM Hart JA Miller MD) JKnee Surg 2009 Oct22(4)372-4 Responses in vivo to
purified poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) implanted in a murine tibial defect model J
Biomed Mater Res A 2009 91845-54
45 Emans PJ Van Rhijn LW Welting TJM Cremers A Wijnands N Spaapen F Voncken JW Shastri VP
Autologous engineering of cartilage Proc Natl Acad Sci U S A 2010 February 23 107 3418ndash3423
46 Arango HG Bioestatiacutestica teoacuterica e computacional 2 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2005
47 Cardoso TP Duek EAR Amatuzzi MM Caetano EB Proacutetese meniscal de poliacutemero bioabsorviacutevel Estudo
em coelhos VerBras Ortop45(3)247-259
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
68
Albuquerque PCVC
Anexos
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
69
Albuquerque PCVC
Anexo A
Tabela de dados colhida das 16 amostras Anaacutelise Macroscoacutepica dos defeitos produzidos
avaliando a superfiacutecie coloraccedilatildeo consistecircncia continuidade e cicatrizaccedilatildeo do defeito
JOELHO DIREITO JOELHO ESQUERDO JOELHO DIREITO
CONDILO DIREITO CONDILO DIREITO CONDILO ESQUERDO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 10 6250 9 56 PLANA 10 6250
DEPRESSAtildeO 6 3750 6 38 DEPRESSAtildeO 4 2500
DEGENERACcedilAtildeO 0 000 1 6 DEGENERACcedilAtildeO 2 1250
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 3 1875 4 25 TRANSLUacuteCIDA 2 1250
OPACA 3 1875 1 6 OPACA 3 1875
DESCOLORACcedilAtildeO 10 6250 11 69 DESCOLORACcedilAtildeO 11 6875
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 7 4375 8 50 NENHUMA 5 3125
SOMENTE DO DEFEITO 8 5000 5 31 SOMENTE DO DEFEITO 10 6250
DEFEITO E CARTILAGEM 1 625 3 19 DEFEITO E CARTILAGEM 1 625
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 16 10000 16 100 FIRME 15 9375
NAtildeO FIRME 0 000 0 0 NAtildeO FIRME 1 625
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 8 5000 9 56 SIM -TOTAL 6 3750
SIM - PARCIAL 0 000 0 0 SIM - PARCIAL 1 625
75 3 1875 2 13 75 3 1875
50 1 625 3 19 50 1 625
25 0 000 2 13 25 1 625
0 4 2500 0 0 0 4 2500
COELHOS 90 DIAS 6781319 COELHOS 90 DIAS 6781319
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 4 80 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 1 20 DEPRESSAtildeO 2 40
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 1 20
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 0 0 0 0 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 2 40 1 20 OPACA 1 20
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 4 80 DESCOLORACcedilAtildeO 2 40
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 1 20 2 40 NENHUMA 1 20
SOMENTE DO DEFEITO 4 80 3 60 SOMENTE DO DEFEITO 2 40
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 2 40
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 2 40 2 40 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 0 0 SIM - PARCIAL 0 0
75 1 20 1 20 75 1 20
50 0 0 1 20 50 2 40
25 0 0 0 0 25 0 0
0 2 40 1 20 0 0 0
COELHOS 120 DIAS 12345 COELHOS 120 DIAS 12345
JOELHO DIREITO CONDILO DIREITO JOELHO DIREITO CONDILO ESQUERDO JOELHO ESQUERDO CONDILO DIREITO
SUPERFIacuteCIE SUPERFIacuteCIE
PLANA 3 60 3 60 PLANA 2 40
DEPRESSAtildeO 2 40 2 40 DEPRESSAtildeO 3 60
DEGENERACcedilAtildeO 0 0 0 0 DEGENERACcedilAtildeO 0 0
COLORACcedilAtildeO COLORACcedilAtildeO
TRANSLUacuteCIDA 2 40 2 40 TRANSLUacuteCIDA 2 40
OPACA 0 0 0 0 OPACA 0 0
DESCOLORACcedilAtildeO 3 60 3 60 DESCOLORACcedilAtildeO 3 60
EROSAtildeO (CONTINUIDADE) EROSAtildeO (CONTINUIDADE)
NENHUMA 3 60 0 0 NENHUMA 2 40
SOMENTE DO DEFEITO 2 40 5 100 SOMENTE DO DEFEITO 3 60
DEFEITO E CARTILAGEM 0 0 0 0 DEFEITO E CARTILAGEM 0 0
CONSISTEcircNCIA CONSISTEcircNCIA
FIRME 5 100 5 100 FIRME 5 100
NAtildeO FIRME 0 0 0 0 NAtildeO FIRME 0 0
CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO CICATRIZACcedilAtildeO DO DEFEITO
SIM -TOTAL 3 60 1 20 SIM -TOTAL 2 40
SIM - PARCIAL 0 0 1 20 SIM - PARCIAL 0 0
75 0 0 2 40 75 1 20
50 0 0 0 0 50 1 20
25 0 0 1 20 25 1 20
0 2 40 0 0 0 0 0
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
70
Albuquerque PCVC
Anexo B
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
71
Albuquerque PCVC
Anexo C
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
72
Albuquerque PCVC
Anexo D
Certificados de trabalhos apresentados em Congressos
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
73
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC
74
Albuquerque PCVC