elane monografia corrigida 2 (pdf)

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE CENTRO DE SADE E TECNOLOGIA RURAL CAMPUS DE PATOS-PB CURSO DE MEDICINA VETERINRIA

MONOGRAFIA

Avaliao do sangue total e suas fraes no diagnstico de erliquiose canina pela reao em cadeia da polimerase em nested (nested PCR).

Elane Maria Camboim Lustosa

2010

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE CENTRO DE SADE E TECNOLOGIA RURAL CAMPUS DE PATOS-PB CURSO DE MEDICINA VETERINRIA

MONOGRAFIA

Avaliao do sangue total e suas fraes no diagnstico de erliquiose canina pela reao em cadeia da polimerase em nested (nested PCR).

Elane Maria Camboim Lustosa Graduanda

Prof. Dr. Marcia Almeida de Melo Orientadora

Patos, PB Abril de 2010

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FICHA CATALOGADA NA BIBLIOTECA SETORIAL DO CAMPUS DE PATOS UFCG L972a 2010

Lustosa, Elane Maria Camboim. Avaliao do sangue total e suas fraes no diagnstico de erliquiose canina pela reao em cadeia da polimerase em nested (nested PCR) / Elane, Maria Camboim Lustosa. - Patos - PB: CSTR, UFCG, 2010. 41p. Inclui bibliografia. Orientadora: Mrcia Almeida de Melo Monografia (Graduao em Medicina Veterinria) Centro de Sade e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande. 1 Diagnstico Laboratorial - Monografia. 2 Erliquiose co. - I Ttulo. CDU: 616-074

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE CENTRO DE SADE E TECNOLOGIA RURAL CAMPUS DE PATOS-PB CURSO DE MEDICINA VETERINRIA

ELANE MARIA CAMBOIM LUSTOSA Graduanda

Monografia submetida ao curso de Medicina Veterinria como requisito parcial para obteno do grau de Mdica Veterinria

APROVADO EM ....../....../........

MDIA: ________

BANCA EXAMINADORA

Prof. Dr. Marcia Almeida de Melo ORIENTADORA

Prof. Dr. Adriano Fernandes Ferreira EXAMINADOR

Prof. Dr. Rosngela Maria Nunes da Silva EXAMINADOR

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A Deus, meu amor supremo, ao meu pai Diral (in memorian) a quem eu amei e dediquei a minha vida; a minha me Salete que tenho um amor imensurvel e ao meu noivo Abrao Lyncolly amor da minha vida por tornar meus dias mais felizes, dedico.

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AGRADECIMENTOS A Deus pelo seu amor, proteo, misericrdia e bondade sobre mim desde que nasci, por permitir que eu chegasse at aqui, me dando fora para suportar as perdas da vida e os obstculos, no me deixando desistir nem enfraquecer, colocando-me em seus braos, curando minhas feridas, sendo meu amigo nos momentos de aflio em que eu me senti sozinha, colocando em meu caminho pessoas especiais para realizar em mim a sua obra. A ti meu amado Deus, a minha eterna gratido e adorao. A meu pai (in memorian) pela sua dedicao a minha vida, por seu amor incondicional aos seus filhos, por todos os esforos sem medida durante sua vida para a nossa criao, por sua vontade de me ver vencer, por todos os ensinamentos deixados em minha memria. Saudades! minha me por todo amor e dedicao que foram essenciais me servindo de base nos momentos difceis, contribuindo para o meu crescimento pessoal e por toda sua preocupao em me ver feliz. Aos meus irmos Edvnia e Ewerton, meus cunhados Geovannio e Renata, por todo carinho e ateno e fora nesta caminhada, me estimulando a seguir em frente e no desistir nas horas difceis, a todos eles a minha gratido. Ao meu grande amor Abrao Lyncolly pela sua presena constante em todos os momentos desde que nos conhecemos, sua dedicao, amor, carinho, cuidado, compreenso, exemplo, que me ensinou o verdadeiro sentido do amor. A minha famlia paterna, em especial minha av Leca que at hoje a minha referncia, e aos meus tios Edilbelto (in memorian), Edilnia, Edmone e Edilpia a quem devo meus verdadeiros valores de vida. A minha famlia materna: minha av Maria Jos, meus tios Naldo, Antnio, Sebastio, Frana, Ftima, em especial Lcia, que sempre me apoiaram e torceram por mim. famlia do meu noivo Lyncolly que considero minha nova famlia: Diassis e Auxiliadora, meus sogros, a quem tenho grande admirao, meus cunhados Ado, Andrei, Jaciara e Juliermson seu esposo pela amizade, apoio e carinho que sempre tiveram por mim. A minha orientadora Prof Dr. Marcia Melo e ao seu esposo Prof. Dr. Paulo de Andrade e ao Fauzinho (alegria do laboratrio) por todos os ensinamentos profissionais e pessoais, pela amizade, apoio, acolhimento, por terem acreditado na minha capacidade, e por todo exemplo que so para mim. Vocs foram fundamentais em minha vida. A Tereza Emanulle que foi pea fundamental, trabalhando comigo em todos os momentos deste estudo, partilhando seus conhecimentos, sendo acima de tudo amiga, sem a sua presena no seria possvel realizao deste trabalho.

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A toda equipe do laboratrio (Aline, Tereza, Expedito, Arthur, Kamila, Gilzane e Maurina), pela amizade construda, pela troca de ensinamentos e por todos os dias em que compartilhamos com alegria trabalhando juntos. As todas as minhas primas em especial as mais presentes em minha vida Savanna e Clarissa, obrigada por todo apoio e amizade que vocs tm a mim. A todos os meus colegas de veterinria da turma 2010.1, a cada um em particular pela convivncia de cinco anos, formando uma nova famlia que ser guardada no meu corao para sempre, em especial Giulianna que sempre esteve em meu corao e a Gilzane ao verdadeiro lao de amizade que surgiu entre ns, por tudo que ela me ensinou como pessoa e o sentimento sincero que ela extraiu dentro de mim; a Andra que sempre estudou comigo desde ainda criana mantendo a mesma amizade e considerao; a Siduane e Maurina que me conquistaram com suas amizades. As minhas amigas Cladia, Rachel, Karla, Nanita, Vernica, Katyany e Herta que desde sempre estiveram presentes seja por um telefonema ou visita, nunca perdendo o contato, estando nos momentos mais precisos, me escutando, me aconselhando, torcendo sempre por mim. A todos do Centro Mdico Veterinrio (Dr. Leonardo, sua esposa Sibele, Dr. Aline, Din, Rodrigo e Ramon), pela amizade, acolhimento, confiana e ensinamentos contribuindo para a minha vida profissional. A todos os professores da Medicina Veterinria que deixaram no s ensinamentos profissionais, mas principalmente ensinamentos para vida. A todos os funcionrios que direta ou indiretamente foram essenciais nesta etapa da minha vida, em especial Tereza e Damio. Ao professor Srgio pelo apoio na anlise estatstica, se disponibilizando em todas as vezes que lhe procurava para tirar uma dvida. Aos professores Dr. Adriano Ferreira e Dr. Rosngela Maria que participaram da banca examinadora, mesmo no tendo sido meus professores durante o curso teve maior respeito e cuidado na avaliao do meu trabalho. A todos que participaram desta etapa da minha vida direta e indiretamente me apoiando e acreditando na minha capacidade.

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SUMRIO

1 INTRODUO.................................................................................................... 2 REVISO DE LITERATURA........................................................................... 2.1 Etiologia...................................................................................................... 2.2 Histrico...................................................................................................... 2.3 Taxonomia.................................................................................................. 2.4 Epidemiologia............................................................................................. 2.5 Principais espcies que acometem o co..................................................... 2.5.1 Ehrlichia ewingii (EGC)............................................................... 2.5.2. Ehrlichia platys (ETC)................................................................ 2.5.3. Ehrlichia canis (EMC)................................................................ 2.6 Transmisso, clnica e patogenia da infeco por Ehrlichia canis............. 2.7 Principais mtodos de diagnsticos utilizados na deteco de Ehrlichia... 4 MATERIAL E MTODOS................................................................................. 4.1 Local de Execuo...................................................................................... 4.2 Amostras de Ehrlichias............................................................................... 4.3 Esfregao Sanguneo................................................................................... 4.4 Extrao do DNA........................................................................................ 4.5 Nested PCR................................................................................................. 4.6 Anlise Estatstica....................................................................................... 6 RESULTADOS E DISCUSSO......................................................................... 7 CONCLUSO...................................................................................................... 8 REFERNCIA BIBLIOGRFICA...................................................................

Pg 12 14 14 14 15 16 17 17 18 18 19 21 24 24 24 25 25 26 27 28 33 34

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LISTA DE FIGURAS

Pg Figura 1 - Fotomicrografias de esfregaos de papa leucocitria de sangue de ces 22 positivos na nested PCR para Ehrlichia canis e/ou PCR para Anaplasma platys.......................................................................................................................... Figura 2 - SepCell:LGC Reagente para isolamento in vitro de linfcitos............. 25 Figura 3 - Eletroforese em gel de agarose apresentando os resultados da nested 30 PCR para deteco do gene 16S RNA ribossmico de Ehrlichia canis..................

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LISTA DE TABELAS

Tabela 1. Esquema de classificao antiga e atual das principais espcies do gnero Ehrlichia,

Pg 16

Anaplasma e Neorickettsia com suas respectivas clulas alvos e hospedeiros.................................................................................