![Page 1: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/1.jpg)
UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍCENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE FARMÁCIA
AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS
Prof. Rilton Alves de FreitasCentro e Ciência da Saúde, Universidade do
Vale do Itajai, Itajai-S.C., Brasil
Aula curso Second Brazilian School on Nanobiotechnology-Itajai-S.C.4-10 de Novembro 2007 (rede de nanobiotecnologia-NANOBIOTEC
![Page 2: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/2.jpg)
ASPECTOS GERAIS DE NANOPARTÍCULAS
• Fatores de toxicidade de nanopartículas (Nighswonger, 1999; Oberdörster et al., 2005; Smart et al. 2005)::
- Como citado anteriormente a razão área superficial pela massa, pois uma grande área superficial gera partículas com uma maior área de contato com membranas células, assim como uma grande capacidade de absorção e transporte de substâncias tóxicas.
- O Tempo de retenção da partícula, pois quanto maior o tempo de contato da mesma com a membrana celular, maior a chance de dano. Este fator incorpora o conceito de mobilidade de partícula, ou pelo clearance ou migração para tecidos adjacentes.
- Reatividade ou toxicidade inerente do composto químico contido com a partícula.
![Page 3: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/3.jpg)
ASPECTOS GERAIS DE NANOFIBRAS
• Tamanho da fibra x respirabilidade (capacidade de penetrar na região centro-acinar do pulmão).
– Fibras com comprimento maior que 15 um apenas são respiráveis se apresentam uma espessura menor que 5 um.
– Fibras longas (>17 um) tornam difícil a fagocitose por macrófagos, promovendo uma resposta crônica que contribui para a fibrose pulmonar.
– Fibras curtas, menores que 7 um, são por outro lado facilmente fagocidadas, e removidas por macrófagos alveolares (DONALDSON e TRAN, 2004; YE et al., 1999; DONALDSON et al., 1992).
• A Biopersistência: partículas longas são dificilmente fagocitadas por macrófagos.
– Fibras biosolúveis são capazes de se difundir reduzindo e serem fagocitadas mas facilmente, gerando uma baixa biopersistência e reduzindo assim a toxicidade de fibras longas longas (maiores que 20 um).
• Reatividade ou toxicidade inerente, dependendo basicamente dos componentes químicos da nanopartículas.
![Page 4: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/4.jpg)
REGULAMENTAÇÃO DA NANOTOXICOLOGIA
• AVALIAÇÃO COMPLETA DO RISCO DE PRODUÇÃO DE NANOPARTÍCULAS (Friedrichs, Schulte, 2007)– Identificação do risco– Caracterização do risco– Avaliação do risco– Prevenção e controle o risco– Avaliação das medidas de controle do
Obs:. Royal Society and the Royal Academy of Engineering of UK government, Recommend nanoparticulate materials to be treated as new substances.
![Page 5: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/5.jpg)
Tempo para desenvolver um Tempo para desenvolver um medicamentomedicamento
5.0000 a 10.000 5.0000 a 10.000 selecionadosselecionados
250 entram em 250 entram em teste pré-clínicoteste pré-clínico
Apenas 1 chega ao Apenas 1 chega ao mercadomercado
00 22 44 66 88 1010 1212 15151414
AnosAnos
Invenção e desenvolvimento Invenção e desenvolvimento
Testes pré-clínicos Testes pré-clínicos (testes laboratoriais em (testes laboratoriais em animais)animais)
Fase I – 20 a 80 voluntários Fase I – 20 a 80 voluntários saudáveis para determinar saudáveis para determinar segurança e dosagemsegurança e dosagemFase II – 100 a 300 Fase II – 100 a 300
voluntários para determinar voluntários para determinar eficácia e efeitos colateraiseficácia e efeitos colaterais
Fase III – 1.000 a 20.000 pacientes Fase III – 1.000 a 20.000 pacientes voluntários para monitorar reações voluntários para monitorar reações adversas em uso de longa duraçãoadversas em uso de longa duração
Aprovação do GovernoAprovação do Governo
Fase IV – Teste adicional pós-Fase IV – Teste adicional pós-comercializaçãocomercialização
Patente Patente
solicitadasolicitada
Patente Patente
concedidaconcedida
5 entram 5 entram
em testes em testes
clínicosclínicos
![Page 6: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/6.jpg)
Avaliação toxicológica – Estudos Pré- clínicos
Estudos Agudos
• DL50 Oral• DL50 Dérmica • CL50 Inalatória• Irritação / Corrosão Ocular• Irritação / Corrosão Dérmica• Sensibilização Cutânea
Avaliação de perigo
Classificação toxicológica
![Page 7: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/7.jpg)
Avaliação toxicológica
Estudos sobre mutagenicidade• Mutação gênica (procariontes) • Mutação cromossômica (eucariontes)
Estudos sobre carcinogenicidade• Camundongo (18 meses) • Rato (24 meses)
Estudos sobre teratogenicidade• Coelho • Rato
Proibição do Registro
![Page 8: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/8.jpg)
Estudos de reprodução e prole
Estudos de curto prazo• Roedor (90 dias) • Não roedor (1 ano)
Avaliação toxicológica
Estudos de longo prazo e carcino• Camundongo (18 meses) • Rato (24 meses)
Estudos dos efeitos teratogênicos
Estudos de neurotoxicidade
NOAEL
![Page 9: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/9.jpg)
Ingestão Diária Aceitável (IDA) - quantidade máxima que, ingerida diariamente durante toda a vida, parece não oferecer risco apreciável à saúde, à luz dos conhecimentos atuais
Definições importantes
![Page 10: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/10.jpg)
Avaliação toxicológica
Dose 3X
Controle
Dose 2X
Dose X
NOAEL
![Page 11: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/11.jpg)
Avaliação toxicológica
NOAEL
IDA = NOAEL
Fator de incerteza
Fatores de incerteza
![Page 12: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/13.jpg)
TESTES PRÉ-CLÍNICOS:MÉTODOS TOXICOLOGICOS “IN
VITRO”
Azul de tripan
![Page 14: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/14.jpg)
QUANTIFICAÇÃO DE CRESCIMENTO
MTT(3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)
http://www.ib.amwaw.edu.pl/home/dslado/video/mtt.html
![Page 15: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/15.jpg)
Apoptosis Necrosis
Alaranjado de Acridina
AO stains DNA
Small intense spots Diffuse spots
![Page 16: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/16.jpg)
Processos necróticos: Lactato desidrogenase
LACTATO PIRUVATO
NAD+ NADH
![Page 17: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/17.jpg)
• Processos terminais– Nucleases: Fragmentação do DNA– Morfologia (nuclear)
• Processos iniciais– Fosfatidilserina– Caspases
QUANTIFICAÇÃO APOPTOSE
![Page 18: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/18.jpg)
DAPI TUNEL/IODETO PROPIDIO
BROMETO DE ETIDIO ALARANJADO DE ACRIDINA
![Page 19: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/19.jpg)
• Células saudáveis– Membrana polarizada DAPI – Sistema de transporte ativo (Azul 460 nm)
• Células vitais– Membrana polarizada BROMETO DE ETIDIO– Sem sistema de transporte ativo (Vermelho 602 nm)
• Células intactas– Membrana despolarizada BROMETO DE ETIDIO– Sem sistema de transporte ativo (Vermelho 602 nm)
• Células mortas– Membrana despolarizada BROMETO DE ETIDIO– Sem sistema de transporte ativo IODETO PROPIDIO
(Vermelho 603 nm)
![Page 20: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/20.jpg)
--
--
-
-
--
-
-
-- Annexine-FITC
normal
early
late
+ PI
![Page 21: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/21.jpg)
Espalhamento (Forma, Granulos)
size
Fluorescence Verde (FITC)
Fluorescence Vermelho (PI)
Citometria de Fluxo
![Page 22: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/22.jpg)
Dados Típicos
Forward scatter Espalhamento frontal
Side scatterEspalhamento lateral
Forward scatter
Side scatter
![Page 23: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/23.jpg)
100 101 102 103 104
FL
3-H
eig
ht
100
101
102
103
104
FL1-Height Annexine-FITC
PI
Early apoptotic
Late apoptoticNecrotic
Viable
?
PI vs. Annexin-FITC)
![Page 24: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/24.jpg)
Propidium iodide = DNA
BRdU = Sintese DNA
Ciclo celular + corantes
G1
S
G2
M
Apoptose
S=DNA synthesisM=cell dividesG = gap
LosingDNA
![Page 25: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/25.jpg)
G2/MG1
SO
Red fluorescenceG
reen
G2/MG1
SO
Red fluorescence
Gre
en
Higher dilution rateLower death
Lower dilution rateHigher death
![Page 26: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 28: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/28.jpg)
FRAGMENTAÇÃO DNA
![Page 29: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/29.jpg)
Células Caco-2
culture dish
insert Basolateral medium
apical medium
Caco-2 cell monolayer
MÉTODOS DE AVALIAÇÃO DA BIODISPONIBILIDADE “IN VITRO” DE
NANOPARTÍCULAS
![Page 30: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/30.jpg)
Célula Caco-2Meio E-MEM 10% SFB
200.000 células/mL
Matriz extracelular
Permeação aparente (Papp)
Porção apical
Incubação14 – 28 dias37oC/5%CO2TEER 350 *cm2
BasoLateral
Tempos0 – 24 horasIntervalo 2h
![Page 31: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/31.jpg)
CLASSIFICAÇÃO BIOFARMACÊUTICA
Solubilidade e Permeabilidade são os parâmetros chaves que controlam a absorção de fármacos (AMIDON, 1995)
Classe I: Fármacos de alta solubilidade e alta permeabilidade;
Classe II: Fármacos de baixa solubilidade e alta permeabilidade;
Classe III: Fármacos de alta solubilidade e baixa permeabilidade;
Classe IV: Fármacos de baixa solubilidade e baixa permeabilidade
![Page 32: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/36.jpg)
TEER: Resistência Elétrica Transepitelial
> 300 cm2 < 300 cm2
Manitol
![Page 37: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/37.jpg)
Apical
Basal
enterocito
![Page 38: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/38.jpg)
APICAL
*
CYP3A4
BASAL
enterocito
![Page 39: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/39.jpg)
APICAL
CYP3A4
BASAL
enterocito
*X
![Page 40: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/40.jpg)
APICAL
BASAL
enterocito
*
![Page 41: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/41.jpg)
APICAL
BASAL
enterocito
Pgp
CYP3A4
OATP
![Page 42: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/42.jpg)
BIODISPONIBILIDADE
Classificação do fármaco segundo o Sistema de Classificação Biofarmacêutico.
ClassePapp Razão
dose/solubilidade
1 Altamente solúveis e altamente permeáveis
> 10-5 < ou = 0,5
2 Baixa solubilidade e alta permeabilidade
> 10-5 > 0,5
3 Alta solubilidade e baixa permeabiliade
< 2 x 10-6 < ou = 0,5
4 baixa solubilidade e baixa permeabilidade
< 2 x 10-6 > 1
TEMPO (h)
Conc.Basal
tg
![Page 43: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/43.jpg)
• Papp > 10-6 cm/s: 100% absorvido• 10-7 < Papp < 10-6 cm/s: 1 – 99% absorção• Papp < 10-7 cm/s: < 1 % absorção
Bioequivalência:
• Alta permeabilidade Papp > 10-5 cm/s
• Baixa permeabilidade Papp < 10-5 cm/s
![Page 44: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/44.jpg)
TESTES PRÉ-CLÍNICOS: TESTES TOXICOLÓGICOS “IN VIVO”
![Page 45: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/45.jpg)
![Page 46: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/47.jpg)
![Page 48: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/48.jpg)
![Page 49: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/49.jpg)
Acridinas = intercalantesLevam a mudança de fase de leitura
Dímero de pirimidinaLesão mais comum do UV curto
(fotoliase)
Nem sempre a droga é mutagênicaAflatoxina do fungo do amendoim
é ativada perto do núcleo
4. MUTAGÊNESE (GENOTOXICIDADE) E CARCINOGÊNESE
![Page 50: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/50.jpg)
Reparo de erros de pareamento“Mismatch repair”
Teste de AMES10 bilhões de Salmonella his-
Uma reversão de mutação torna-as his+
Expansão de repetiçõesHuntintina expande de 6-31 rep.
para 36-82
![Page 51: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/51.jpg)
GENOTOXICIDADE
CamundongoFêmur
Remoção dasepífises 1) Contagem
câmara de Neubauer
2) Viabilidade 85%
3) 1.000.000 cel/mL
Lâminas Jateadas
Agarose1%
Agarose Low melting
0,75%
Incubar 1h 37C/5%CO2
Controles DMSOMMS ou H2O2
Lavar com PBS gelado
![Page 52: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/52.jpg)
Tampão de lise Tampão de corrida25 V
300 mA30 min
Tampão de NeutralizaçãoBrometo de etídeo
DMSO: Núcleo íntegro (controle NEGATIVO de Genotoxicidade)MMS: Fragmentação nuclear (controle POSITIVO de Genotoxicidade)
![Page 53: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/53.jpg)
Método de classificação de Kobayashi et al. (1995); Miyamae et al. (1998) 1)sem cauda2) cometas com pequenas caudas (caudas com comprimento < 25% da cabeça)3) Cometas com caudas de tamanho médio (caudas com comprimento entre 25% e 100% da cabeça)4) Cometas com caudas longas (comprimento da cauda > que a cabeça)5) Cometas mal definidos ou com cabeça pequena.
![Page 54: UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE FARMÁCIA AVALIAÇÃO TOXICOLÓGICA DE NANOPARTÍCULAS Prof. Rilton Alves de Freitas Centro](https://reader034.vdocuments.com.br/reader034/viewer/2022042814/552fc0f8497959413d8b46f6/html5/thumbnails/54.jpg)