Eletroforese

Faculdade de BiomedicinaDisciplina de Instrumentação Laboratorial

Definição:

Separação de moléculas em um campo elétrico de acordo com o tamanho, forma ou a carga elétrica.

Tem aplicações nas áreas de análises clínicas, moleculares e genéticas.

Aplicações da eletroforese

1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo

2 – testes de paternidade

3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme)

4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos (imunoglobulinas)

5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão analisados

Etapas da eletroforese• Extração e purificação do material;• Aplicação do material em um suporte: gel de

agarose, acrilamida, acetato de celulose;• Imersão deste suporte em uma solução tampão

que permita a transmissão da corrente elétrica;• Aplicação da corrente elétrica em intensidade e

tempo adequados,• Visualização dos resultados.

Cuba e fonte para eletroforese

Tipos de gel: AgaroseUsados para separar moléculas de DNA e RNA de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas diferentes concentrações de agarose. Normalmente utiliza-se a 2%

Eletroforese de DNA

Tipos de gel: Poliacrilamida

Usados para separar pedaços de DNA de tamanhos muito pequenos e proteínas.

Acetato de celulose

Utilizado para separar diferentes tipos de hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.

Esquema da eletroforese de hemoglobina

Corrente elétrica

As amostras de DNA, RNA e proteína migram para o pólo positivo, pois são carregadas negativamente.

Certifique-se da posição do gel e a direção da eletroforese!

Tampão de corrida

• Para amostras de DNA e RNA o tampão deve ser o mesmo utilizado para diluir a agarose (TAE ou TBE).

• Para amostras de hemoglobina utiliza-se o tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou tampão agarose pH 6,5 (ácido).

Análise dos resultados

A visualização das diferentes bandas depende de coloração específica.DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR greenProteínas = azul de coomassie e prata

DNA e RNA

• Marcadores de tamanho para DNA e RNA

DNA corado com SYBR green

Marcador de tamanho (100 pares de base)

Proteínas